本發(fā)明專利技術(shù)的實(shí)施方案包括通過(guò)使用分離的或部分純化的糖基轉(zhuǎn)移酶和／或翻譯后修飾蛋白、包含糖基轉(zhuǎn)移酶和／或翻譯后修飾蛋白的細(xì)胞提取物和／或在包含一種或多種糖基轉(zhuǎn)移酶和／或翻譯后修飾蛋白的細(xì)胞中改變極端酶的酶活性或溶解性或翻譯后修飾目標(biāo)蛋白質(zhì)的方法。
【技術(shù)實(shí)現(xiàn)步驟摘要】
【國(guó)外來(lái)華專利技術(shù)】
本專利技術(shù)大體上涉及生物
更具體地說(shuō)，本專利技術(shù)的實(shí)施方案涉及蛋白質(zhì)的翻譯后修飾。
技術(shù)介紹
直到最近，人們認(rèn)為細(xì)菌通常并未使其蛋白質(zhì)糖基化。雖然已報(bào)道一些例子，但這些被當(dāng)作罕見(jiàn)的異常情況而摒棄(Borman 2006)。現(xiàn)在人們逐漸接受細(xì)菌以比真核生物可能更多的方式使其蛋白質(zhì)糖基化，盡管這種看法尚未得到廣泛認(rèn)同(Schaffer等，2001)。 在最近的評(píng)論文章中聲明，已顯示糖基化有助于蛋白質(zhì)穩(wěn)定性、調(diào)節(jié)物理性質(zhì)(如溶解性)、保護(hù)蛋白質(zhì)免受水解、改變活性和靶向外化(Upreti等，200 。1994年，一組人員從酸熱脂環(huán)酸芽孢桿菌(Alicyclobacillus acidocaldarius)中純化淀粉酶并表示該淀粉酶在活性生長(zhǎng)期間與細(xì)胞結(jié)合(khwermarm等，1994)。隨著培養(yǎng)進(jìn)入穩(wěn)定期，細(xì)胞將活性可溶糖基化形式的淀粉酶釋放至培養(yǎng)基中(khwermarm等，1994)。未嘗試比較各種形式的淀粉酶的活性。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路
本專利技術(shù)的實(shí)施方案包括通過(guò)用化學(xué)糖基化的方式和/或分離的或部分純化的糖基轉(zhuǎn)移酶和/或翻譯后修飾蛋白、包含糖基轉(zhuǎn)移酶和/或翻譯后修飾蛋白的細(xì)胞提取物，和 /或在包含一種或多種糖基轉(zhuǎn)移酶和/或翻譯后修飾蛋白的細(xì)胞中改變極端酶或其它蛋白質(zhì)的酶活性的方法。本專利技術(shù)的實(shí)施方案包括翻譯后修飾蛋白質(zhì)的方法。在一些實(shí)施方案中，翻譯后修飾可通過(guò)使用糖基化(包括化學(xué)糖基化)、聚乙二醇化、磷酸化、甲基化或其它形式的翻譯后修飾的方式進(jìn)行，和/或是分離的或部分純化的糖基轉(zhuǎn)移酶和/或翻譯后修飾蛋白，包含糖基轉(zhuǎn)移酶和/或翻譯后修飾蛋白的細(xì)胞提取物，和/或在包含一種或多種糖基轉(zhuǎn)移酶和/或翻譯后修飾蛋白的細(xì)胞中。本專利技術(shù)的實(shí)施方案包括翻譯后修飾蛋白，所述翻譯后修飾蛋白包括但不限于SEQ ID NOS :307(celB)、331(內(nèi)切葡聚糖酶C)、333(肽聚糖N-乙酰氨基葡萄糖脫乙酰酶)、335 ( β -半乳糖苷酶)、337 (阿拉伯呋喃糖苷酶)和 338 ( α -木糖苷酶)。因此實(shí)施方案包括上述蛋白質(zhì)的糖基化形式。本專利技術(shù)的第一方面涉及從極端微生物分離的酶，所述酶在溫度高于約80°C和pH 低于約2時(shí)顯示最佳的酶活性。本專利技術(shù)的另一方面涉及來(lái)源于酸熱脂環(huán)酸芽孢桿菌(ATCC 27009)的半纖維素酶。本專利技術(shù)的再一方面涉及用于降解復(fù)合生物分子的酶。 更進(jìn)一步地，本專利技術(shù)的再一方面涉及可用于同時(shí)糖化和發(fā)酵過(guò)程以將生物質(zhì)糖轉(zhuǎn)化為終產(chǎn)物的酶。本專利技術(shù)的再一方面涉及處理生物質(zhì)的方法，所述方法包括以下步驟提供具有生物質(zhì)糖的生物質(zhì)源，用來(lái)源于酸熱脂環(huán)酸芽孢桿菌(ATCC 27009)的水溶性半纖維素酶預(yù)處理生物質(zhì)以產(chǎn)生終產(chǎn)物。本專利技術(shù)的再一方面涉及制備半纖維素酶的方法，所述方法包括以下步驟提供酸熱脂環(huán)酸芽孢桿菌(ATCC 27009)源；在有上清液的微生物營(yíng)養(yǎng)培養(yǎng)基中培養(yǎng)酸熱脂環(huán)酸芽孢桿菌(ATCC 27009)；從營(yíng)養(yǎng)培養(yǎng)基上清液中分離酸熱脂環(huán)酸芽孢桿菌的細(xì)胞；以及從營(yíng)養(yǎng)培養(yǎng)基上清液回收并純化來(lái)源于酸熱脂環(huán)酸芽孢桿菌(ATCC 27009)的半纖維素酶。