【技術實現步驟摘要】
【國外來華專利技術】
本專利技術涉及新型c-葡糖基轉移酶變體及其用途，更具體地涉及由于c-葡糖基轉移酶活性位點的氨基酸突變而增強底物碳的糖基化反應的c-葡糖基轉移酶變體，及其在產生聚酮糖苷(polyketide?glycoside)和苯丙素苷(polyketide?glycoside)中的用途。
技術介紹
1、聚酮是一類具有多種生物效應的有吸引力的天然產物，并廣泛應用于日常生活中的食品、化妝品、藥物等。生物合成聚酮的酶統稱為聚酮生物合成酶(聚酮合酶(pks))，根據生物合成機制其分為三種類型，即i型、ii型和iii型。其中，基于大環內酯的聚酮主要通過i型pks產生，并且芳香族聚酮主要通過ii型和iii型產生。
2、對于具有藥用功效的材料，諸如藥物或營養補充劑，糖苷通過形成糖苷鍵而具有極大提高的穩定性、抗水解性、生物利用度等，與非糖苷相比，通常更優選糖苷。特別地，穩定的c-糖苷鍵在化學上比o-糖苷鍵更穩定。然而，盡管在大腸桿菌(escherichia?coli)中已報道一些天然產物的o-糖基化實例(chen,d.；chen,r.；xie,k.；duan,y.；dai,j.,production?of?acetophenone?c-glucosides?using?an?engineered?c-glycosyltransferase?in?escherichia?coli.tetrahedron?lett.2018,59(19),1875-1878)，但幾乎沒有c-糖基化的實例報道。在自然界以及大腸桿菌中，已有許多關于o-糖基化而不是c-糖
3、典型的c-糖苷天然產物包括胭脂紅酸、蘆薈素(aloesin)等。
4、胭脂紅酸是廣泛使用的紅色染料并用于食品、化妝品和藥品。胭脂紅酸直接從介殼蟲諸如胭脂蟲(dactylopius?coccus)提取，并被添加到食品諸如番茄醬、草莓奶、糖果等和化妝品諸如眼影、指甲油、口紅等中。然而，胭脂蟲生長緩慢，并且生長區域有限(可能僅在炎熱且干燥地區生長)，使其難以輕易提高產能，這限制了商業化生產。特別是提取工藝效率也極低；例如，需要70,000只雌性胭脂蟲才能生產一磅胭脂紅酸。在這種情況下，有必要開發更加可持續的用于生產胭脂紅酸的方法。
5、蘆薈素提取自蘆薈(aloe?vera)，并且由于其抗酪氨酸酶作用和抗黑色素產生作用，在化妝品行業中廣泛用作美白劑。此外，由于蘆薈素表現出抗炎和抗自由基作用，因此它可以用作各種藥物或化妝品的主要成分。然而，從蘆薈植物中提取的蘆薈素的量極少，因此有必要開發更高效且更加可持續的生物基生產方法。
6、如上所述，對c-糖苷天然產物的需求非常高，而其供應不足，但尚未開發出能夠有效生產其的方法。特別地，即使當通過生物方法產生該化合物時，其酶不是熟知的，或者由于酶轉化效率低而不可能從微生物細胞工廠有效生產。
7、在此技術背景下，本專利技術人為開發具有優異的c-糖基化能力的c-葡糖基轉移酶付出了巨大的努力，從而開發了通過氨基酸置換表現出優異的c-糖基化能力的c-葡糖基轉移酶變體，并確定在導入c-葡糖基轉移酶變體基因的重組微生物中，對于i型、ii型和iii型聚酮、非核糖體肽、苯丙素類和芳香族天然產物，c-葡糖基轉移酶變體產生糖苷的能力非常高，從而最終形成本專利技術。
8、
技術介紹
部分中描述的上述信息僅用于增加對本專利技術
技術介紹
的理解，并且其不包括構成本專利技術所屬領域的普通技術人員已知的現有技術的信息。
9、[引文列表]
10、[非專利文獻]
11、(非專利文獻1)chen,d.；chen,r.；xie,k.；duan,y.；dai,j.,production?ofacetophenone?c-glucosides?using?an?engineered?c-glycosyltransferase?inescherichia?coli.tetrahedron?lett.2018,59(19),1875-1878。
技術實現思路
1、本專利技術的目的是為了提供新型c-葡糖基轉移酶變體及其用途。
2、為了實現上述目的，
3、本專利技術提供了一種c-葡糖基轉移酶變體，其包括由以下組成的組中的至少一個氨基酸的突變：由seq?id?no:1所示的c-葡糖基轉移酶中的f17、v93、v132、y193、l164和r322。
4、此外，本專利技術提供了一種核酸，其編碼c-葡糖基轉移酶變體。
5、此外，本專利技術提供了一種重組微生物，其中導入核酸。
6、另外，本專利技術提供了一種產生聚酮糖苷和/或苯丙素苷的方法，其包括：
