用于評價(jià)動(dòng)脈粥樣硬化潛在性的生物標(biāo)記制造技術(shù)

本發(fā)明專利技術(shù)提供了用于預(yù)測未來動(dòng)脈粥樣硬化的方法、裝置和試劑，其基于選自具有響應(yīng)于匹格列酮和羅格列酮的差異表達(dá)的６８個(gè)基因組中的基因的表達(dá)水平。本發(fā)明專利技術(shù)還公開了用于預(yù)測受試者中由抗糖尿病治療誘導(dǎo)的動(dòng)脈粥樣硬化的進(jìn)展的試劑組和生物標(biāo)記。在本發(fā)明專利技術(shù)的一個(gè)具體實(shí)施方式中，提供了一種使用來自亞急性治療的基因表達(dá)數(shù)據(jù)來預(yù)測化合物是否誘導(dǎo)動(dòng)脈粥樣硬化的方法。

【技術(shù)實(shí)現(xiàn)步驟摘要】
【國外來華專利技術(shù)】
本專利技術(shù)提供了一種區(qū)分對脂蛋白顆粒數(shù)量和分布具有有害的、促動(dòng)脈粥樣硬化作用的治療性化合物和具有抗動(dòng)脈粥樣硬化、保護(hù)作用的那些化合物的新方法。B.
技術(shù)介紹
肥胖癥和糖尿病是心血管事件的獨(dú)立風(fēng)險(xiǎn)因素，這很可能歸因于動(dòng)脈粥樣硬化進(jìn)展的加速。兩種疾病均以脂蛋白顆粒的血漿水平變化為特征，所述變化導(dǎo)致所謂的致動(dòng)脈粥樣化脂質(zhì)三聯(lián)體(低HDL-膽固醇、升高的甘油三酯以及小且致密LDL顆粒的優(yōu)勢)。對于這些代謝障礙的藥物的開發(fā)通常集中在治療增加的體重、空腹和餐后血糖、肌肉、肝和脂肪組織中受損的胰島素敏感性以及受損的胰臟功能的癥狀。動(dòng)脈粥樣硬化的動(dòng)物模型不能準(zhǔn)確地表示脂蛋白代謝的人體生理學(xué)以及斑塊的生長和發(fā)展，此外，當(dāng)臨床前評價(jià)用于糖尿病的有希望的治療性候選物時(shí)通常不使用它們。這導(dǎo)致這樣的情況，其中在臨床試驗(yàn)和上市后期間，對肥胖癥和糖尿病的治療介入導(dǎo)致幾乎觀察不到的對斑塊終點(diǎn)的作用(rimonabant，在歐洲以Acomplia銷售)或心血管事件的可能增加的風(fēng)險(xiǎn)(羅格列酮 (rosiglitazone)，以AVANDIA 銷售)。作為核激素受體的過氧化物酶體增殖物激活受體(PPAR)的α、Y和δ或β亞型是用于控制脂質(zhì)、葡萄糖和能量內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定的靶點(diǎn)。高度有效的PPARy激動(dòng)劑、PPARa/ Y雙重激動(dòng)劑、PPAR泛激動(dòng)劑以及可替換的PPAR配體例如部分激動(dòng)劑或選擇性PPAR調(diào)節(jié)劑(SPPARM)正被作為設(shè)計(jì)成改善胰島素敏感性的治療劑進(jìn)行研究。最近的臨床試驗(yàn)數(shù)據(jù)的中期分析表明PPARy激動(dòng)劑AVANDIA (羅格列酮馬來酸鹽)與增加的CV事件相關(guān)(Nissen and Wolski，“Effect of rosiglitazone on the risk of myocardial infarction and death from cardiovascular causes. "N Engl J Med. 2007356 (24) M57-71)，而結(jié)構(gòu)相關(guān)的PPARy激動(dòng)劑ActOS (匹格列酮(pioglitazone) HCl)與減少的 CV 事件相關(guān)(Lincoff et al. "Pioglitizone and risk of cardiovascular events in patients with type 2diabetes mellitus :a meta-analysis of randomized trials. "JAMA 2007298(10) :1180-8)，盡管兩種藥物對糖尿病終點(diǎn)具有類似的作用。