本發明專利技術公開了一種結合深共晶多重提取鹿茸有效成分的方法，屬于藥物提取技術領域。本方法依次進行鹿茸預處理、深共晶溶劑制備、深共晶提取、醇提、水提和酶解來提取鹿茸有效成分。本發明專利技術利用氯化膽堿和甘油以1：3的摩爾比制成深共晶溶劑，將該綜合提取工藝進行優化，得到鹿茸中蛋白質含量為0.230~0.310 mg/kg，氨基酸含量為325~350.23 mg/kg，多糖得率為9.0~11.61%，總提物得率在20.99%。本發明專利技術無毒無污染、提取效率高、提取操作簡便、對于成分提取更加綠色環保；同時優化提取工藝與檢測技術使檢測時間更短、檢測結果更準確。檢測結果更準確。檢測結果更準確。
【技術實現步驟摘要】
一種結合深共晶多重提取鹿茸有效成分的方法
[0001]本專利技術屬于藥物提取
，具體涉及一種結合深共晶多重提取鹿茸有效成分的方法。
技術介紹
[0002]鹿茸為鹿科動物梅花鹿或馬鹿的雄鹿頭上未骨化的幼角，是一種傳統得名貴中藥材。作為最重要的動物藥之一，有壯陽、益精血、強筋骨、托瘡毒之功。鹿茸中含有豐富的氨基酸、有效蛋白質、磷脂等營養成分，目前，鹿茸中有效成分的聯合提取研究相對較少，提取部位較單一，提取率及提取物純度不甚理想，導致原材料浪費。
[0003]深共晶是一種新型的綠色萃取溶劑，包括氫鍵供體和氫鍵受體。具有提取效率高、低毒、降解快、對環境影響小等優點，廣泛應用于生物活性化合物的提取。然而，由于它們的低蒸氣壓，溶解在深共晶中的目標化合物的分離通常是困難的，這阻礙了它們在工業生產中的應用。為了從深共晶中獲得目標化合物，有必要研究使深共晶變性并破壞氫鍵以降低目標化合物在深共晶中的溶解度的適當條件。
[0004]此外，現有鹿茸中有效成分的提取，還存在提取過程繁瑣、提取時間長、提取物中有效含量低、環境友好性差、檢測時間長等問題，因此開發一種綠色環保、價格低廉的提取工藝迫在眉睫。
技術實現思路
[0005]解決的技術問題：針對上述技術問題，本專利技術提供了一種結合深共晶多重提取鹿茸有效成分的方法，具有綠色環保高效、成本低、鹿茸資源利用率高、檢測時間短和提取率高的特點。
[0006]技術方案：一種結合深共晶多重提取鹿茸有效成分的方法，包括步驟如下：S1.帶血鹿茸預處理：將帶血鹿茸晾干后粉碎得到鹿茸粉末；S2.制備深共晶溶劑：以氯化膽堿為氫鍵受體，甘油為氫鍵供體，按摩爾比1：3混合后升溫至75~95℃，恒溫攪拌至白色固體溶解為無色粘稠液體，得到深共晶溶劑；S3.深共晶提取：稱取鹿茸粉末并按固液比1g：（5~20）mL添加至深共晶溶劑中，經機械攪拌后將懸浮液離心收集上清液，取上清液備用，下層殘渣水洗后烘干稱重；S4.醇提：將深共晶提取后的殘渣以固液比1g：25mL加入無水乙醇，密封稱重后，在沸騰條件下回流反應，冷卻后密封稱重，離心，取上清液備用，下層殘渣水洗后烘干稱重；S5.水提：將醇提后的殘渣按料液比1g：（20~40）mL加入去離子水，在60~100℃下浸提，稱重，離心，取上清液備用，下層殘渣烘干稱重；S6.酶解：將水提后的殘渣按固液比1g：10mL加入去離子水配置為底物，調節pH為8.0，加入胰蛋白酶，酶解后依次進行滅酶、冷卻、離心操作，取上清液備用。
[0007]優選的，所述步驟S1中，粉碎過65~85目篩得鹿茸粉末。
[0008]優選的，所述步驟S2中，恒溫攪拌的時間為0.5~2h。
[0009]優選的，所述步驟S3中，機械攪拌的轉速為300~1500rpm，攪拌時間為2~6h。
[0010]優選的，所述步驟S3中，懸浮液離心的轉速為10000rpm，離心時間為10min。
[0011]優選的，所述步驟S5中，浸提的時間為2~6h。
[0012]優選的，所述步驟S6中，酶占底物的5~7wt.%。
[0013]優選的，所述步驟S6中，通過1M的NaOH調節pH。
[0014]優選的，所述步驟S6中，酶解溫度為50℃，酶解時間為11h；滅酶溫度為100℃，滅酶時間為15min。
[0015]優選的，所述水洗的溫度為50~60℃。
[0016]有益效果：本專利技術依次通過深共晶提取、醇提、水提、酶解提取鹿茸中的氨基酸、有效蛋白和多糖等有效成分，具有綠色環保高效、無毒無害、成本低、鹿茸資源利用率高、檢測時間短和提取率高的特點。
[0017]本專利技術利用深共晶提取結合醇提、水提及酶解等方法，確定提取順序和提取參數，能夠獲得較高的總提物得率20.99%，而醇提、水解及酶解三種提取方法結合的總提物得率在17.37%。
