一種免疫組化即用型PD-L1抗體試劑制造技術

一種免疫組化即用型PD

【技術實現步驟摘要】
一種免疫組化即用型PD
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L1抗體試劑


[0001]本專利技術屬于抗體檢測
，具體地，涉及一種免疫組化即用型PD
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L1抗體試劑。

技術介紹

[0002]即用型抗體試劑為了長期保存，往往要加入防腐劑。防腐劑應與抗體溶液體系中的其他組成成分兼容并且無毒或者低毒。免疫組化試劑中常用的防腐劑有疊氮化鈉、硫柳汞、抗生素等。其中的疊氮化鈉與氰化物相似，屬于劇毒化合物，半數致死量為27mg/kg(大鼠，經口)。除對眼和皮膚有刺激性外，還可經吸入、口服或皮膚吸收引起中毒死亡，急性中毒時出現頭暈、頭痛、全身無力、血壓下降、心動過緩和昏迷；遇高熱或劇烈震動能強烈爆炸，使用時應十分注意安全。硫柳汞因含有機汞而存在神經毒性問題，其使用的安全性問題也深受人們關注。而抗生素存在的問題是容易產生耐藥性，還容易與體系中的其他成分發生相互作用，影響各自的作用。除此以外，疊氮化鈉的加入還限制了辣根過氧化物標記的二抗的使用，因為疊氮化鈉是辣根過氧化物酶的抑制劑。臨床醫學檢驗實驗室的工作人員往往要處理大量的免疫組化樣本，長期與合這些物質的試劑接觸無疑會使工作人員處于危險之中，另外廢棄溶液的處置還可能造成環境污染。
[0003]除此以外，抗體在長期儲存期間還容易吸附在管壁上，造成抗體損失。通常的做法是加入BSA等蛋白穩定劑，但這些穩定劑不適用于免疫組化用抗體，因為這些穩定劑會和抗體一起競爭結合標記物。因此，開發一種安全、無污染、使用方便、適宜長期儲存且染色效果不受影響的免疫組化即用型PD
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>L1抗體試劑十分有必要。

