一種通過顯色基質法測定注射級大豆磷脂中細菌內毒素含量的方法技術

本發明專利技術涉及一種檢測注射級大豆磷脂中細菌內毒素含量的靈敏、準確的方法。屬于藥用輔料的細菌內毒素檢測領域。方法是用鱟試劑顯色基質法測定注射級大豆磷脂中的細菌內毒素含量。精密稱定大豆磷脂，用細菌內毒素檢查用水配制成１０ｍｇ／ｍｌ的大豆磷脂溶液，再稀釋至不超過最大有效稀釋倍數的各稀釋級，干擾試驗結果表明１０ｍｇ／ｍｌ的大豆磷脂溶液經三倍以上稀釋，對顯色基質鱟試劑定量內毒素含量的測定不存在干擾作用，可用該稀釋級計算大豆磷脂中的細菌內毒素值。本方法為注射級大豆磷脂的生產和科研提供了控制和測定細菌內毒素的方法。

【技術實現步驟摘要】

本專利技術屬于藥用輔料的細菌內毒素檢測領域，涉及一種藥物輔料大豆磷脂中細菌 內毒素的檢測方法。
技術介紹
大豆磷脂是一種植物來源的磷脂，具有脂肪和膽固醇含量低、乳化穩定性好、成本 低等優點，醫藥行業中常用精制的天然磷脂作為制備各種藥物制劑的乳化劑和輔料。其中， 磷脂作為靜脈注射脂肪乳注射液的乳化劑是其最常用的醫藥用途之一。磷脂作為其乳化 劑，能經受熱壓滅菌不被破壞，對生物體毒性很小，能量高，乳化效果好，形成油粒高度分散 而均勻，性能優于其它乳化劑。磷脂作為形成脂質體雙分子膜的基本材料是其又一常用的 醫藥用途。磷脂具有安全無毒、乳化性能好的特性，其典型的雙親分子特性，使脂質體具有 親油親水性，包裹范圍更廣。出于安全性考慮，大豆磷脂作為注射劑的乳化劑或輔料時，為保證終產品的質量， 有必要對其進行細菌內毒素含量的檢查，控制其中細菌內毒素的限度。目前沒有文獻報道 關于磷脂中的細菌內毒素的含量的測定方法。
技術實現思路
本專利技術的目的是提供一種靈敏、可靠的方法，可快速檢查出注射級大豆磷脂中的 細菌內毒素含量。技術方案本專利技術注射級大豆磷脂的細菌內毒素的檢查方法是精密稱定注射級大 豆磷脂，用細菌內毒素檢查用水溶解成lOmg/mL的大豆磷脂溶液，稀釋至不超過最大有效 稀釋倍數(MVD)的各稀釋級的稀釋液備用。先建立細菌內毒素標準曲線，然后參照中國藥 典2010版附錄“細菌內毒素檢查法”，檢查各稀釋級磷脂溶液的細菌內毒素，對各稀釋級進 行干擾試驗，選擇回收率最接近100%的稀釋倍數進行內毒素檢測，可用該稀釋級計算磷脂 中的細菌內毒素值。一、供試品的制備及最大可稀釋倍數(MVD)的確定樣品在無菌條件下精密稱定，用細菌內毒素檢查用水(BET水)溶解成初始溶液。ΓΤ供試品的最大可稀釋倍數按下面公式計算MVD = TΛ式中c為樣品濃度；L為樣品的細菌內毒素限制；λ為細菌內毒素標準曲線最低 濃度。二、細菌內毒素標準曲線的建立和可靠性測試內毒素標準品溶液的制備用BET水將細菌內毒素標準品稀釋為10EU/mL的內毒 素溶液，再稀釋為0. lEU/mL的內毒素溶液，以0. lEU/mL的內毒素溶液為母液稀釋為不同的 濃度梯度。配置好的內毒素標準品溶液在4小時內用完。3標準曲線的線性相關系數Irl > 0.980時，實驗有效，|r| < 0. 980時，實驗無效。三、細菌內毒素檢查的操作步驟取無熱原試管，加入IOOyL細菌內毒素檢查用水、內毒素標準品溶液或供試品； 再加入100 μ L鱟試劑溶液，混勻，37°C溫育40分鐘；溫育結束，加入100 μ L顯色基質溶液， 混勻，37°C溫育6分鐘；溫育結束，加入500 μ L偶氮化試劑1溶液，混勻；加入500 μ L偶氮 化試劑2溶液，混勻；加入500 μ L偶氮化試劑3溶液，混勻，靜置5分鐘，于M5nm波長處讀 吸光度值。每管做2-4個平行。四、干擾試驗鱟試驗法受環境因素影響較大，培養條件、操作環境可能引起結果差異，且大豆磷 脂為藥典中未建立內毒素檢查的品種，因此需先進行干擾實驗，步驟如下1.選擇標準曲線中點或一個靠近中點的內毒素濃度(設為λω)，作為磷脂干擾試 驗中添加的內毒素濃度，配置含λω內毒素的磷脂溶液為陽性對照，測量出該溶液的內毒素 濃度，為Cs。2.測量出未添加外源內毒素的磷脂溶液內毒素濃度，為Ct。3.按公式計算該實驗條件下的回收率Κ =本文檔來自技高網...

【技術保護點】
一種顯色基質法檢測注射級大豆磷脂的細菌內毒素含量的方法，其特征在于精密定量稱取注射級大豆磷脂原料，用細菌內毒素檢查用水稀釋成１０ｍｇ／ｍＬ作為原液，超聲溶解，再稀釋至不超過最大有效稀釋倍數的各級稀釋液，對各稀釋級溶液進行干擾試驗，選擇回收率最接近１００％的稀釋倍數進行內毒素檢測，可用該稀釋級計算大豆磷脂中的細菌內毒素值。

【技術特征摘要】
1.一種顯色基質法檢測注射級大豆磷脂的細菌內毒素含量的方法，其特征在于精密定 量稱取注射級大豆磷脂原料，用細菌內毒素檢查用水稀釋成lOmg/mL作為原液，超聲溶解， 再稀釋至不超過最大有效稀釋倍數的各級稀釋液，對各稀釋級溶液進行干擾試驗，選擇回 收率最接近100 %的稀釋倍數進行內毒素檢測，可用該稀釋級計算大豆磷脂中的細菌內毒素值。2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于準確稱取注射級大豆磷脂原料0.0090 0. OllOg，用細菌內毒素檢查用水稀釋成lOmg/mL的原液。3.根據權利要求2所述的方法...

【專利技術屬性】
技術研發人員：黃健花，呂名蕊，王興國，
申請(專利權)人：江南大學，
類型：發明
國別省市：32[中國|江蘇]