中國對蝦雌性特異性基因及其檢測引物和應用制造技術

本發明專利技術公開了中國對蝦雌性特異性基因及其檢測引物和應用。所述特異性基因的核苷酸序列如SEQ ID No.6所示，用于檢測的特異性引物的序列為：Female

【技術實現步驟摘要】
中國對蝦雌性特異性基因及其檢測引物和應用


[0001]本專利技術屬于海洋蝦類性別鑒定技術，具體涉及中國對蝦雌性特異性基因及其檢測引物和應用。

技術介紹

[0002]中國對蝦(Fenneropenaeus chinensis)屬節肢動物門(Arthropoda)、甲殼綱(Crustacea)、十足目(Decapoda)、對蝦科(Penaeidae)，又稱東方對蝦，俗稱對蝦、明蝦，主要分布于黃渤海(包括朝鮮西岸)以及東海北部的嵊泗列島和舟山群島一帶，是我國最具代表性的海水經濟養殖動物之一，并在國際市場上享有較高的聲譽。中國對蝦屬廣溫、廣鹽性、一年生暖水性大型洄游蝦類，在黃、渤海區有明顯的洄游習性，分為越冬洄游和生殖洄游，其產卵期在4～6月間，懷卵量30～100萬粒。近年來中國對蝦的年養殖產量穩定在4
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5萬噸，養殖區域主要分布在長江以北的江蘇、山東、天津、河北和遼寧等黃渤海沿岸地區。
[0003]目前，中國對蝦主要通過外觀辨別雌雄。性成熟的雌蝦體長在18cm～23cm，體重60g～80g，呈青綠色；成熟的雄蝦體長在13cm～17cm，體重30g～40g，呈黃褐色；雌蝦平均體重比雄蝦重一倍以上，因而其市場價值也大大高于雄性個體。并且中國對蝦上市規格、等級的不同，也會極大地影響養殖經濟效益。因此，建立中國對蝦單性育種和養殖技術，將有助于提高養殖產量，增加漁民收入。但是，中國對蝦幼蝦特別是發育早期的幼體很難通過外觀辨別雌雄，也尚無通過分子技術對中國對蝦進行性別鑒定的方法，這極大阻礙了其單性育種和養殖產業的發展。
[0004]研究表明中國對蝦性別決定類型為ZW型，即雌性為ZW型，而雄性為ZZ型。中國對蝦已發布的參考基因組是基于雄性個體進行組裝。本專利技術根據雌雄中國對蝦重測序數據，組裝了雌性W染色體特異序列，并基于該特異序列開發了雌性特異性引物。

