公開了大孔珠粒和制備與使用這種大孔珠粒的方法，其中所述珠粒對于在多重檢測中的用途是可區別的。優選地，所述珠粒可通過兩種或更多種獨特的熒光染料來區別，且至少一些珠粒是磁響應的。在一種優選的形式中，一些大孔珠粒具有與外部表面具有不同部分的內部孔，使得殊粒具有粘附的不同官能團。
【技術實現步驟摘要】
【國外來華專利技術】
本專利技術涉及特別可用于多重檢測的大孔粒子，以及這種粒子的制造方法和使用方法。
技術介紹
從20世紀50年代后期開始，一直在進行對大孔聚(苯乙烯-二乙烯基苯)微球的研究和開發。這些大孔微球具有與原子、離子和分子相互作用的能力。一般而言，大孔微球為孔徑尺寸超過約20nm的微球。這些大孔微球為多孔的事實造成了在大孔微球的內部 “孔”以及外部表面上形成相互作用的獨特能力。大孔微球的許多應用集中于用作離子交換樹脂和用于液相色譜中。這些大孔微球的官能化導致它們用作分離介質。苯乙烯/二乙烯基苯共聚物的內部組成對于引入具有已知高交換能力的化合物和分子以及與具有已知高交換能力的化合物和分子反應是理想的。 還已發現大孔微球通過物理吸附感興趣的材料在生物應用中的用途，其通常使用反相離子交換色譜，但是其他方法也是可能的并已有記載。陽離子交換樹脂已通過用磺酸官能化大孔微球而制得，其可用于酸催化，并在文獻中充分記載。在制備大孔微球的一種方法中，合成通過使用惰性稀釋劑的懸浮聚合而完成。一旦聚合完成，除去惰性稀釋劑，多孔結構保持在聚合物粒子內。在該方法中，制得的粒子相當大，但是多分散的。這些特性對于在色譜中使用(其中流動條件和填充效率是重要因素) 是不合意的。制備均勻聚合物大孔微球的另一方法采用種子乳液聚合以制備均勻的大孔微球。 該方法的一個變型采用線性聚苯乙烯與溶劑或非溶劑型稀釋劑并制得大孔微球，取決于線性聚合物是與溶劑還是與非溶劑組合，該大孔微球具有控制孔體積和比表面積的一些能力。然而，需要相對較高水平的交聯劑來產生具有高表面積的粒子。臨床樣本的分析在科學和醫學中是重要的。本領域已知多種確定樣本的定性和/ 或定量特性的檢測。通過一步檢測法檢測多種分析物或可分別識別一種或更多種分析物的特性是已知的，但其具有一些局限性，如通常需要較長時間以能夠檢測和分類多種分析物和在檢測中可獲得的低靈敏度(低信號)。在單個檢測過程中進行樣本的同時、多種詢問的能力稱為“多重”，且實施這種能力的方法為“多重檢測”。具有多重檢測能力的一種公知的現有技術為流式細胞術。流式細胞術為使用稱為流式細胞儀的儀器基于粒子的光學特性分析流體混合物中的特定粒子的光學技術。有關流式細胞術的背景信息可見于Siapiro/Tractical Flow Cytometry”，第三版(Alan R.LissJnc. 1995)；以及 Melamed 等人，“Flow Cytometry and Sorting”，第二版(Wiley-Liss 1990)，所述文獻通過引用的方式并入本文。流式細胞儀以流體動力學方式將粒子的流體懸浮體匯集成細流，使得粒子以基本上單一縱列(file)的形式流下該細流并通過檢查區域。當粒子流過檢查區域時，如激光束的聚焦光束照射粒子。當光與粒子相互作用時，流式細胞儀內的光學檢測器測量光的某些特性。常用的流式細胞儀，如可購自Luminex Corporation of Austin, Texas的檢測體系可在一種或更多種波長下測量前向光散射(通常與照射中的粒子的折射率和尺寸相關)、 側向光散射(通常與粒子尺寸相關)和粒子熒光。這種多重檢測體系的另一實例為可購自Luminex Corporation of Austin,Texas 的xMAP 技術。所述xMAP技術使用一類染色粒子，在該染色粒子上可施加一種或更多種檢測特異性試劑(例如通過偶聯到粒子表面上的一種或更多種官能團)。粒子平臺采用通過熒光可區別的不同粒子組。例如，粒子組可通過熒光波長、熒光強度、在不同波長下的熒光強度比等而得以區別。通常，熒光變化可通過將不同染料和/或熒光團引入粒子中和/ 或偶聯至粒子表面來整合。