7、(a)通過培養本專利技術的重組微生物來產生聚酮糖苷和/或苯丙素苷；和
8、(b)回收產生的聚酮糖苷和/或苯丙素苷。
9、另外，本專利技術提供了一種生產聚酮糖苷和/或苯丙素苷的方法，其包括：
10、(a)通過使本專利技術的c-葡糖基轉移酶變體或表達該c-葡糖基轉移酶變體的微生物與聚酮和/或苯丙素類反應來產生聚酮糖苷和/或苯丙素苷；以及
11、(b)回收產生的聚酮糖苷和/或苯丙素苷。
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1.一種C-葡糖基轉移酶變體，其包含選自由SEQ?ID?NO:1所示的C-葡糖基轉移酶中的F17、V93、V132、Y193、L164和R322組成的組的至少一個氨基酸的突變。
2.根據權利要求1所述的C-葡糖基轉移酶變體，其中，所述變體進一步包含選自由SEQID?NO:1所示的C-葡糖基轉移酶中的以下組成的組的至少一個氨基酸的突變：F17、V405、P107、L208、L164、P45、I305、L316、F401、Y94、N57、Y187、C16、P319、F167、V132、N206、R406、Q386、V129、L125、L194、I95、S215、L184、Y158、L29、L27、F202、H159、S370、H365、V329、M301、V315、V190、C366、W80、L58、Q210、F312、D61、I207、L363、P196、L106、V93、A394、W314、S155、P88、D99、Y284、E189、G49、H328、E399、T392、F387、A44、P199、E46、R28、V285、I124、R419、L306、Y157、Y
3.根據權利要求1所述的C-葡糖基轉移酶變體，其中，所述氨基酸的突變包含氨基酸V93和Y193的突變。
4.根據權利要求1所述的C-葡糖基轉移酶變體，其包含選自由F17G、V93Q、V132A、Y193F、L164G和R322D組成的組的至少一個氨基酸的置換。
5.根據權利要求3所述的C-葡糖基轉移酶變體，其包含氨基酸V93Q和Y193F的置換。
6.根據權利要求2所述的C-葡糖基轉移酶變體，進一步包含選自由以下組成的組的至少一個氨基酸的置換：F17G、V405M、P107G、L208G、L164G、P45G、I305A、L316G、F401H、Y94G、N57G、Y187A、C16G、P319G、F167G、V132A、N206E、R406G、Q386H、V129A、L125V、L194A、I95G、S215D、L184G、Y158T、L29A、L27A、F202S、H159G、S370A、H365G、V329T、M301W、V315A、V190A、C366G、W80Y、L58E、Q210G、F312G、D61G、I207P、L363G、P196G、L106G、V93G、A394G、W314C、S155A、P88D、D99G、Y284H、E189A、G49TH328G、E399D、T392A、F387T、A44G、P199E、E46G、R28G、V285I、I124T、R419A、L306M、Y157T、Y200L、E373A、P201G、P191G、L214A、S376G、V15G、E332P、E51C、I417L、L98G、I323A、H161G、T383C、P127A、E309N、N84S、L313T、Q104D、T371A、N213L、G79S、L330G、N307A、K105G、L128D、A152G、S153G、I18A、N59V、W147F、S86V、L293V、E296D、S377A、L185V、K216R、F89A、S286C、F396L、F211G、Y303A、D223G、R415L、N96A、V22H、V93Q、V93L、S153C、F154L、D192S、Y193F、H195Y、H195L、P201T、Y292H、Y292F、R322D和R322A。
7.根據權利要求4所述的C-葡糖基轉移酶變體，進一步包含選自由I18P、Q20M、T50N、T50Q、T50K、T50R、T50V、I95M、I95T、V290G、V290A、I323S、I323A、I95L、V22A、L29A、E46G、V48G、E51C、A55S、S86V、D99G、R103V、C151G、L184G、L194A、E332P、I18A和P385A組成的組的至少一個氨基酸的置換。
8.根據權利要求7所述的C-葡糖基轉移酶變體，進一步包含選自由I323S、T50R、T50V、I18P、I95T、Q...