技術實現思路

[0005]本專利技術提供了中國對蝦雌性特異性基因及其檢測引物和應用，其能夠大規模快速準確地鑒定生長各種時期，尤其是發育早期的中國對蝦的遺傳性別。
[0006]為實現上述專利技術目的，本專利技術采用以下技術方案予以實現：
[0007]本專利技術提供了中國對蝦雌性特異性基因，其核苷酸序列如SEQ ID No.6所示。
[0008]本專利技術還提供了中國對蝦雌性特異性引物，用于檢測所述的中國對蝦雌性特異性基因，其核苷酸序列為：
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[0011]本專利技術還提供了一種用于鑒定中國對蝦遺傳性別的試劑盒，所述試劑盒中包含權利要求2所述的中國對蝦雌性特異性引物。
[0012]本專利技術還提供了所述的中國對蝦雌性特異性引物在鑒定中國對蝦遺傳性別中的應用。
[0013]本專利技術還提供了一種鑒定中國對蝦遺傳性別的方法，所述方法包括利用所述的中國對蝦雌性特異性引物進行檢測的步驟。
[0014]進一步的，所述步驟具體為：提取中國對蝦待測樣本的基因組DNA作為模板，利用權利要求2所述的中國對蝦雌性特異性引物對模板進行PCR擴增；如果擴增產物出現大小分別為378bp和220bp的兩條條帶，則待測樣本為雌性中國對蝦，如果擴增產物僅出現一條大小為378bp的條帶，則待測樣本為雄性中國對蝦。
[0015]進一步的，所述378bp的擴增條帶對應的核苷酸序列如SEQ ID No.5所示；所述220bp的擴增條帶為特異性擴增條帶，其對應的核苷酸序列如SEQ ID No.6所示。
[0016]進一步的，為了避免由模板出現問題而造成的鑒定結果誤判，在利用所述的中國對蝦雌性特異性引物對模板進行PCR擴增時，同時利用對照引物對模板進行PCR擴增；所述對照引物的核苷酸序列為：
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[0019]進一步的，若利用對照引物擴增模板得到PCR產物，經電泳后出現一條大小為378bp的條帶，則判定基因組DNA模板不存在問題；若經電泳后得不到大小為378bp的條帶，則判定基因組DNA模板存在問題。
[0020]進一步的，所述PCR擴增的反應條件為：94℃預變性5min；94℃變性30s，56℃退火30s，72℃延伸30s，重復35個循環；最后72℃延伸7min，4℃保存。
[0021]進一步的，所述PCR擴增體系包括7.5μL 2
×
Taq PCR Mix、上下游引物各0.3μL、DNA模板1μL，補足滅菌雙蒸水至15μL。
[0022]進一步的，所述中國對蝦待測樣本為中國對蝦發育早期的幼體、中國對蝦仔蝦、中國對蝦成蝦的活體或凍存樣本。
[0023]本專利技術與現有技術相比，具有以下優點和有益效果：
[0024]本專利技術設計的中國對蝦雌性特異性引物對中國對蝦的遺傳性別鑒定具有很強的特異性。所述特異性引物對以及相應的中國對蝦遺傳性別鑒定方法能夠快速準確對不同時期的中國對蝦進行鑒定，且鑒定方法簡單有效，只需通過對擴增產物的電泳結果進行觀察即可，當擴增產物出現220bp的特異性擴增條帶和378bp的擴增條帶判定為雌性中國對蝦，當擴增產物僅出現378bp的擴增條帶時判定為雄性中國對蝦。并且，本專利技術的鑒定方法不局限于中國對蝦的發育時期，尤其是能夠在發育初期進行性別鑒別，克服了現在無法對中國對蝦幼體進行性別鑒定的缺陷，而且無論是對蝦的活體或者凍存樣本也都能進行性別鑒定，因此本專利技術的使用范圍廣。本專利技術還設計了一對內參引物，將其同時與特異性異物一起擴增，即可簡單的判斷作為模板的基因組DNA是否存在問題，避免對鑒定結果的誤判，提高鑒定的正確率。本專利技術不僅拓展了中國對蝦遺傳性鑒定的方法，并且非常有利于中國對蝦單性育種和養殖產業的發展。
附圖說明
[0025]圖1是基于本專利技術對20尾已知性別的“黃海1號”中國對蝦遺傳性別鑒定的凝膠電泳圖；其中M為Marker，左側為雌性中國對蝦，右側為雄性中國對蝦。
[0026]圖2是基于本專利技術對12尾已知性別的海捕野生中國對蝦遺傳性別鑒定的凝膠電泳
圖；其中M為Marker，左側為雌性中國對蝦，右側為雄性中國對蝦。
具體實施方式
[0027]結合以下具體實例對本專利技術的技術方案作進一步詳細的說明。下述實施例中，如無特殊說明，所使用的實驗方法均為常規方法，所用材料、試劑等均可從生物或化學試本文檔來自技高網...

【技術保護點】

【技術特征摘要】
1.中國對蝦雌性特異性基因，其特征在于，其核苷酸序列如SEQ ID No.6所示。2.中國對蝦雌性特異性引物，其特征在于，用于檢測權利要求1所述的中國對蝦雌性特異性基因，其核苷酸序列為：Female
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。3.一種用于鑒定中國對蝦遺傳性別的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒中包含權利要求2所述的中國對蝦雌性特異性引物。4.權利要求2所述的中國對蝦雌性特異性引物在鑒定中國對蝦遺傳性別中的應用。5.一種鑒定中國對蝦遺傳性別的方法，其特征在于，所述方法包括利用權利要求2所述的中國對蝦雌性特異性引物進行檢測的步驟。6.根據權利要求5所述的方法，其特征在于，所述步驟具體為：提取中國對蝦待測樣本的基因組DNA作為模板，利用權利要求2所述的中國對蝦雌性特異性引物對模板進行PCR擴增；如果擴增產物出現大小分別為378bp和220bp的兩條條帶...

【專利技術屬性】
技術研發人員：王瓊，何玉英，任憲云，呂建建，王佳佳，劉萍，李健，
申請(專利權)人：中國水產科學研究院黃海水產研究所，
類型：發明
國別省市：