土傳病害鑒定病圃的建立方法技術(shù)

本發(fā)明專利技術(shù)公開了土傳病害鑒定病圃的建立方法，包括以下步驟：1）病原物的分離純化；2）菌落培養(yǎng)；3）二次培養(yǎng)；4）接入病圃。本發(fā)明專利技術(shù)的有益效果為：1、節(jié)省大量的培養(yǎng)基物質(zhì)，省去固體培養(yǎng)基浸泡處理、裝袋密封、高壓滅菌以及人工接菌等繁瑣過程，可節(jié)省大量成本；2、直接接入到液體培養(yǎng)基中，密封性好，不容易混入雜菌，減少了常規(guī)接種等復(fù)雜操作過程中不慎混入雜菌的感染的可能性；3、可以減少操作步驟，提高工作效率，可以大批量制備，液體查氏培養(yǎng)基易于制備，簡單可行，無需復(fù)雜操作；4、通過滴灌的方式隨水滴施進(jìn)入病圃的方法均勻性好，利于侵染寄主植物。

【技術(shù)實(shí)現(xiàn)步驟摘要】

本專利技術(shù)涉及植物病害防治領(lǐng)域，具體涉及。
技術(shù)介紹
對植物病害防治的研究，尤其是植物土傳病害防治的研究，建立合適的病圃對于研究植物的抗病性鑒定和抗病育種意義非常重大。病圃的設(shè)置與利用是進(jìn)行抗病性鑒定的基本條件，沒有重而均勻的發(fā)病條件就難以對植物品種資源的抗病性做出可靠的鑒定。合適均勻病圃的建立，一方面關(guān)系到對植物的抗病性鑒定是否準(zhǔn)確可靠，鑒定結(jié)論是否可信，能否用于指導(dǎo)科研生產(chǎn)；另一方面，對于植物的抗病育種也至關(guān)重要，它能對育種材料或品種的抗性進(jìn)行最全面、嚴(yán)格的考驗(yàn)，鑒定 出適合在生產(chǎn)中應(yīng)用的材料或品種，合適均勻的病圃可以利于促進(jìn)抗病育種的選育步伐。病圃的建立可分為天然病圃和常規(guī)人工病圃。天然病圃是指在連年耕作的常規(guī)農(nóng)田中，局部或部分面積地塊病原菌逐年積累，自然形成的重病塊或重病區(qū)，人們選擇這部分田塊作為天然病圃。天然病圃的選擇建立有其特定的缺點(diǎn)和不足①發(fā)病不均勻天然病圃土壤中病原菌含量不均勻、相差較大，表現(xiàn)為局部地塊發(fā)病很重、局部地塊發(fā)病很輕的情況，這無論對抗病性鑒定還是抗病品種選育都不準(zhǔn)確，容易造成偏差。②病原菌生理小種不可控很多土傳病害，存在不同的生理小種，各生理小種之間，致病力有所不同，所以，無論選擇致病力極強(qiáng)的生理小種還是選擇致病力極弱的生理小種，都不能很好地反映出植物的抗病性，而天然病圃中病原菌的生理小種存在不確定性，致病力過強(qiáng)或過弱都不適宜植物的抗病性鑒定和抗病品種的選育。③病圃位置存在隱患絕大多數(shù)土傳病害都屬于檢疫性病害，因?yàn)榭蒲泄ぷ鞯男枰⑼羵鞑∑詴r(shí)，一般都遵循植物檢疫的原則，做到有效杜絕病原物的外傳，保持農(nóng)業(yè)生產(chǎn)區(qū)的純凈。而天然病圃大多都在農(nóng)田區(qū)域范圍內(nèi)，具有潛在擴(kuò)散傳播的危險(xiǎn)性，使得機(jī)耕、灌溉等農(nóng)事操作及農(nóng)產(chǎn)品種子、苗木、莖桿及果實(shí)的運(yùn)輸帶來不便。常規(guī)人工病圃是指人為把病原菌從病株上分離出來，經(jīng)純化后在特定培養(yǎng)基上擴(kuò)大培養(yǎng)，待長滿整個(gè)培養(yǎng)基后，將病原菌和培養(yǎng)基一同撒施到規(guī)劃好的區(qū)域內(nèi)，建立土傳病害病圃的ー種方法。常規(guī)的人工病圃建立也有其缺點(diǎn)和不足的地方①常規(guī)人工病圃費(fèi)時(shí)耗力，耗費(fèi)大量物資。常規(guī)人工病圃需要制作大量的培養(yǎng)基，常見培養(yǎng)基有大麥、小麥、棉子殼、麥麩等的混合物，需要把這些物質(zhì)進(jìn)行浸泡處理、裝袋密封及高壓滅菌工作，用量大，費(fèi)エ費(fèi)時(shí)，消耗水電。②操作過程容易污染，對環(huán)境要求高整個(gè)培養(yǎng)基制作、滅菌、接種以及存放等均需要無菌的環(huán)境，ー不小心容易造成雜菌感染，培養(yǎng)基接種后還要需要大量潔凈的空間存放培養(yǎng)，對環(huán)境要求高。③常規(guī)人工病圃效率低下，エ效不高，エ期較長。常規(guī)人工病圃的建立需要大量的接種物，如果建立面積較大的病圃，處理起來非常麻煩，功效很低，需要連續(xù)多年才能建造成比較成熟的病圃。④常規(guī)人工病圃也存在不均勻的現(xiàn)象。人エ培養(yǎng)的培養(yǎng)基及病原菌混合物雖然可以在撒入土壌中做到盡量均勻，但是，因?yàn)槿斯づ囵B(yǎng)基多為固體團(tuán)粒狀，無法均勻撒開，且病原菌的菌絲體或孢子生長不一致，所以常規(guī)人工病圃也存在局部很重，局部很輕的情況。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路
