一株嘔吐毒素降解菌及其應用制造技術

一株嘔吐毒素降解菌，其特征在于：該降解菌為地衣芽胞桿菌（Bacillus?licheniformis）FMM?hx，該菌株2018年6月11日保藏于中國典型培養物保藏中心，保藏編號為CCTCC?NO:M?2018358。本發明專利技術的嘔吐毒素降解菌可高效降解嘔吐毒素，明顯降低糧食或飼料中的嘔吐毒素含量，在嘔吐毒素污染的玉米、小麥等糧食及飼料的生物脫毒處理方面具有較好的應用價值。

A Vomitoxin Degrading Bacteria and Its Application

A vomiting toxin degrading bacterium is characterized by: the degrading bacterium is FMM HX of Bacillus licheniformis, which is deposited in the typical culture preservation center of China on June 11, 2018, and the preservation number is CCTCC NO: M 2018358. The vomiting toxin degrading bacteria of the invention can efficiently degrade vomiting toxin, significantly reduce the content of vomiting toxin in grain or feed, and has good application value in the biological detoxification treatment of grain and feed polluted by vomiting toxin, such as corn, wheat, etc.

【技術實現步驟摘要】
一株嘔吐毒素降解菌及其應用
本專利技術具體涉及一株可降解嘔吐毒素的地衣芽胞桿菌及其應用，屬于生物

技術介紹
鐮刀菌在糧食和飼料中生長可產生嘔吐毒素，該毒素的攝入可引起人和家畜的嘔吐反應以及急性和慢性中毒。因此，對嘔吐毒素污染的糧食和飼料的脫毒處理具有重要的理論和實際意義。目前，發達國家和部分發展中國家對食品和飼料中嘔吐毒素（DON）的限量標準具有明確的規定并禁止嘔吐毒素超標的食品和飼料在市場上銷售。因此，消除食品和飼料中超限的嘔吐毒素是全球研究的熱點。嘔吐毒素的脫毒處理主要為物理法、化學法和生物法脫毒。其中，生物法是利用微生物及其分泌的酶等代謝物降解嘔吐毒素，由于微生物降解嘔吐毒素具有高效、成本低，對食品、飼料和環境無污染等特點，因此在消解真菌毒素方面具有潛在的應用價值。近年來，已發現多種微生物可降解嘔吐毒素，其相關應用研究也在推進，并在業內受到關注。
技術實現思路
本專利技術的目的正是基于上述現有技術狀況，而提供一株嘔吐毒素降解菌，該菌株是從土壤樣品中篩選到了一株可高效降解嘔吐毒素的地衣芽胞桿菌，分析其降解機理及應用效果，并為該菌在嘔吐毒素污染的糧食及飼料的生物脫毒處理方面的應用提供了理論基礎和技術條件。本專利技術的目的是通過以下技術方案來實現的：本專利技術的嘔吐毒素降解菌，為地衣芽胞桿菌（Bacilluslicheniformis）FMM-hx，該菌株2018年6月11日保藏于中國典型培養物保藏中心，保藏編號為CCTCCNO:M2018358，保藏單位地址為湖北省武漢市，武漢大學保藏中心，郵編430072。該地衣芽胞桿菌FMM-hx的菌落為扁平、邊緣不整齊、表面粗糙，邊緣白色但中心為粉色；主要生物學特性如下：革蘭氏陽性（G+），菌體為直桿狀，兼性厭氧；接觸酶陽性、V－P反應陽性、檸檬酸鹽實驗陽性。一種嘔吐毒素降解菌劑，含有上述地衣芽胞桿菌（Bacilluslicheniformis）FMM-hx或其發酵產物，該菌劑為噴霧干燥制備的粉狀產品。本專利技術的嘔吐毒素降解菌在降解糧食或飼料中嘔吐毒素的應用，可明顯降低糧食或飼料中嘔吐毒素的含量。本專利技術的優點是：可高效降解嘔吐毒素，明顯降低糧食或飼料中的嘔吐毒素含量，在嘔吐毒素污染的玉米、小麥等糧食及飼料的生物脫毒處理方面具有較好的應用價值。附圖說明：圖1為菌株FMM-hx降解DON液相圖。圖1中，A：對照組；B：實驗組。具體實施方式本專利技術以下結合實施例做進一步描述：下述實施例中所使用的實驗方案如無特殊說明，均為常規方法。下述實施例中中所用的材料、試劑等，如無特殊說明，均可從商業途徑得到。下述實施例中的定量試驗，均設置三次重復，結果取平均值。初篩培養基：1g(NH4)2SO4，0.5gNaCl，3gKH2PO4，0.05gCaCl2，6gK2HPO4?3H2O，0.5gMgSO4·7H2O，0.001gFeSO4·7H2O，20g瓊脂溶解于1000ml蒸餾水中，在121℃滅菌20min，等培養基冷卻后，每瓶加入DON至終濃度為10μg/ml。NB培養基（種子培養基）：3g酵母粉，5g蛋白胨，6g葡萄糖，10gNaCl，溶解于1000mL蒸餾水中。