一種高酸堿耐受的融合蛋白及其制備方法和應用技術

本發明專利技術提供了一種融合蛋白PA

【技術實現步驟摘要】
一種高酸堿耐受的融合蛋白及其制備方法和應用


[0001]本專利技術涉及生物工程
，具體涉及一種高酸堿耐受的融合蛋白及其制備方法和應用。
技術背景
[0002]各種細菌中已分離出幾種對免疫球蛋白(Ig)具有固有親和力的蛋白質。這些分子包括從金黃色葡萄球菌中提取的蛋白A，來自c群鏈球菌蛋白G；它們都含有55
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76個重復的氨基酸殘基，能夠介導Ig結合。蛋白A為金黃色葡萄球菌細胞壁的免疫球蛋白結合蛋白，它包含5個與免疫球；蛋白A除可以特異性的同IgG的Fc區域結合，還可以同IgG的Fab區域結合。蛋白G為鏈球菌細胞壁的免疫球蛋白結合蛋白，它包含3個與IgG特異性結構的串聯的結構域。同樣，蛋白G也具有部分結合Fab的CH1結構域的特性。
[0003]蛋白A、蛋白G是微生物來源的天然蛋白質，可以和哺乳動物的免疫球蛋白結合，蛋白G不僅與Fc區域結合，還與人類IgG1同型的CH1結構域結合。因此，與蛋白A相比，它具有更廣泛的應用。蛋白質A、G在與熒光色素、酶或金顆粒偶聯時保持其功能的能力，使它們成為ELISA、免疫組織化學、流式細胞術和電子顯微鏡中極有價值的檢測試劑。
[0004]基于這些特性，蛋白A、蛋白G在純化抗體、免疫沉淀、有效的去除或減少非特異性背景等領域具有巨大優勢。蛋白A、蛋白G與不同的免疫球蛋白的結合能力并不一樣，它們受到后者的來源及亞類的影響。市面上的單獨的蛋白A或者蛋白G，無法滿足對大部分種源的免疫球蛋白的結合，則造成純化抗體的類型比較單一。若單獨的蛋白A或者蛋白G代替二抗，廣泛應用于免疫化學等領域則可能造成檢測結果的穩定性降低。若應用于分子科研領域，則可能不完全去除某些實驗結果背景，造成結果的誤判。
[0005]公開號為CN102676562A、名稱為《一種對抗體具有廣譜吸附能力的融合蛋白制備方法及應用》的專利文獻，公開了通過基因工程手段，將蛋白A和蛋白G的基因進行融合表達得到的融合蛋白，兼具蛋白A和蛋白G優點，具有可以與人不同亞類免疫球蛋白G選擇性結合，對血液中白蛋白等非免疫球蛋白物質的非特異性吸附低的優勢。

技術實現思路

[0006]針對上述存在的技術局限性，本專利技術提出了一種高酸堿耐受的融合蛋白及其制備方法和應用；其克服了
技術介紹
中提到的不足和缺陷。
[0007]為實現上述目的，本專利技術采用了以下技術方案：
[0008]本專利技術的專利技術點是提供一種融合蛋白PA
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G，所述融合蛋白PA
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G融合了蛋白A和蛋白G的Ig優勢結合域，融合蛋白PA
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G的氨基酸序列為如SEQ ID NO.1所示的序列，或與SEQ ID NO.1所示序列具有90％以上同源性且具有相同功能的序列。
[0009]SEQ ID NO.1所示氨基酸序列為：
[0010]AQHDEAQQNAFYQVLNMPNLNADQRNGFIQSLKDDPSQSANVLGE AQKLNDSQAPKADAQQNNFNKDQQSAFYEILNMPNLNEAQRNGFIQSLKDDPSQSTNVLGEAKKLNESQAPKADNNFNKEQQNAFYEILNMPNLNEEQ
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[0011]本專利技術的第二個專利技術點是提供了編碼上述融合蛋白PA
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G的基因，所述編碼基因的核苷酸序列為如SEQ ID NO.2所示的序列，或與SEQ ID NO.2所示序列具有90％以上同源性的序列。
[0012]SEQ ID NO.2所示核苷酸序列為：
[0013]gctcagcacgatgaagcgcagcagaacgcattctatcaagttctgaacatgccgaacctgaacgcagatcag cgtaatggctttatccagtctctgaaagacgatccgtctcagagcgctaacgtgctgggtgaggcacaaaaactgaacgactcccaggcgccgaaagccgacgcacaacagaataacttcaacaaggatcagcagtccgcattctacgagattctgaacatgccaaatctgaatgaagcacaacgtaacggtttcatccagagcctgaaagatgacccgtcccagtctaccaacgtcctgggcgaagcgaaaaaactgaacgaatcccaggcaccgaaagcagacaacaactttaacaaggaacagcagaacgcattctatgaaattctgaacatgccgaacctgaacgaagaacagcgcaacggttttatccagagcctgaaagatgatccgtctcagtctgcaaacctgctgtccgaggctaaaaaactgaatgaaagccaggctccgaaggctgacaacaagttcaacaaagaacagcagaacgcgttctatgaaatcctgcacctgccgaacctgaacgaagagcagcgtaacggttttattcagtctctgaaagatgacccgtctcagagcgctaacctgctggcggaggcgaagaaactgaatgacgcgcaggcgcctaaagcggataacaaattcaacaaagaacagcagaacgcattttatgaaatcctgcacctgccgaacctgacggaagaacagcgtaacggctttatccagtctctgaaagatgacccgtctgtgagcaaagaaatcctggctgaggcgaaaaaactgaacgacgctggtggtggtggttccggtggtggtggtagcggtggtggtggtagcgacacctataaactgatcctgaacggtaagactctgaaaggtgaaaccaccaccgaagcagttgatgccgcaacggcggaaaaagtcttcaaacagtacgctaacgacaacggtgtcgatggcgaatggacctatgacgacgcgaccaaaacctttaccgttaccgaaaaaccggaagtaattgatgcgagcgagct本文檔來自技高網...

【技術保護點】

【技術特征摘要】
1.一種融合蛋白PA
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G，其特征在于，所述融合蛋白PA
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G融合了蛋白A和蛋白G的Ig優勢結合域，融合蛋白PA
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G的氨基酸序列為如SEQ ID NO.1所示的序列，或與SEQ ID NO.1所示序列具有90％以上同源性且具有相同功能的序列。2.編碼權利要求1所述的融合蛋白PA
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G的基因，其特征在于，所述編碼基因的核苷酸序列為如SEQ ID NO.2所示的序列，或與SEQ ID NO.2所示序列具有90％以上同源性的序列。3.一種重組表達載體，其特征在于，所述的重組表達載體中插入有權利要求2所述的基因。4.根據權利要求3所述一種重組表達載體，其特征在于，所述表達載體為pET系列載體，優選為pET
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32a表達質粒、pET
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26b表達質粒或pET
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28a表達質粒，最優選為pET
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28a表達質粒。5.一種重組表達融合蛋白PA
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G的重組菌株，其特征在于，由權利要求3或4所述的重組表達載體轉化大腸桿菌感受態細胞得到的重組菌株。6.根據權利要求5所述的一種重組表達融合蛋白PA
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【專利技術屬性】
技術研發人員：李喬斌，郭榮顯，梁月蘭，陸意，繆彩燕，任水英，周麗，付冬梅，李林，
申請(專利權)人：無錫中德伯爾生物技術有限公司，
類型：發明
國別省市：