本專利技術(shù)的目的就是針對上述現(xiàn)有技術(shù)中運(yùn)用方法繁復(fù)、成本偏高、費(fèi)エ費(fèi)時(shí)、病圃均勻性低等缺陷，提供了一種。為了實(shí)現(xiàn)上述目的，本專利技術(shù)提供的技術(shù)方案為，包括以下步驟 1)病原物的分離純化將病原物從植物病株中分離出來后，進(jìn)行單孢分離并純化后得到病原物單菌落； 2)菌落培養(yǎng)將步驟I)得到的培養(yǎng)好的病原物單菌落，用打孔器沿菌落邊緣打取直徑 為IOmm的菌塊，接種于馬鈴薯PDA培養(yǎng)基上，28°C培養(yǎng)5_7天，之后將培養(yǎng)好的病原物菌落連同馬鈴薯PDA培養(yǎng)基全部接入查氏培養(yǎng)液中進(jìn)行培養(yǎng)，并于28°C搖床培養(yǎng)4-5天，搖床轉(zhuǎn)速為120轉(zhuǎn)/分，得到孢子懸浮液，再以無菌水配制成濃度為I X IO7個(gè)/ml的病原物孢子懸浮液； 3)二次培養(yǎng)將步驟2)得到的病原物孢子懸浮液按照1:40體積比例接入到查氏培養(yǎng)液中，靜置培養(yǎng)10天，以監(jiān)測孢子量大于等于I X IO7個(gè)/ml為達(dá)到所需標(biāo)準(zhǔn)，得到可接種孢子液； 4)接入病圃將步驟3)得到的可接種孢子液按照每畝地IOOkg接種量施入病圃中，分別在植物生長的第30、50、70和90天施入。進(jìn)ー步的，所述步驟I)中，病原物為土壤習(xí)居菌，屬于土傳病害可以利用此方法。進(jìn)ー步的，所述步驟2)中，馬鈴薯PDA培養(yǎng)基中各組分比例為按照質(zhì)量比馬鈴薯甸甸糖:瓊月旨:水為100 9 9 :382。進(jìn)ー步的，所述步驟2)中，病原物單菌落接種于馬鈴薯PDA培養(yǎng)基上，280C培養(yǎng)6天。進(jìn)ー步的，所述步驟2)中，查氏培養(yǎng)液中各組分比例為按照質(zhì)量比硝酸鉀磷酸~-氣鐘:硫fe續(xù)氣化鐘硫Ife亞鐵庶糖水為2 I 0. 5 0. 5 0. 01 30 :1000。本專利技術(shù)的有益效果為本專利技術(shù)提供的技術(shù)方案，具有以下效果 1、以前的常規(guī)人工建立病圃的方法是費(fèi)時(shí)耗力，耗費(fèi)大量物資，本技術(shù)方案可以節(jié)省大量的培養(yǎng)基物質(zhì)，省去固體培養(yǎng)基浸泡處理、裝袋密封、高壓滅菌以及人工接菌等繁瑣過程，直接接入液體查氏培養(yǎng)基中即可，省時(shí)省エ，可節(jié)省大量成本； 2、以前的常規(guī)人工建立病圃的方法容易引起雜菌的感染，本技術(shù)方案直接接入到液體培養(yǎng)基中，密封性好，不容易混入雜菌，減少了常規(guī)接種等復(fù)雜操作過程中不慎混入雜菌的感染的可能性； 3、本技術(shù)方案可以減少操作步驟，提高工作效率，可以大批量制備，液體查氏培養(yǎng)基易于制備，簡單可行，無需復(fù)雜操作； 4、通過滴灌的方式隨水滴施進(jìn)入病圃的方法均勻性好，病原菌孢子可以均勻分布到土壌中，而且直接在土壌中定殖，利于侵染寄主植物，避免常規(guī)人工接種過程中在田間撒施時(shí)，因?yàn)轱L(fēng)吹日曬、紫外線輻射使部分病原菌菌絲及孢子死亡的現(xiàn)象發(fā)生。具體實(shí)施例方式實(shí)施例I : 棉花枯萎病病圃的建立 1)從棉花枯萎病株體中分離純化出枯萎病單菌落，編號(hào)為XH-I，保存?zhèn)溆茫? 2)將編號(hào)為XH-I的枯萎病單菌落接種于制備好的馬鈴薯PDA培養(yǎng)基上，置于28°C霉菌培養(yǎng)箱中培養(yǎng)5 7天，至菌落長滿整個(gè)培養(yǎng)皿； 3)沿菌落邊緣打成直徑IOmm的菌餅，在超凈工作臺(tái)上接到500ml三角錐形瓶的查氏培養(yǎng)液中，每IOOml培養(yǎng)液接入3片菌餅，每瓶接入10片菌餅(因每個(gè)三角錐形瓶裝入查氏培養(yǎng)液體積約為330ml)； 4)置于120轉(zhuǎn)/分，溫度設(shè)置為28°C的搖床上，搖培4-5天后，得到孢子懸浮液，用無·菌水調(diào)節(jié)成I X 107孢子懸浮液； 5)然后將其按1:40比例接到體積為20L密閉容器裝入4/5體積滅菌好的查氏培養(yǎng)液中，靜置培養(yǎng)10天，當(dāng)監(jiān)測孢子量ミI X IO7個(gè)/ml吋，即可接種； 6)按照姆畝地IOOkg接種量隨水滴施進(jìn)入病圃中,在整個(gè)棉花生長季節(jié)的第30天、50天、70天和90天連續(xù)施入4次。查氏培養(yǎng)液中各組分比例為按照質(zhì)量比硝酸鉀磷酸ニ氫鉀硫酸鎂氯化鉀硫酸亞鐵蔗糖水為 2 1 :0. 5 :0. 5 :0. 01 30 =IOOO0實(shí)施例2: 棉花黃萎病病圃的建立 1)從棉花黃萎病株體中分離純化出黃萎病單菌落，編號(hào)為143T-5，保存?zhèn)溆茫? 2)將編號(hào)為143T-5的黃萎病單菌落接種于制備好的PDA培養(yǎng)基上，置于28°C霉菌培養(yǎng)箱中培養(yǎng)5 7天，至菌落長滿整個(gè)培養(yǎng)皿； 3)沿菌落邊緣打成直徑IOmm的菌餅，在超凈工作臺(tái)上接到500ml三角錐形瓶的查氏培養(yǎng)液中，每IOOml本文檔來自技高網(wǎng)...