[0018]本專利技術利用氯化膽堿和甘油以1：3的摩爾比制成深共晶溶劑，將該綜合提取工藝進行優化，得到鹿茸中蛋白質含量為0.230~0.310 mg/kg，氨基酸含量為325~350.23 mg/kg，多糖得率為9.0~11.61%。在無深共晶溶劑時，可以提取到鹿茸中蛋白質含量為0.08~0.2mg/kg，氨基酸含量為202.28~304.21mg/kg，多糖得率為6.24%~10.56%。
附圖說明
[0019]圖1是制備深共晶溶劑的不同參數對提取率的影響圖，其中A是氫鍵供體與氫鍵受體摩爾比對鹿茸蛋白提取率的影響圖；B是攪拌溫度對鹿茸蛋白提取率的影響圖；C是攪拌時間對鹿茸蛋白提取率的影響圖；圖2是深共晶提取的不同參數對提取率的影響圖，其中A是鹿茸粉末與深共晶溶劑的固液比對鹿茸蛋白提取率的影響圖；B是攪拌速率對鹿茸蛋白提取率的影響圖；C是攪拌時間對鹿茸蛋白提取率的影響圖；圖3是水提的不同參數對提取率的影響圖，其中A是鹿茸粉末與水的固液比對多糖得率的影響圖；B是提取時間對鹿茸多糖得率的影響圖；C是提取溫度對鹿茸多糖得率的影響圖；圖4是醇提中鹿茸粉末與無水乙醇固液比對氨基酸總量的影響圖；圖5是無水乙醇與胰蛋白酶提取氨基酸總量比較示意圖；圖6是不同提取方法總提物得率比較示意圖。
具體實施方式
[0020]下面結合附圖和具體實施例對本專利技術作進一步描述。
[0021]實施例1一種結合深共晶多重提取鹿茸有效成分的方法，包括步驟如下：S1.帶血鹿茸預處理：鹿茸購于吉林省長春市長白山；將帶血鹿茸切分均勻后放于室溫下晾干數天，然后粉碎過80目篩得到鹿茸粉末，密封，室溫下儲存備用。
[0022]S2.制備深共晶溶劑：將氫鍵受體和氫鍵供體按照1：3的摩爾比置于100 mL圓底燒瓶中，氫鍵受體為氯化膽堿，氫鍵供體為甘油，緩慢升溫至85℃，恒溫攪拌1 h，直至瓶中白色固體逐漸溶解，變成無色粘稠液體，即得到深共晶溶劑。
[0023]S3.深共晶提取：將1.00 g鹿茸粉末添加到含有10.3 g 深共晶溶液的100 mL圓底燒瓶中，并在900 rpm下機械攪拌4 h，提取后，將懸浮液以10000 rpm離心20 min，收集上清液備用，下層殘渣在50℃下烘干后稱重。
[0024]提取備用的上清液10 mL，加入50 mL的去離子水，倒入100 mL燒杯中。在4℃下儲存18 h，將懸浮物與沉淀物倒入離心管中，10000 rpm離心10 min，取下層蛋白質，在60℃下用50 mL水洗滌2 h，除去深共晶溶劑。
[0025]S4.醇提：將稱重后的粉末殘渣與無水乙醇以料液比1g：25mL的比例置于250 mL圓底燒瓶這種，密封稱重后，連接冷凝回流管，加熱至微沸1 h，冷卻后取下，密塞稱重，用水補足丟失的水分后，離心，取上清液靜置備用，下層殘渣在50℃下烘干后稱重。
[0026]S5.水提：將醇提后的鹿茸殘渣按照1g：35mL的料液比加入去離子水，在90℃下浸提4h，稱重，用水補足損失的重量后，離心稱取上清液備用，下層殘渣在50℃下烘干后稱重。
[0027]S6.酶解：將水提后的本文檔來自技高網...
【技術保護點】
【技術特征摘要】
1.一種結合深共晶多重提取鹿茸有效成分的方法，其特征在于，包括步驟如下：S1.帶血鹿茸預處理：將帶血鹿茸晾干后粉碎得到鹿茸粉末；S2.制備深共晶溶劑：以氯化膽堿為氫鍵受體，甘油為氫鍵供體，按摩爾比1：3混合后升溫至75~95℃，恒溫攪拌至白色固體溶解為無色粘稠液體，得到深共晶溶劑；S3.深共晶提取：稱取鹿茸粉末并按固液比1g：（5~20）mL添加至深共晶溶劑中，經機械攪拌后將懸浮液離心收集上清液，取上清液備用，下層殘渣水洗后烘干稱重；S4.醇提：將深共晶提取后的殘渣以固液比1g：25 mL加入無水乙醇，密封稱重后，在沸騰條件下回流反應，冷卻后密封稱重，離心，取上清液備用，下層殘渣水洗后烘干稱重；S5.水提：將醇提后的殘渣按料液比1g：（20~40）mL加入去離子水，在60~100℃下浸提，稱重，離心，取上清液備用，下層殘渣烘干稱重；S6.酶解：將水提后的殘渣按固液比1g：10 mL加入去離子水配置為底物，調節pH為8.0，加入胰蛋白酶，酶解后依次進行滅酶、冷卻、離心操作，取上清液備用。2.根據權利要求1所述的一種結合深共晶多重提取鹿茸有效成分的方法，其特征在于，所述步驟S1中，粉碎過65~85目篩得鹿茸粉末。3.根據權利要求1所述的一種結...
【專利技術屬性】
技術研發人員：黃和，岳媛媛，王松濤，安楠，劉淼，童鈺琴，吳麗娜，
申請(專利權)人：南京師范大學，
類型：發明
國別省市：
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