一種哈維氏弧菌感染的生物標(biāo)志物制造技術(shù)

本發(fā)明專利技術(shù)屬于生物技術(shù)領(lǐng)域，公開了一種哈維氏弧菌感染的生物標(biāo)志物，具體公開了一種哈維氏弧菌感染的生物標(biāo)志物，所述生物標(biāo)志物包括氨基肽酶、鈣轉(zhuǎn)運(yùn)ATP酶、組蛋白H2B和組蛋白H2A中的至少一種。本發(fā)明專利技術(shù)在感染哈維氏弧菌的病魚的細(xì)菌感染特征中，對海洋硬骨魚半滑舌鰨粘液中的DEPs進(jìn)行了鑒定和開發(fā)，并進(jìn)過qRT

【技術(shù)實(shí)現(xiàn)步驟摘要】
一種哈維氏弧菌感染的生物標(biāo)志物


[0001]本專利技術(shù)屬生物
，具體涉及一種哈維氏弧菌感染的生物標(biāo)志物。

技術(shù)介紹

[0002]粘液是抵抗不利環(huán)境的第一道天然屏障，與外部因素直接接觸，在逆境階段，粘液中分子成分的改變將為評估病理狀態(tài)和過程提供一個指示性標(biāo)準(zhǔn)。同時，粘液是一種友好的樣本類型，極易獲得，幾乎不會對宿主造成損害。粘液是一種來源于魚體最大的組織—皮膚的外分泌體液，它含有多種特定的蛋白質(zhì)和代謝物，這些蛋白質(zhì)和代謝物具有特定的功能特征，這些功能特征具體描述了生物體的生理狀態(tài)，這使得它在無創(chuàng)診斷和生理狀態(tài)檢測方面具有天然優(yōu)勢。
[0003]感染哈維氏弧菌的半滑弧菌的腐爛尾巴、皮膚潰瘍和鱗片脫落都反映了皮膚粘膜屏障的破壞，因此感染哈維氏弧菌容易導(dǎo)致海魚養(yǎng)殖業(yè)出現(xiàn)嚴(yán)重?fù)p失。作為第一道防線，魚類表皮粘液富含多種蛋白質(zhì)和多糖，包括許多免疫相關(guān)分子，如免疫球蛋白、C3、肌動蛋白、凝集素、組蛋白、溶菌酶、粘蛋白、熱休克分子、超氧化物歧化酶和轉(zhuǎn)鐵蛋白。研究了魚類皮膚粘液的組成及其在不同條件下的相對變化?，F(xiàn)研究表明，在感染方面，當(dāng)面臨細(xì)菌或寄生蟲入侵時，如黃鯰(Pelteobagrus fulvidraco)、褐斑石斑魚(Epinephelus fuscoguttatus)、大西洋鱈魚(Gadus morhua)、金槍魚(Sparus aurata)、大安伯杰克(Seriola dumerili)和鯉魚(Cyprinus carpio)等魚類皮膚粘液的蛋白質(zhì)組學(xué)圖譜將發(fā)生改變；當(dāng)用某些益生菌或昆蟲幼蟲喂養(yǎng)魚類時，也觀察到皮膚粘液中免疫蛋白的顯著變化；正(有利)或負(fù)(不利)刺激干擾宿主皮膚粘液系統(tǒng)的穩(wěn)態(tài)，導(dǎo)致部分硬骨魚的外觀表型、基因表達(dá)水平、酶活性和蛋白質(zhì)組學(xué)特征發(fā)生不同程度的變化。上述研究表明皮膚粘液與魚類的免疫和感染存在著密切相關(guān)。
[0004]蛋白質(zhì)組研究經(jīng)歷了二維電泳、無標(biāo)記LC/MS
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MS、相對和絕對定量的等壓標(biāo)簽(iTRAQ)和TMT從低通量和分辨率到高通量定量蛋白質(zhì)組篩選的過程。其中iTRAQ分析是一種廣泛應(yīng)用的高通量技術(shù)，用于蛋白質(zhì)組研究，適用于細(xì)胞質(zhì)蛋白、膜蛋白和核蛋白。iTRAQ測序側(cè)重于組間常見蛋白質(zhì)的相對表達(dá)豐度，而不考慮特定組中呈現(xiàn)的特定類型的蛋白質(zhì)。目前的魚類感染檢測方法主要是針對病原體的微生物學(xué)、免疫學(xué)和分子技術(shù)，而硬骨魚中很少報告生物標(biāo)記物指示疾病的相關(guān)技術(shù)。在人類中，C反應(yīng)蛋白(CRP)、降鈣素原(PCT)、血清淀粉樣蛋白A(SAA)和白細(xì)胞介素(IL)
?
6都是指示炎癥和感染的常見生物標(biāo)記物，其濃度被認(rèn)為與炎癥的程度和模式有關(guān)。然而，到目前為止，在魚類中還沒有這樣的生物標(biāo)記物。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

