一種用于檢測對蝦白斑綜合征病毒的試劑盒制造技術

本發明專利技術提供了用于檢測對蝦白斑綜合征病毒的單鏈DNA組，組成為：引物對和探針，引物對由SEQ ID No.1所示的上游引物和SEQ ID No.2所示的下游引物組成，探針為SEQ ID No.3所示的序列。此單鏈DNA組能特異性檢測到對蝦白斑綜合征病毒，靈敏度高、特異性強、可靠性好，大幅提升了檢測的DNA含量下限值。包含有此單鏈DNA組的試劑盒的各組分比例進行了優化，工藝技術應用更方便，且封閉酶活可通過減少引物和Taq酶的消耗從而進一步提高試劑盒靈敏度。熒光熱對流PCR技術顯著縮短了核酸擴增與檢測的時間，并可以同時進行大批量的樣本分析；同時攜帶方便，操作簡便，可用于現場檢測。可用于現場檢測。

【技術實現步驟摘要】
一種用于檢測對蝦白斑綜合征病毒的試劑盒


[0001]本專利技術涉及病毒檢測
，具體涉及一種用于檢測對蝦白斑綜合征病毒的試劑盒。
技術背景
[0002]傳統捕撈業已經難以滿足未來世界對魚類和甲殼類動物的需求，海水養殖已經進入了新的領域；蝦體在養殖過程中遇到新病原的風險也將增大。對蝦白斑綜合癥病毒是可廣泛感染蝦蟹等十足類甲殼動物苗種、成體、親體的一種大型桿狀病毒，自1993年在養殖對蝦中暴發以來，在世界范圍內廣泛傳播，導致養殖對蝦大量死亡，給水產養殖業造成了巨大的經濟損失。蝦白斑病毒檢測主要以普通PCR和環介導等溫擴增(Loop
?
mediated isothermal amplification，LAMP)為主，其中PCR法檢測周期長、設備要求高、不適宜現場應用，LAMP法病毒檢測率不穩定、靈敏度低、重復性差。因此，利用新型病原學檢測技術，建立快速簡便、準確、靈敏地現場檢測方法檢測WSSV，加強苗種和成蝦檢疫以及養殖水體環境的檢測，對預防病毒感染，切斷病毒傳播，保障我國對蝦養殖業的健康持續發展具有重要意義。