而且，本專利技術(shù)的再一方面涉及水解多糖的方法，所述方法包括以下步驟提供來(lái)源于微生物的水溶性半纖維素酶；在PH低于約2時(shí)用水溶性半纖維素酶進(jìn)行多糖的水解。以下將更詳細(xì)地描述本專利技術(shù)的這些和其它方面。附圖簡(jiǎn)述圖 1 分另Ij 描述了 SEQ ID NO :1 (RAAC00164)與 ref | YP_001223775. 11、 ref|YP_729290. 1 |、ref|ZP_01084440. 1 |、ref|ZP_01079150. 1 | 禾口 ref |ZP_01471594. l| (SEQ ID NOS :3_7)之間的序列比對(duì)，所述序列均具有對(duì)表1中SEQ IDN0:1指定的功能。用“*”表示所有序列中的保守氨基酸，并且用“”表示一般保守氨基酸。圖 2 分別描述了 SEQ ID NO 18 (RAAC00517)與 ref | ZP_00589533. 11、 refIZP_01386435. 11、ref|YP_378533. 11、ref|ZP_00513158. 11 和 ref|YP_374173. 11(SEQ ID NOS 20-24)之間的序列比對(duì)，所述序列均具有對(duì)表1中SEQ ID NO :18指定的功能。用 “*”表示所有序列中的保守氨基酸，并且用“”表示一般保守氨基酸。圖 3 分別描述了 SEQ ID NO 35 (RAAC00650)與 ref | YP_001127183. 11、 refIΖΡ_02038504. 1 |、ref|ΥΡ_00164798 7. 1 |、ref|YP_001377 1 1 4· 1 | 禾口 ref |NP_835081. l| (SEQ ID NOS :37-41)之間的序列比對(duì)，所述序列均具有對(duì)表1中SEQ ID N0:35指定的功能。用“*”表示所有序列中的保守氨基酸，并且用“”表示一般保守氨基酸。圖 4 分別描述了 SEQ ID NO 52 (RAAC00991)與 ref | ZP_02327412. 11、 ref I ΥΡ_001487207. 11、ref | ΖΡ_01172765. 11、ref | NP_831314. 11 和 ref | NP_844008. 11 (SEQ ID NOS 54-58)之間的序列比對(duì)，所述序列均具有對(duì)表1中SEQ ID NO :52指定的功能。用 “*”表示所有序列中的保守氨基酸，并且用“”表示一般保守氨基酸。圖 5A 和 5B 分別描述了 SEQ ID NO :69 (RAAC01110)與 ref | YP_001519856. 11、ref |YP_711688. 11、ref | ZP_01331931. 11、ref | YP_001076955. 11 和 ref | YP_336440. 11 (SEQ ID NOS 71-75)之間的序列比對(duì)，所述序列均具有對(duì)表1中SEQ ID NO :69指定的功能。用 “*”表示所有序列中的保守氨基酸，并且用“”表示一般保守氨基酸。圖 6A 禾口 6B 分別描述了 SEQ ID NO 86 (RAAC01166)與 gb|AAR99615. 1|、 gb|ABM68334. 2|,ref |ZP_01372248. 11、ref | ΥΡ_519555· 11 和 ref | ΖΡ_022;34077· 11 (SEQ ID NOS 88-92)之間的序列比對(duì)，所述序列均具有對(duì)表1中SEQ ID NO :86指定的功能。用“*” 表示所有序列中的保守氨基酸，并且用“”表示一般保守氨基酸。圖 7 分另Ij 描述了 SEQ ID NO 103 (RAAC01167)與 ref | ZP_01515212. 11、 refIΥΡ_001277643. 1 |、ref|ΖΡ_0229 1400. 1 |、ref|ΥΡ_001633727· 1 | 禾口 ref |YP_001434357. 1 (SEQ ID NOS :105-109)之間的序列比對(duì)，所述序列均具有對(duì)表1中 SEQ ID NO :1本文檔來(lái)自技高網(wǎng)...
【技術(shù)保護(hù)點(diǎn)】
１．一種分離的和／或純化的糖基化蛋白，其中所述糖基化蛋白包括ＳＥＱ ＩＤ ＮＯ：３０７。
【技術(shù)特征摘要】
【國(guó)外來(lái)華專利技術(shù)】...
【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：D·N·湯普森，
申請(qǐng)(專利權(quán))人：巴特勒能源同盟有限公司，
類型：發(fā)明
國(guó)別省市：US
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