技術實現思路

[0004]本專利技術的目的在于提供一種添加劑數量少、無毒、環保、使用方便、適宜長期儲存卻又不影響染色效果的免疫組化即用型PD
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L1抗體試劑，以解決上述
技術介紹
中提出的問題。
[0005]為了實現上述目的，本專利技術通過一系列處方篩選確定處方由檸檬酸緩沖液、L
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精氨酸、L
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谷氨酸、ProClin 300組成。其中，檸檬酸緩沖液的pH為6.0，L
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精氨酸的濃度為5mg/mL，L
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谷氨酸的含量為2.5至5mg/mL、ProClin 300的含量為0.02％。所述優選處方在2
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8℃條件下可穩定儲存3年。使用優選配方對肺癌組織進行染色時，染色結果符合要求，未見背景染色，同時還省去了抗原修復步驟，大大節省了工作時間。
[0006]為了使本專利技術所解決的技術問題、技術方案及有益效果更加清楚明白，以下結合實施例，對本專利技術進行進一步詳細說明。
附圖說明
[0007]圖1為實施例6所述優選PD
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L1抗體試劑對肺癌組織染色的染色效果圖；(A)圖為進行抗原修復操作時的染色效果圖，(B)圖為不進行抗原修復操作時的染色效果圖。
具體實施方式
[0008]以下內容結合附圖用于說明本專利技術，但不用來限制本專利技術的范圍。若未特別指明，所用技術手段為本領域技術人員所熟知的常規手段。
[0009]實施例1：緩沖液篩選
[0010]通過DSC溫度曲線(10
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110℃)測定PD
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L1抗體的熱穩定性(解折疊)。所謂的熱解折疊是用于比較各種緩沖系統的量度：抗體的Tm1值增加表示抗體的熱穩定性增加，即抗體在相應緩沖系統中的穩定性良好。
[0011]在以下緩沖液系統中制備濃度約為10mg/mL的PD
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L1抗體試劑，不添加其他組分。
[0012]表1：各種緩沖液系統中PD
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L1抗體(10mg/mL)的Tm1
[0013][0014][0015]結果：PD
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L1抗體在各種緩沖系統中的解折疊溫度在55.8℃至79.5℃之間。從上表可見PD
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L1抗體在50mM檸檬酸鈉(pH 5.0
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6.5)、50mM L
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組氨酸(pH 6.5
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7.5)、50mM L
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精氨酸(pH 6.0
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7.5)、50mM L
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甘氨酸(pH 7.0
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7.5)中的熱穩定性要優于其他各緩沖系統。基于pH 6.0的檸檬酸緩沖液還具有抗原修復功能，故優選pH 6.0的檸檬酸緩沖液進行進一步研究。
[0016]實施例2：攪拌應激測試
[0017]抗體試劑在運輸過程中可能會受到劇烈振蕩，劇烈振蕩可能潛在地導致蛋白聚集并形成寡聚物直至可見顆粒。通過攪拌應激測試(300rpm和室溫下24小時)測試PD
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L1抗體制劑的穩定性。通過尺寸排阻色譜(SEC)檢測寡聚物含量，目視評估可見顆粒的存在。結果，pH 6.0的檸檬酸緩沖液在攪拌期間可見絮凝物，并且測得寡聚物含量＞8％。由于L
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精氨酸具有抑制抗體聚集的作用，故向緩沖系統中加入L
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精氨酸。結果如下表所示，緩沖系統中加入10mg/mL L
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精氨酸時，寡聚物含量為2.3％，未見顆粒，但有背景染色；而加入5mg/mL L
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精氨酸時，染色效果合格，未見顆粒，但卻檢測到1.5％的寡聚物。于是，繼續向緩沖系統中
繼續加入L
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谷氨酸，觀察寡聚物的含量是否發生變化，結果發現加入2.5至5mg/mL L
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谷氨酸時，效果最好，寡聚物含量控制在0.9％至1.0％，未見顆粒，同時染色效果也合格。
[0018] 寡聚物含量顆粒染色效果0.5mg/mL L
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精氨酸5.1％可見未評估1mg/mL L
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精氨酸3.7％微量未評估5mg/mL L
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精氨酸1.5％未見合格10mg/mL L
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精氨酸2.3％未見有背景5mg/mL L
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精氨酸+5mg/mL L
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谷氨酸1.0％未見合格5mg/mL L
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精氨酸+2.5mg/mL L
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谷氨酸0.9％未見合格5mg/mL L
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精氨酸+7.5mg/mL L
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谷氨酸2.6％微量有背景
[0019]實施例3：加速穩定性實驗
[0020]將10mg/mL PD
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L1抗體試劑(pH 6.0檸檬酸緩沖液，5mg/mL L
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精氨酸，2.5mg/mL L
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谷氨酸)置于37℃下0天、3天、1周、2周、3周，并測定PD
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L1抗體純度和寡聚物含量，我們發現隨著時間延長，PD
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L1抗體的純度逐漸下降，但寡聚物未見增加，表示抗體在加速儲存期間可能被微生物降解，于是我們向其中添加了0.02％、0.03％、0.05％的Pro本文檔來自技高網...

【技術保護點】

【技術特征摘要】
1.一種免疫組化即用型PD
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L1抗體試劑，其特征在于，所述PD
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L1抗體試劑由PD
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L1抗體、檸檬酸緩沖液、L
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精氨酸、L
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谷氨酸、ProClin 300配制而成。2.一種如權利要求1所述的免疫組化即用型PD
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L1抗體試劑，其特征在于，所述檸檬酸緩沖液的pH為6.0。3.一種如權利要求1所述的免疫組化即用型PD
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L1抗體試劑，其特征在于，所述L
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精氨酸的濃度為5mg/mL。4.一種如權利要求1所述的免疫組化即用型PD

【專利技術屬性】
技術研發人員：吳柏旭，程翎，黃婷婷，惠美，
申請(專利權)人：浙江洛兮醫療科技有限公司，
類型：發明
國別省市：