【技術(shù)保護(hù)點(diǎn)】
土傳病害鑒定病圃的建立方法，其特征在于，包括以下步驟：1）病原物的分離純化：將病原物從植物病株中分離出來后，進(jìn)行單孢分離并純化后得到病原物單菌落；？2）菌落培養(yǎng)：將步驟1）得到的培養(yǎng)好的病原物單菌落，用打孔器沿菌落邊緣打取直徑為10mm的菌塊，接種于馬鈴薯PDA培養(yǎng)基上，28℃培養(yǎng)5？7天，之后將培養(yǎng)好的病原物菌落連同馬鈴薯PDA培養(yǎng)基全部接入査氏培養(yǎng)液中進(jìn)行培養(yǎng)，并于28℃搖床培養(yǎng)4？5天，搖床轉(zhuǎn)速為120轉(zhuǎn)/分，得到孢子懸浮液，再以無菌水配制成濃度為1×107個(gè)/ml的病原物孢子懸浮液；3）二次培養(yǎng)：將步驟2）得到的病原物孢子懸浮液按照1:40體積比例接入到査氏培養(yǎng)液中，靜置培養(yǎng)10天，以監(jiān)測孢子量大于等于1×107個(gè)/ml為達(dá)到所需標(biāo)準(zhǔn)，得到可接種孢子液；4）接入病圃：將步驟3）得到的可接種孢子液按照每畝地100kg接種量施入病圃中，分別在植物生長的第30、50、70和90天施入。

【技術(shù)特征摘要】
1.土傳病害鑒定病圃的建立方法，其特征在于，包括以下步驟 1)病原物的分離純化將病原物從植物病株中分離出來后，進(jìn)行單孢分離并純化后得到病原物單菌落； 2)菌落培養(yǎng)將步驟I)得到的培養(yǎng)好的病原物單菌落，用打孔器沿菌落邊緣打取直徑為IOmm的菌塊，接種于馬鈴薯PDA培養(yǎng)基上，28°C培養(yǎng)5_7天，之后將培養(yǎng)好的病原物菌落連同馬鈴薯PDA培養(yǎng)基全部接入查氏培養(yǎng)液中進(jìn)行培養(yǎng)，并于28°C搖床培養(yǎng)4-5天，搖床轉(zhuǎn)速為120轉(zhuǎn)/分，得到孢子懸浮液，再以無菌水配制成濃度為I X IO7個(gè)/ml的病原物孢子懸浮液； 3)二次培養(yǎng)將步驟2)得到的病原物孢子懸浮液按照1:40體積比例接入到查氏培養(yǎng)液中，靜置培養(yǎng)10天，以監(jiān)測孢子量大于等于I X IO7個(gè)/ml為達(dá)到所需標(biāo)準(zhǔn)，得到可接種孢子液； 4)接入病圃將步驟3)得到的可接種孢...

【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：劉政，孫艷，余渝，林海，劉麗，陳兵，韓煥勇，王方勇，董承光，宿俊吉，
申請(專利權(quán))人：新疆農(nóng)墾科學(xué)院，
類型：發(fā)明
國別省市：