本發(fā)明專利技術涉及包含細胞穿透結構域和底物結合結構域的融合多肽。另外，本發(fā)明專利技術涉及表達這些融合多肽的經(jīng)遺傳修飾的細胞以及這些融合多肽用于將物質(zhì)引入至靶細胞中的用途。
【技術實現(xiàn)步驟摘要】
【國外來華專利技術】
技術介紹
技術實現(xiàn)思路
【技術保護點】
1.融合多肽，其包含至少三種功能結構域或由至少三種功能結構域組成：
2.根據(jù)權利要求1所述的融合多肽，其中所述細胞穿透結構域包含以下或由以下組成：選自SEQ?ID?NO.:1至24的至少一種氨基酸序列或與選自SEQ?ID?NO.:1至24的氨基酸序列具有大于90％、優(yōu)選至少91％、優(yōu)選至少92％、優(yōu)選至少93％、優(yōu)選至少94％、優(yōu)選至少95％、優(yōu)選至少96％、優(yōu)選至少97％、優(yōu)選至少98％、優(yōu)選至少99％序列同一性的氨基酸序列。
3.根據(jù)前述權利要求中任一項所述的融合多肽，其中所述信號序列是包涵體促進序列或分泌序列，優(yōu)選革蘭氏陰性細菌的IV型或II型分泌的分泌序列。
4.根據(jù)前述權利要求中任一項所述的融合多肽，其中所述信號序列包含以下或由以下組成：選自SEQ?ID?NO.:27和28的至少一種氨基酸序列或與選自SEQ?ID?NO.:27和28的氨基酸序列具有至少90％、優(yōu)選至少91％、優(yōu)選至少92％、優(yōu)選至少93％、優(yōu)選至少94％、優(yōu)選至少95％、優(yōu)選至少96％、優(yōu)選至少97％、優(yōu)選至少98％、優(yōu)選至少99％序列同一性的氨基酸序列。
>5.根據(jù)前述權利要求中任一項所述的融合多肽，其中所述融合多肽包含接頭結構域，并且其中6.根據(jù)前述權利要求中任一項所述的融合多肽，其中與所述底物結合結構域非共價結合的底物是長度為3至3,000,000個堿基對，優(yōu)選長度為3,000至30,000個堿基對，尤其優(yōu)選長度為30,000至300,000個堿基對的DNA或RNA。
7.根據(jù)前述權利要求中任一項所述的融合多肽，其中所述融合多肽包含以下或由以下組成：選自SEQ?ID?NO.:32至99的氨基酸序列或與選自SEQ?ID?NO.:32至99的氨基酸序列具有至少90％、優(yōu)選至少91％、優(yōu)選至少92％、優(yōu)選至少93％、優(yōu)選至少94％、優(yōu)選至少95％、優(yōu)選至少96％、優(yōu)選至少97％、優(yōu)選至少98％、優(yōu)選至少99％序列同一性的氨基酸序列。
8.根據(jù)前述權利要求中任一項所述的融合多肽，其中所述融合多肽包含五種功能結構域i)至v)或由五種功能結構域i)至v)組成，
9.重組核酸分子，其編碼根據(jù)前述權利要求中任一項所述的融合多肽。
10.經(jīng)遺傳修飾的細胞，其包含根據(jù)權利要求9所述的重組核酸分子，其中所述細胞能夠表達根據(jù)權利要求1至8中任一項所述的融合多肽，優(yōu)選地，其中所述細胞選自大腸桿菌(Escherichia?coli)、需鈉弧菌(Vibrio?natrigens)、釀酒酵母(Saccheromycescerevisiae)、黑曲霉(Aspergillus?niger)、綠藻、微藻、HEK?T293和中國倉鼠卵巢細胞(CHO)。
11.用于將物質(zhì)引入至細胞中的方法，優(yōu)選引入DNA、RNA或其混合物，所述方法包括以下步驟：
12.根據(jù)權利要求11所述的方法，其中被引入所述物質(zhì)的細胞選自真核和原核生物體，優(yōu)選選自微生物、酵母細胞、真菌細胞、植物細胞、綠藻、微藻、HEK?T293和中國倉鼠卵巢細胞(CHO)，并且優(yōu)選地，其中步驟(iv)中的接觸在2℃至40℃的溫度下持續(xù)10分鐘至360分鐘的時間完成。
13.用于對細胞進行轉(zhuǎn)化的試劑盒，其包含至少一種根據(jù)權利要求1至8中任一項所述的融合多肽。
14.根據(jù)權利要求1至8中任一項所述的融合多肽用于將物質(zhì)引入至靶細胞中的非治療性用途，其中所述物質(zhì)選自抗體、小分子、抗生素、生物制劑、多肽、轉(zhuǎn)錄因子或者DNA、RNA，或者DNA與RNA的混合物。
15.根據(jù)權利要求14所述的融合多肽的非治療性用途，其中所述靶細胞選自植物細胞、細菌細胞、哺乳動物細胞和酵母細胞，優(yōu)選植物細胞。
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【技術特征摘要】
【國外來華專利技術】
1.融合多肽，其包含至少三種功能結構域或由至少三種功能結構域組成：
2.根據(jù)權利要求1所述的融合多肽，其中所述細胞穿透結構域包含以下或由以下組成：選自seq?id?no.:1至24的至少一種氨基酸序列或與選自seq?id?no.:1至24的氨基酸序列具有大于90％、優(yōu)選至少91％、優(yōu)選至少92％、優(yōu)選至少93％、優(yōu)選至少94％、優(yōu)選至少95％、優(yōu)選至少96％、優(yōu)選至少97％、優(yōu)選至少98％、優(yōu)選至少99％序列同一性的氨基酸序列。
3.根據(jù)前述權利要求中任一項所述的融合多肽，其中所述信號序列是包涵體促進序列或分泌序列，優(yōu)選革蘭氏陰性細菌的iv型或ii型分泌的分泌序列。
4.根據(jù)前述權利要求中任一項所述的融合多肽，其中所述信號序列包含以下或由以下組成：選自seq?id?no.:27和28的至少一種氨基酸序列或與選自seq?id?no.:27和28的氨基酸序列具有至少90％、優(yōu)選至少91％、優(yōu)選至少92％、優(yōu)選至少93％、優(yōu)選至少94％、優(yōu)選至少95％、優(yōu)選至少96％、優(yōu)選至少97％、優(yōu)選至少98％、優(yōu)選至少99％序列同一性的氨基酸序列。
5.根據(jù)前述權利要求中任一項所述的融合多肽，其中所述融合多肽包含接頭結構域，并且其中
6.根據(jù)前述權利要求中任一項所述的融合多肽，其中與所述底物結合結構域非共價結合的底物是長度為3至3,000,000個堿基對，優(yōu)選長度為3,000至30,000個堿基對，尤其優(yōu)選長度為30,000至300,000個堿基對的dna或rna。
7.根據(jù)前述權利要求中任一項所述的融合多肽，其中所述融合多肽包含以下或由以下組成：選自seq?id?no.:32至99的氨基酸序列或與選自seq?id?no.:32至99的氨基酸序列具有至少90％、優(yōu)選至少91％、優(yōu)選至少92％、優(yōu)選至少93％、優(yōu)選至少...
【專利技術屬性】
技術研發(fā)人員：克里斯托夫·庫茨納，
申請(專利權)人：克里斯托夫·庫茨納，
類型：發(fā)明
國別省市：
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