【技術實現步驟摘要】
本專利技術涉及液相色譜分析方法，尤其涉及一種混合多肽分析方法。
技術介紹
1、多肽是由氨基酸通過肽鍵連接而成的生物活性分子，廣泛存在于生物體內，具有重要的生物學功能和醫藥學價值。近年來，隨著生物技術和醫藥工業的快速發展，多肽在新藥開發、診斷試劑、功能性食品等領域的應用日益廣泛。然而，多肽分子的復雜性以及制備過程中經常生成的混合多肽，給其分離純化帶來了巨大挑戰。
2、目前，多肽分離的主要方法包括以下幾種：
3、1、電泳技術，如毛細管電泳和二維電泳等都常用于分析和分離多肽樣品，該方法具有高分辨率的特點，但設備成本較高，難以大規模應用于工業生產，且電泳過程中的分離條件可能導致部分多肽降解；
4、2、超濾技術，利用膜的孔徑選擇性來分離不同分子量的多肽，該方法操作簡便，適合大規模分離，但對于分子量相近的多肽，其分離精度較低，且長期使用可能存在膜污染和堵塞問題；
5、3、反相高效液相色譜，是以多肽的疏水性差異為基礎的分離方法。通過改變流動相中有機溶劑的濃度，可以實現多肽的梯度洗脫分離。然而，對于復雜的多肽混合物，該方法可能需要多次分級分離，操作復雜且時間成本較高。同時，高濃度有機溶劑可能對多肽的活性造成影響；
6、4、體積排阻色譜，是基于分子大小和形狀差異的一種經典分離技術，樣品通過含有特定孔徑凝膠的固定相時，大分子優先流出，小分子因進入凝膠孔而滯留，但該方法的分辨率有限，特別是對于分子量接近的多肽，分離效果較差。
7、綜上所述，現有多肽分離技術在分辨率、操作成本和適用
技術實現思路
1、專利技術目的：本專利技術的目的是提供一種可分離混合多肽中不同種類多肽的分析方法。
2、技術方案：本專利技術所述混合多肽分析方法，包括以下步驟：
3、(1)制備待測混合多肽樣品；
4、(2)在高效液相色譜儀上設置色譜條件的參數；
5、(3)將所述待測樣品溶液注入高效液相色譜儀，分析并記錄色譜圖。
6、優選的，本專利技術所述混合多肽分析方法，步驟2中在高效液相色譜儀上設置的色譜條件參數，包括：
7、(21)色譜柱，混合模式的體積排阻色譜柱；
8、(22)洗脫液，包括流動相a和流動相b，流動相a為三氟乙酸-乙腈溶液，所述三氟乙酸-乙腈溶液中三氟乙酸的濃度為0.05-0.2％，流動相b為三氟乙酸-水溶液，所述三氟乙酸-水溶液中三氟乙酸的濃度為0.05-0.2％；
9、(23)洗脫方式，等度洗脫，其中流動相a含量為10-50％：流動相b含量為50-90％，流速為0.3-0.7ml/min；
10、(24)洗脫溫度，柱溫為23-27℃；
11、(25)檢測波長，波長為272-280nm。
12、優選的，本專利技術所述混合多肽分析方法，步驟21所述混合模式的體積排阻色譜柱為sepax?biomix?sec色譜柱，規格為7.8×300mm，3μm，步驟22所述洗脫液中，流動相a中三氟乙酸的濃度為0.08-0.12％，流動相b中三氟乙酸的濃度為0.08-0.12％；步驟23所述流動相a含量為25-35％，流動相b含量為65-75％，流速為0.4-0.6ml/min；步驟24所述柱溫為24-26℃；步驟25檢測波長為275-277nm。
13、優選的，本專利技術所述混合多肽分析方法，其特征在于，步驟1所述待測混合多肽樣品中，各多肽成分的相對分子量差異不大于1000da。
14、優選的，本專利技術所述混合多肽分析方法，步驟3中，注入到所述高效液相色譜儀中的樣品體積為15-25μl，檢測過程中，混合多肽的分離度不小于0.6。
15、優選的，本專利技術所述混合多肽分析方法，所述高效液相色譜儀包括安捷倫1260高效液相色譜儀，配置紫外檢測器。
16、有益效果：與現有技術相比，本專利技術具有如下顯著優點：1、可以有效分離混合多肽中分子量接近的不同多肽成分；2、可以有效進行混合多肽各組分分析而無需聯用其他方法。
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1.一種混合多肽分析方法，其特征在于，包括以下步驟：
2.根據權利要求1所述混合多肽分析方法，其特征在于，步驟2中在高效液相色譜儀上設置的色譜條件參數，包括：
3.根據權利要求2所述混合多肽分析方法，其特征在于，步驟21所述混合模式的體積排阻色譜柱為Sepax?BioMix?SEC色譜柱，規格為7.8×300mm，3μm，
4.根據權利要求2所述混合多肽分析方法，其特征在于，步驟22所述洗脫液中，流動相A中三氟乙酸的濃度為0.08-0.12％，流動相B中三氟乙酸的濃度為0.08-0.12％。
5.根據權利要求2所述混合多肽分析方法，其特征在于，步驟23所述流動相A含量為25-35％，流動相B含量為65-75％，流速為0.4-0.6mL/min。
6.根據權利要求2所述混合多肽分析方法，其特征在于，步驟24所述柱溫為24-26℃。
7.根據權利要求2所述混合多肽分析方法，其特征在于，步驟25檢測波長為275-277nm。
8.根據權利要求1所述混合多肽分析方法，其特征在于，步驟1所述待測混合多肽樣品
9.根據權利要求1所述混合多肽分析方法，其特征在于，步驟3中，注入到所述高效液相色譜儀中的樣品體積為15-25μL，檢測過程中，混合多肽的分離度不小于0.6。
10.根據權利要求1所述的混合多肽分析方法，其特征在于，所述高效液相色譜儀包括安捷倫1260高效液相色譜儀，配置紫外檢測器。
...【技術特征摘要】
1.一種混合多肽分析方法，其特征在于，包括以下步驟：
2.根據權利要求1所述混合多肽分析方法，其特征在于，步驟2中在高效液相色譜儀上設置的色譜條件參數，包括：
3.根據權利要求2所述混合多肽分析方法，其特征在于，步驟21所述混合模式的體積排阻色譜柱為sepax?biomix?sec色譜柱，規格為7.8×300mm，3μm，
4.根據權利要求2所述混合多肽分析方法，其特征在于，步驟22所述洗脫液中，流動相a中三氟乙酸的濃度為0.08-0.12％，流動相b中三氟乙酸的濃度為0.08-0.12％。
5.根據權利要求2所述混合多肽分析方法，其特征在于，步驟23所述流動相a含量為25-35％，流動相b含量為65-75％，流速為0.4...
【專利技術屬性】
技術研發人員：陶柳，王帥帥，
申請(專利權)人：蘇州賽分科技股份有限公司，
類型：發明
國別省市：
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