[0005]本專利技術(shù)第一方面的目的，在于提供一種哈維氏弧菌感染的生物標(biāo)志物。
[0006]本專利技術(shù)第二方面的目的，在于提供檢測本專利技術(shù)第一方面的生物標(biāo)志物表達(dá)量的試劑在制備細(xì)菌感染檢測試劑盒中的應(yīng)用。
[0007]本專利技術(shù)第三方面的目的，在于提供檢測本專利技術(shù)第一方面生物標(biāo)志物表達(dá)量的試劑在制備細(xì)菌感染預(yù)測制劑中的應(yīng)用。
[0008]本專利技術(shù)第四方面的目的，在于提供一種試劑盒。
[0009]本專利技術(shù)第五方面的目的，在于提供本專利技術(shù)第四方面的試劑盒的使用方法。
[0010]本專利技術(shù)第六方面的目的，在于提供一種用于檢測魚類哈維氏弧菌感染的檢測裝置。
[0011]本專利技術(shù)第七方面的目的，在于提供一種用于檢測魚類哈維氏弧菌感染的檢測系統(tǒng)。
[0012]為了實(shí)現(xiàn)上述目的，本專利技術(shù)所采取的技術(shù)方案是：
[0013]本專利技術(shù)的第一個方面，提供一種哈維氏弧菌感染的生物標(biāo)志物，所述生物標(biāo)志物包括氨基肽酶、鈣轉(zhuǎn)運(yùn)ATP酶、組蛋白H2B和組蛋白H2A中的至少一種。
[0014]優(yōu)選地，所述生物標(biāo)志物為氨基肽酶。
[0015]本專利技術(shù)的第二個方面，提供檢測本專利技術(shù)第一方面的生物標(biāo)志物表達(dá)量的試劑在制備細(xì)菌感染檢測試劑盒中的應(yīng)用。
[0016]優(yōu)選地，所述試劑包括在基因或蛋白水平上檢測生物標(biāo)志物的試劑。
[0017]優(yōu)選地，所述在基因水平上檢測生物標(biāo)志物的試劑包括通過測序技術(shù)、核酸雜交技術(shù)、核酸擴(kuò)增技術(shù)或免疫測定的方法檢測標(biāo)志物基因表達(dá)水平的試劑。
[0018]優(yōu)選地，所述在蛋白水平上檢測生物標(biāo)志物的試劑包括免疫組化、蛋白免疫印跡、酶聯(lián)免疫吸附(ELISA)、流式細(xì)胞術(shù)、化學(xué)發(fā)光、電化學(xué)、紫外分光光度法
?
近紅外光譜法、液相芯片法、高效液相色譜法、比色法或質(zhì)譜鑒定的方法檢測蛋白表達(dá)水平的試劑。
[0019]優(yōu)選地，所述細(xì)菌為哈維氏弧菌。
[0020]本專利技術(shù)的第三個方面，提供檢測本專利技術(shù)第一方面的生物標(biāo)志物表達(dá)量的試劑在制備細(xì)菌感染預(yù)測制劑中的應(yīng)用。
[0021]優(yōu)選地，所述試劑包括在基因或蛋白水平上檢測生物標(biāo)志物的試劑。
[0022]優(yōu)選地，所述在基因水平上檢測生物標(biāo)志物的試劑包括通過測序技術(shù)、核酸雜交技術(shù)、核酸擴(kuò)增技術(shù)或免疫測定的方法檢測標(biāo)志物基因表達(dá)水平的試劑。
[0023]優(yōu)選地，所述在蛋白水平上檢測生物標(biāo)志物的試劑包括免疫組化、蛋白免疫印跡、酶聯(lián)免疫吸附(ELISA)、流式細(xì)胞術(shù)、化學(xué)發(fā)光、電化學(xué)、紫外分光光度法
?
近紅外光譜法、液相芯片法、高效液相色譜法、比色法或質(zhì)譜鑒定的方法檢測蛋白表達(dá)水平的試劑。
[0024]優(yōu)選地，所述細(xì)菌為哈維氏弧菌。
[0025]本專利技術(shù)的第四個方面，提供一種試劑盒，包括檢測本專利技術(shù)第一方面的生物標(biāo)志物的表達(dá)水平的試劑。
[0026]優(yōu)選地，所述試劑包括在基因或蛋白水平上檢測生物標(biāo)志物的試劑。
[0027]優(yōu)選地，所述試劑盒包括生化診斷試劑盒、免疫診斷試劑盒、或分子診斷試劑盒中的一種或多種。
[0028]優(yōu)選地，所述試劑盒為免疫診斷試劑盒。
[0029]優(yōu)選地，所述試劑盒包括Western印跡試劑盒、酶聯(lián)免疫吸附測定(ELISA)試劑盒、放射免疫測定(RIA)試劑盒、放射免疫擴(kuò)散試劑盒、ouchterlony免疫擴(kuò)散試劑盒、火箭免疫電泳試劑盒、免疫組織化學(xué)染色試劑盒、免疫沉淀測定試劑盒、補(bǔ)體結(jié)合測定試劑盒、熒光
激活細(xì)胞分選(FACS)試劑盒、適體芯片試劑盒、微陣列試劑盒、蛋白質(zhì)芯片試劑盒中的一種或多種。
[0030]本專利技術(shù)的第五個方面，提供本專利技術(shù)第四方面的試劑盒的使用方法，以下步驟：采集待測樣品，檢測所述樣品中生物標(biāo)志物的表達(dá)水平。
[0031]優(yōu)選地，所述樣品為魚類皮膚粘液。
[0032]本專利技術(shù)的第六個方面，提供一種用于檢測魚類哈維氏弧菌感染的檢測裝置，所述檢測裝置包括用于檢測本專利技術(shù)第一方面的生物標(biāo)志物表達(dá)量的試劑。
[0033]優(yōu)選地，所述魚類為硬骨魚；進(jìn)一步為半滑舌鰨。
[0034]本專利技術(shù)的第七個方面，提供一種用于檢測魚類哈維氏弧菌感染的檢測系統(tǒng)，所述檢測系統(tǒng)包括用于檢測本專利技術(shù)第一方面的生物標(biāo)志物表達(dá)量的試劑。<本文檔來自技高網(wǎng)...