因此，對鑒定用于治療對心血管事件具有增加的風(fēng)險(xiǎn)的代謝障礙的化合物的方法存在需要。還對鑒定除了對代謝障礙具有效力外的可以降低心血管風(fēng)險(xiǎn)的那些化合物存在需要。II.
技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路
本專利技術(shù)的一個(gè)方面提供了預(yù)測對由產(chǎn)生患者脂蛋白顆粒的數(shù)量和分布變化的治療劑引起的心血管風(fēng)險(xiǎn)的不良作用的方法。本專利技術(shù)的一個(gè)方面提供了用于評價(jià)受試者中抗糖尿病治療(療法)的動(dòng)脈粥樣硬化潛在性的生物標(biāo)記，所述生物標(biāo)記包括多個(gè)選自表2中所列出的那些基因中的每一個(gè)的表達(dá)的度量(測量值)。優(yōu)選地，所述多個(gè)基因包括至少3個(gè)、至少5個(gè)或至少8個(gè)選自表2的基因。優(yōu)選地，所述多個(gè)基因包括蘋果酸酶1 (登錄號(hào)M30596)、脂滴包被蛋白(perilipin)(登錄號(hào)AI406700)、丙酮酸羧化酶(登錄號(hào)BG376902)、乙酰輔酶A酰基轉(zhuǎn)移酶2 (線粒體3-氧代酰基輔酶A硫解酶(線粒體3-羰基輔酶A硫解酶))(登錄號(hào) BU8M88)、3-羥基-3-甲基戊二酰輔酶A還原酶(登錄號(hào)BM390399)和載脂蛋白E (登錄號(hào)J02582)中的至少一種。本專利技術(shù)的另一個(gè)方面提供了用于測試化合物是否會(huì)在測試的受試者中誘導(dǎo)動(dòng)脈粥樣硬化的方法，所述方法包括將一劑量的化合物給予至少一名測試的受試者；在所選的時(shí)間段后，從所述至少一名測試的受試者獲得生物樣品；測量所述生物樣品中至少多個(gè)選自表2中列出的那些基因的表達(dá)水平；以及利用至少包括多個(gè)測量其表達(dá)水平的基因的生物標(biāo)記來確定所述樣品是否屬于用于誘導(dǎo)動(dòng)脈粥樣硬化的陽性類別(positive class) 0 優(yōu)選地，所述多個(gè)基因包括至少3個(gè)、至少5個(gè)或至少8個(gè)選自在下面的表2中列出的那些基因。在一個(gè)實(shí)施方式中，所述生物樣品包括肝組織。在本方法的另一實(shí)施方式中，將所述表達(dá)水平測量為化合物處理的生物樣品與化合物未處理的生物樣品的Iogltl比率。在一些實(shí)施方式中，所選的時(shí)間段等于或少于約7天，更優(yōu)選地等于或少于約3天并且最優(yōu)選地等于或少于約1天。在一些實(shí)施方式中，所選的時(shí)間段可短至3小時(shí)、1小時(shí)或甚至30分鐘。本專利技術(shù)的另一個(gè)方面提供了試劑組(reagent sets)，其包括能夠評價(jià)多個(gè)選自表 2中列出的那些基因的表達(dá)量的多個(gè)多核苷酸或多肽。在一些實(shí)施方式中，所述多個(gè)基因包括選自表2中列出的那些中的至少3個(gè)基因，更優(yōu)選至少5個(gè)基因并且甚至更優(yōu)選至少8 個(gè)基因。