【技術特征摘要】
【國外來華專利技術】
1.一種c-葡糖基轉移酶變體，其包含選自由seq?id?no:1所示的c-葡糖基轉移酶中的f17、v93、v132、y193、l164和r322組成的組的至少一個氨基酸的突變。
2.根據權利要求1所述的c-葡糖基轉移酶變體，其中，所述變體進一步包含選自由seqid?no:1所示的c-葡糖基轉移酶中的以下組成的組的至少一個氨基酸的突變：f17、v405、p107、l208、l164、p45、i305、l316、f401、y94、n57、y187、c16、p319、f167、v132、n206、r406、q386、v129、l125、l194、i95、s215、l184、y158、l29、l27、f202、h159、s370、h365、v329、m301、v315、v190、c366、w80、l58、q210、f312、d61、i207、l363、p196、l106、v93、a394、w314、s155、p88、d99、y284、e189、g49、h328、e399、t392、f387、a44、p199、e46、r28、v285、i124、r419、l306、y157、y200、e373、p191、l214、s376、v15、e332、e51、i417、l98、i323、h161、t383、p127、e309、n84、l313、q104、t371、n213、g79、l330、n307、k105、l128、a152、i18、n59、w147、s86、l293、e296、s377、l185、k216、f89、s286、f396、f211、y303、d223、r415、n96、v22、s153、f154、d192、y193、h195、p201、y292和r322。
3.根據權利要求1所述的c-葡糖基轉移酶變體，其中，所述氨基酸的突變包含氨基酸v93和y193的突變。
4.根據權利要求1所述的c-葡糖基轉移酶變體，其包含選自由f17g、v93q、v132a、y193f、l164g和r322d組成的組的至少一個氨基酸的置換。
5.根據權利要求3所述的c-葡糖基轉移酶變體，其包含氨基酸v93q和y193f的置換。
6.根據權利要求2所述的c-葡糖基轉移酶變體，進一步包含選自由以下組成的組的至少一個氨基酸的置換：f17g、v405m、p107g、l208g、l164g、p45g、i305a、l316g、f401h、y94g、n57g、y187a、c16g、p319g、f167g、v132a、n206e、r406g、q386h、v129a、l125v、l194a、i95g、s215d、l184g、y158t、l29a、l27a、f202s、h159g、s370a、h365g、v329t、m301w、v315a、v190a、c366g、w80y、l58e、q210g、f312g、d61g、i207p、l363g、p196g、l106g、v93g、a394g、w314c、s155a、p88d、d99g、y284h、e189a、g49th328g、e399d、t392a、f387t、a44g、p199e、e46g、r28g、v285i、i124t、r419a、l306m、y157t、y200l、e373a、p201g、p191g、l214a、s376g、v15g、e332p、e51c、i417l、l98g、i323a、h161g、t383c、p127a、e309n、n84s、l313t、q104d、t371a、n213l、g79s、l330g、n307a、k105g、l128d、a152g、s153g、i18a、n59v、w147f、s86v、l293v、e296d、s377a、l185v、k216r、f89...
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