在一些實施方式中，粒子組可另外通過尺寸和/或形狀來區別。 在任何情況下，具有可區別的載體粒子的粒子平臺通常是有利的，因為其利用流體基動力學使數種不同的分析物與檢測特異性試劑結合。通常，每一種不同的粒子組可具有偶聯至其上的不同試劑。不同試劑可選擇性地與流體樣品中的不同分析物反應。換言之，每一種不同的試劑可與樣品中的一種分析物反應，但可以基本上不與樣品中的任何其他分析物反應。在一些情況中，可使一種或更多種另外的可檢測試劑與一種或更多種分析物反應。所述一種或更多種另外的試劑可通過熒光 (例如熒光波長、熒光強度等)進行檢測(并有可能進行區別)。除了提高的反應動力學之外，多重檢測平臺的使用有利地允許使用者簡單地將一種或更多種粒子亞組加入樣品所暴露的群中，或者將一種或更多種粒子亞組從樣品所暴露的群中除去，從而改變在研究之中的分析物。上述技術和方法不能在定量的單個或多重生物檢測體系中利用大孔微球。Tuncel 等人，“Electron microscopic observation of uniform macroporous particles. I. Effect of seed latex type and diluent, "Journal of Applied Polymer Science，第 71 卷，第 14 期，1999，第 2271-2290 頁；Ugelstad 的美國專利 No. 4，459，378 ；和 El-Aasser ^A "Synthesis and Characterization of Monodisperse Porous Polymer Particles, "Journal of Polymer Science =Part A，第 30 卷，1992，第 235-244 頁描述了合成大孔微球的方法。美國專利 No. 7，141,431 ；5, 981, 180 ；6，632，526 ；6, 733,812 ； 7, 241, 883和7，274，316描述了用于多重生物檢測的各種體系和方法。美國專利 No. 6，773，812描述了磁響應珠粒的制造和使用方法。本文引用的所有文獻以引用方式并入本文，如同由法律或規定所允許的最大程度上地在本文中完全闡述那樣。
技術實現思路
本專利技術使得能夠在多重檢測中使用大孔粒子并提供其制備和使用方法。這種大孔微球可通過如種子乳液、分散聚合、微乳液(mini-emulsion)、懸浮聚合的方法以及本領域技術人員公知的其他常規技術制得。廣義而言，本文的大孔粒子具有多個大孔，其中粒子可例如通過包含一種或更多種熒光染料或者借助尺寸差異或光散射性質而彼此區別開來。在寬泛的形式中，進行多重檢測的方法包括提供一組珠粒，其中至少一些珠粒是大孔的，其中所述珠粒可區分為至少兩類。多重檢測的方法包括將所述珠粒暴露于兩種或更多種感興趣的分析物，并確定哪類珠粒受所述感興趣的分析物的影響。通常，根據本專利技術的制備大孔珠粒的方法起始于提供種粒子，將所述種粒子與單體和交聯劑混合以使該種粒子溶脹。例如通過加熱、超聲、產生自由基或其他公知的引發聚合的常規方法聚合經溶脹的粒子。然后用合適的溶劑洗滌這些粒子以暴露大孔。優選地， 僅使用低水平的交聯劑(例如< 15% )，這使得染料或其他區別材料(如磁性材料)更易于引入。本專利技術的大孔珠粒可制備為用于多重檢測中是獨特地可區別的。可在粒子形成過程中引入可區別的熒光染料。或者，熒光染料可在粒子形成之后與粒子締合。材料本文檔來自技高網...
【技術保護點】
１．適用于多重檢測中的多個粒子，其包含：一組具有低水平的交聯劑的所述粒子，該一組粒子具有多個大孔并結合一種或更多種熒光染料，且可區別于其他所述粒子。
【技術特征摘要】
【國外來華專利技術】...
【專利技術屬性】
技術研發人員：詹森·貝德雷，
申請(專利權)人：盧米耐克斯公司，
類型：發明
國別省市：US
還沒有人留言評論。發表了對其他瀏覽者有用的留言會獲得科技券。