在另一實(shí)施方式中，所述試劑組基本上由能夠評價(jià)選自表2的基因的表達(dá)量的多核苷酸或多肽組成。本領(lǐng)域技術(shù)人員能夠理解可以以任何合適的組合一起使用上文總結(jié)的實(shí)施方式以產(chǎn)生上文未明確陳述的另外的實(shí)施方式，并且這些實(shí)施方式被認(rèn)為是本專利技術(shù)的一部分。III.附圖說明圖1示出了對具有反應(yīng)用羅格列酮(實(shí)心方形)或匹格列酮(空心方形)治療的譜(分布)的虛擬患者的5年內(nèi)預(yù)測的百分粥樣斑體積(PAV)的變化。圖2示出了對具有反應(yīng)用羅格列酮(實(shí)心方形)或匹格列酮(空心方形)治療的譜(分布)的虛擬患者的5年內(nèi)預(yù)測的斑塊穩(wěn)定性變化。IV.具體實(shí)施例方式臨床數(shù)據(jù)表明羅格列酮引起循環(huán)LDL顆粒的增加和HDL顆粒的減少，而匹格列酮具有相反的作用。人心血管疾病的計(jì)算機(jī)機(jī)械模型Cardiovascular PhysioLab 平臺(tái)(更詳細(xì)地描述在專利申請公開2008-0249751A1中)被用于檢驗(yàn)這些差異成為羅格列酮和匹格列酮對CV事件頻率的相反作用的假設(shè)。在具有代表用羅格列酮和匹格列酮治療的患者的基線脂蛋白分布的虛擬患者中模擬五年內(nèi)斑塊的發(fā)展。所述模擬預(yù)測與匹格列酮治療的虛擬患者相比，羅格列酮治療的虛擬患者呈現(xiàn)出更大的粥樣斑體積和更加不穩(wěn)定的斑塊， 因此更高的CV風(fēng)險(xiǎn)。早期臨床試驗(yàn)過程中循環(huán)脂蛋白分布的早期變化可以被用作用來區(qū)分促進(jìn)斑塊生長和發(fā)展的化合物與降低斑塊生長和發(fā)展的那些化合物的生物標(biāo)記。利用DmgMatrix (包含來自成百上千個(gè)大鼠臨床前研究的基因表達(dá)譜的分子毒理學(xué)參考數(shù)據(jù)庫和信息學(xué)系統(tǒng)，Iconix Biosciences)分析用羅格列酮和匹格列酮治療的大鼠的肝基因表達(dá)發(fā)現(xiàn)了與所觀察到的臨床數(shù)據(jù)一致的基因表達(dá)差異。雖然用于PPAR γ 的分子靶不在肝臟中，但是它代表了整個(gè)動(dòng)物的代謝變化的效果，其影響肝臟脂蛋白的產(chǎn)生和清除。這些基因可以被用作用來預(yù)測在人類中觀察到的脂蛋白顆粒的變化和預(yù)測被用于治療糖尿病或肥胖癥的癥狀的任何分子的CV風(fēng)險(xiǎn)的生物標(biāo)記。在Cardiovascular PhysioLab 平臺(tái)中模擬脂蛋白顆粒的數(shù)量和大小的確定變化的效果，所述平臺(tái)為一種脂蛋白代謝以及斑塊生長和發(fā)展的機(jī)械模型。表1示出了 LDL-C 和HDL-C的變化以及LDL顆粒和HDL顆粒的改變，本文檔來自技高網(wǎng)...

【技術(shù)保護(hù)點(diǎn)】
１．一種用于評價(jià)受試者中抗糖尿病治療的動(dòng)脈粥樣硬化潛在性的生物標(biāo)記，所述生物標(biāo)記包括多個(gè)選自表２中列出的那些基因的每一個(gè)的表達(dá)的度量。

【技術(shù)特征摘要】
【國外來華專利技術(shù)】...

【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：卡皮爾·加德卡爾，
申請(專利權(quán))人：安特魯斯公司，
類型：發(fā)明
國別省市：US