LB固體培養基：10g胰蛋白胨，5g酵母粉，10gNaCl，20g瓊脂溶解于1000ml蒸餾水中。實施例1降解嘔吐毒素的地衣芽胞桿菌（Bacilluslicheniformis）FMM-hx(CCTCCM2018358）的分離及鑒定一、菌株的分離2018年1月采集河南鄭州的土壤，帶回實驗室后稱取10g樣品放入裝有90ml無菌水的三角瓶，于35℃，180r/min搖床震蕩1h,帶樣品均勻分散到無菌水中后，吸取1ml懸液于裝有9ml無菌水的試管中，混勻，制成濃度分別為10-1-10-6g/ml的菌懸液，從各濃度的菌懸液中分別吸取200μl涂布于初篩培養基平板上，35℃恒溫培養箱培養2d-3d。待菌落長出后，挑選平板上形態、大小、顏色、透明度不同的單菌落于初篩培養基上劃線純化，并于相同條件培養，記作初步篩選的DON降解菌。再將初步篩選的DON降解菌接入種子培養基，35℃、180r/min搖床培養24h，接種1ml種子培養基于24ml含DON的NB培養基中，在相同條件下培養5d，對照組為加DON不接菌的復篩培養基（即NB培養基）。做DON降解實驗，將得到的DON降解能力最強的一株菌，將其命名為FMM-hx。二、菌株的鑒定將菌株FMM-hx在LB固體培養基上35℃培養48h后，菌株FMM-hx的菌落為扁平、邊緣不整齊、表面粗糙，邊緣白色但中心為粉色。菌株FMM-hx的主要生物學特性如下：革蘭氏陽性（G+），菌體為直桿狀，兼性厭氧；接觸酶陽性、V－P反應陽性、檸檬酸鹽實驗陽性。菌株FMM-hx的16SrRNA基因部分序列如SEQIDNo.1所示（參見后附序列表）。菌株FMM-hx的分類命名為地衣芽胞桿菌（Bacilluslicheniformis），該菌已于2018年6月11日保藏于中國典型培養物保藏中心，地址：湖北省武漢市武昌珞珈山，武漢大學保藏中心，郵編：430072，保藏編號為CCTCCM2018358。實施例2地衣芽胞桿菌（Bacilluslicheniformis）FMM-hx降解嘔吐毒素的能力一、將菌株FMM-hx按上述方法接種于5ml的NB培養基，于震蕩搖床35℃、180r/min培養24h，取1ml菌懸液于24ml含500μl1mg/mlDON的NB培養基中，對照組為加DON不接菌的復篩培養基，在相同條件下培養5d后檢測菌株FMM-hx對DON的降解能力。二、FMM-hx對DON降解效果的檢測取1ml培養液于4℃、12000rpm離心15min，取上清過0.22μm微孔濾膜后，再用帶有紫外檢測器的HPLC檢測培養基中DON的剩余量。HPLC檢測DON的條件為：色譜柱：Agilentzorbaxsb-C18（規格：4.6×250mm，粒徑5μm）；柱溫：35℃；進樣量：10μl；流動相：甲醇：水(30：70，v/v)；流速：1ml/min；檢測波長：218nm。DON降解率（%）=（對照組DON含量-實驗組DON含量）/對照組DON含量×100。結果如圖1所示。圖1中，A：對照組；B：實驗組。結果表明，FMM-hx對DON有較好的降解效果，降解效果為84.62%。實施例3地衣芽胞桿菌（Bacilluslicheniformis）FMM-hx在腐敗玉米嘔吐毒素降解中的應用在100g無菌玉米中接種禾谷鐮刀菌并于28℃培養箱中培養15d后，粉碎被污染的玉米并加入200ml蒸餾水，使用超聲處理20min提取玉米中的DON。將地衣芽胞桿菌FMM-hx在NB培養基于35℃培養24h，并取10%培養液于100ml過濾提取液中，以100ml過濾提取溶液中加入10ml蒸餾水作為實驗對照，然后在35℃180rpm培養3d。如上所述通過HPLC檢測超聲處理前后、以及培養后提取液中DON的余量。結果表明，采用蒸餾水超聲提取被禾谷鐮刀菌污染的玉米粉中的DON。超聲處理后的玉米中DON的含量低至536μg/kg，玉米中DON的含量降低了約90％，這遠遠低于中國國家標準規定的玉米限量標準。在DON提取液中加入10％地衣芽胞桿菌FMM-hx培養物本文檔來自技高網...

【技術保護點】
1.一株嘔吐毒素降解菌，其特征在于：該降解菌為地衣芽胞桿菌（Bacillus?licheniformis）FMM?hx，該菌株2018年6月11日保藏于中國典型培養物保藏中心，保藏編號為CCTCC?NO:?M?2018358。

【技術特征摘要】
1.一株嘔吐毒素降解菌，其特征在于：該降解菌為地衣芽胞桿菌（Bacilluslicheniformis）FMM-hx，該菌株2018年6月11日保藏于中國典型培養物保藏中心，保藏編號為CCTCCNO:M2018358。2.根據權利要求1所述的嘔吐毒素降解菌，其特征在于：所述衣芽胞桿菌FMM-hx的菌落為扁平、邊緣不整齊、表面粗糙，邊緣白色但中心為粉色；主要生物學特性如下：革蘭氏陽性（G+），菌體為...

【專利技術屬性】
技術研發人員：張帥兵，付苗苗，翟煥趁，呂揚勇，蔡靜平，胡元森，王金水，
申請(專利權)人：河南工業大學，
類型：發明
國別省市：河南,41