技術實現思路

[0003]針對上述存在的技術局限性，本專利技術提出了一種用于檢測對蝦白斑綜合征病毒的試劑盒；其克服了
技術介紹
中提到的不足和缺陷。
[0004]為實現上述目的，本專利技術采用了以下技術方案：
[0005]本專利技術的專利技術點是提供用于檢測對蝦白斑綜合征病毒的單鏈DNA組，所述單鏈DNA組組成為：引物對和探針，所述引物對由SEQ ID No.1所示的上游引物和SEQ ID No.2所示的下游引物組成，所述探針為SEQ ID No.3所示的序列。
[0006]上游引物序列，如SEQ ID No.1所示：
[0007]cacagattttttgattggtctcgg。
[0008]下游引物序列，如SEQ ID No.2所示：
[0009]agaccacttttccgcatatttc。
[0010]探針序列，如SEQ ID No.3所示：
[0011]catggaaaaattaatagcgatagaggg。
[0012]可選地，上述的用于檢測對蝦白斑綜合征病毒的單鏈DNA組，所述探針序列的兩端分別標記有熒光基團；熒光基團為標記熒光素FAM、VIC、HEX、JOE、NED、TAMRA、CY3、ROX或CY5。
[0013]可選地，上述的用于檢測對蝦白斑綜合征病毒的單鏈DNA組，所述引物對中的上游引物、引物對中的下游引物、探針的摩爾比為(0.5
?
1)：(0.5
?
1)：(0.2
?
0.5)。
[0014]本專利技術的第二個專利技術點在于提供了一種用于檢測對蝦白斑綜合征病毒的PCR試劑，所述PCR試劑中含有上述的單鏈DNA組。
[0015]可選地，上述的用于檢測對蝦白斑綜合征病毒的PCR試劑，所述PCR試劑中，引物對上游引物、引物對下游引物的終濃度為1
?
2pmol/μL，探針終濃度為0.5
?
1pmol/μL。
[0016]本專利技術的第三個專利技術點在于提供了一種用于檢測對蝦白斑綜合征病毒的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒中含有上述的單鏈DNA組或上述的PCR試劑。
[0017]可選地，上述的用于檢測對蝦白斑綜合征病毒的試劑盒，所述試劑盒中還包括有Taq DNA聚合酶、dNTPs、Tris
?
HCl、MgSO4、EDTA、DTT、甘油、Tween
?
20、陽性對照和無核酸酶水。
[0018]Taq DNA聚合酶經Taq抗體和核酸適配體雙封閉。
[0019]本專利技術的第四個專利技術點在于提供了如下任一應用：1)上述的單鏈DNA組或上述的PCR試劑在制備用于檢測或輔助檢測對蝦白斑綜合征病毒的產品中的應用；2)上述的單鏈DNA組或上述的PCR試劑在制備用于檢測或輔助檢測待測病毒是否為對蝦白斑綜合征病毒的產品中的應用；3)上述的單鏈DNA組或上述的PCR試劑在制備用于待測樣本中是否含有對蝦白斑綜合征病毒的產品中的應用。
[0020]可選地，上述的應用，所述待測樣本為待測樣本為對蝦白斑綜合征病料樣本或水樣。
[0021]本專利技術的第五個專利技術在于提供了一種非疾病診斷目的的檢測或輔助檢測對蝦白斑綜合征病毒的方法，包括如下步驟：從待測樣本中提取DNA作為模板，用上述的單鏈DNA組或上述的PCR試劑或上述的試劑盒進行熒光熱對流PCR，與陽性對照比對后進行結果判定。
[0022]試劑盒中的陽性對照為含有所述擴增引物對擴增的ORF 191基因片段的重組質粒。
[0023]ORF 191基因片段由申請人設計，安升達公司合成，安升達公司最終交付的成品包括了菌液和重組質粒，其中菌液可培養后進行質粒提取，獲得更多的重組質粒，ORF 191基因序列如SEQ ID No.4所示：
[0024]gcaacgtatctggacataagacgtaatgttcattacagctgtaatggacctcaaacccctaaatactatctgcgc tctggattagcaacgtatctggacataagacgtaatgttcattacagctgtaatggacctcaaacccctaaatactatctgcg ctctggatta。
[0025]與現有技術相對比，本專利技術具有以下優點：
[0026]本專利技術提供的用于檢測對蝦白斑綜合征病毒的單鏈DNA組能特異性檢測到對蝦白斑綜合征病毒，靈敏度高、特異性強、可靠性好，其檢測的DNA含量下限可達20拷貝/μl，在特定條件下甚至可達2拷貝/μl。包含有此單鏈DNA組的試劑盒中，多種化學試劑成分全混，各組分比例進行了優化，使工藝技術應用更方便，且封閉酶活可通過減少引物和Taq酶的消耗從而進一步提高試劑盒靈敏度。熒光熱對流PCR技術顯著縮短了核酸擴增與檢測的時間，且可以同時進行大批量的樣本分析；同時攜帶方便，操作簡便，可用于現場檢測，為對蝦白斑綜合征病毒疫情的監測、防控提供有力的技術支持。
具體實施方式
[0027]為使本專利技術的目的、技術方案和優點更加清楚明了，下面對本專利技術進行進一步詳
細說明。但是應該理解，此處所描述僅僅用以解釋本專利技術，并不用于限制本專利技術的范圍。
[0028]除非另有定義，本文所使用的所有的技術術語和科學術語與屬于本專利技術的
的技術人員通常理解的含義相同，本文中在本專利技術的說明書中所使用的術語只是為了描述具體的實施例的目的，不是旨在限制本專利技術。本文中所使用的試劑和儀器均商購可得，所涉及的表征手段均可參閱現有技術中的相關描述，本文中不再贅述。
[0029]熒光熱對流PCR是一種將上下溫差引起空間內流體密度變化引起的熱對流應用于熒光PCR擴增的一種技術。反應管底部液體因受熱會導致密度減小，此時在浮力的作用下液體向反應管上方運動，但上升的過程中液體的溫度逐漸降低，密度增大，直至到達反應管頂本文檔來自技高網...

【技術保護點】

【技術特征摘要】
1.用于檢測對蝦白斑綜合征病毒的單鏈DNA組，其特征在于，所述單鏈DNA組組成為：引物對和探針，所述引物對由SEQ ID No.1所示的上游引物和SEQ ID No.2所示的下游引物組成，所述探針為SEQ ID No.3所示的序列。2.根據權利要求1所述的用于檢測對蝦白斑綜合征病毒的單鏈DNA組，其特征在于，所述探針序列的兩端分別標記有熒光基團；熒光基團為標記熒光素FAM、VIC、HEX、JOE、NED、TAMRA、CY3、ROX或CY5。3.根據權利要求1或2所述的用于檢測對蝦白斑綜合征病毒的單鏈DNA組，其特征在于，所述引物對中的上游引物、引物對中的下游引物、探針的摩爾比為(0.5
?
1)：(0.5
?
1)：(0.2
?
0.5)。4.一種用于檢測對蝦白斑綜合征病毒的PCR試劑，其特征在于，所述PCR試劑中含有權利要求1
?
3任一所述的單鏈DNA組。5.根據權利要求4所述的用于檢測對蝦白斑綜合征病毒的PCR試劑，其特征在于，所述PCR試劑中，引物對上游引物、引物對下游引物的終濃度為1
?
2pmol/μL，探針終濃度為0.5
?
1pmol/μL。6.一種用于檢測對蝦白斑綜合征病毒的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒中含有權利要求1
?
3任一所述...

【專利技術屬性】
技術研發人員：陸意，郭榮顯，李林，
申請(專利權)人：無錫中德伯爾生物技術有限公司，
類型：發明
國別省市：