【技術(shù)保護(hù)點(diǎn)】

【技術(shù)特征摘要】
1.一種哈維氏弧菌感染的生物標(biāo)志物，其特征在于，所述生物標(biāo)志物包括氨基肽酶、鈣轉(zhuǎn)運(yùn)ATP酶、組蛋白H2B和組蛋白H2A中的至少一種。2.檢測權(quán)利要求1所述的生物標(biāo)志物表達(dá)量的試劑在制備細(xì)菌感染檢測試劑盒中的應(yīng)用。3.檢測權(quán)利要求1所述的生物標(biāo)志物表達(dá)量的試劑在制備細(xì)菌感染預(yù)測制劑中的應(yīng)用。4.根據(jù)權(quán)利要求2或3所述的應(yīng)用，其特征在于，所述試劑包括在基因或蛋白水平上檢測生物標(biāo)志物的試劑。5.根據(jù)權(quán)利要求4所述的應(yīng)用，其特征在于，所述細(xì)菌為哈維氏弧菌。6.一種試劑盒，包括檢測權(quán)...

【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：趙娜，張博，朱春華，黃洋，王秋梅，鄧秋霞，茹笑影，朱旭楓，胡琴，
申請(專利權(quán))人：南方海洋科學(xué)與工程廣東省實(shí)驗(yàn)室湛江，
類型：發(fā)明
國別省市：