本發明專利技術涉及疏螺旋體鞭毛蛋白FlaB抗體的制備和應用。其通過PCR方法從疏螺旋體基因組擴增得到FlaB的基因片段，克隆至含組氨酸標簽的原核表達載體pET30a中，再轉入大腸桿菌BL21感受態細胞，通過IPTG進行誘導表達，親和純化得到FlaB蛋白，免疫小鼠獲得了抗疏螺旋體鞭毛蛋白FlaB抗體,為疏螺旋體的檢測和深入研究打下了堅實的基礎。
Acquisition and Application of FlaB Antibody to Flagellin of Treponema laevis
The present invention relates to the preparation and application of flagellin FlaB antibody of Treponema laevis. FlaB gene fragment was amplified from Treponema larvae genome by PCR and cloned into prokaryotic expression vector pET30a with histidine label. Then it was transformed into competent cells of Escherichia coli BL21. FlaB protein was induced by IPTG and purified affinity. FlaB antibody against Treponema larvae flagellin was obtained from immunized mice, which laid a foundation for further study and detection of Treponema larvae. A solid foundation.
【技術實現步驟摘要】
疏螺旋體鞭毛蛋白FlaB抗體的獲取方式及應用
本專利技術涉及生物免疫相關領域，具體涉及疏鞭毛蛋白FlaB抗體制備方法，更具體涉利用所制備的抗體通過不同免疫學方法檢測疏螺旋體的應用。技術背景回歸熱是由虱子和蜱作為媒介，疏螺旋體細菌感染引起的一種傳染病(Schwan,T.G.andJ.Piesman,Vectorinteractionsandmolecularadaptationsoflymediseaseandrelapsingfeverspirochetesassociatedwithtransmissionbyticks.EmergInfectDis,2002.8(2):p.115-21；Cutler,S.J.,Possibilitiesforrelapsingfeverreemergence.EmergInfectDis,2006.12(3):p.369-74)。多數患者在感染后的5至15天出現臨床反應，包括忽冷、忽熱、頭疼、肌肉或關節疼痛以及惡心反胃等癥狀(Ramos,J.M.,etal.,Resultsofa10-yearsurveyoflouse-bornerelapsingfeverinsouthernEthiopia:adeclineinendemicity.AnnTropMedParasitol,2008.102(5):p.467-9；Cutler,S.J.,Relapsingfever--aforgottendiseaserevealed.JApplMicrobiol,2010.108(4):p.1115-22.)，是由螺旋體產生的內毒素樣物質引起的(Snowden,J.andS.S.Bhimji,RelapsingFever,inStatPearls.2018,StatPearlsPublishingStatPearlsPublishingLLC.:TreasureIsland(FL).)。重癥可有黃疸(Schwan,T.G.etal.),如不及時治療，癥狀會反復發生,在患者自行緩解之前會經歷1到4次發熱(FotsoFotso,A.andM.Drancourt,LaboratoryDiagnosisofTick-BorneAfricanRelapsingFevers:LatestDevelopments.FrontPublicHealth,2015.3:p.254；Kutsuna,S.,etal.,ThefirstcaseofimportedrelapsingfeverinJapan.AmJTropMedHyg,2013.89(3):p.460-1.)。雖然回歸熱通常是一種輕微的疾病，但可能導致患者嚴重不適并會發生嚴重的后遺癥甚至死亡(Lopez,J.E.,etal.,Real-timemonitoringofdiseaseprogressioninrhesusmacaquesinfectedwithBorreliaturicataebytickbite.JInfectDis,2014.210(10):p.1639-48；Forrester,J.D.,etal.,Tickbornerelapsingfever-UnitedStates,1990-2011.MMWRMorbMortalWklyRep,2015.64(3):p.58-60.)。回歸熱明確診斷主要基于在發熱期采集的外周血涂片中檢測螺旋體是否存在(Kutsuna,S.,etal.)。但是在發作和晚期復發之間，螺旋體可能根本不可見(Snowden,J.etal.；Forrester,J.D.,etal.)。目前尚未研發出有效疫苗。疏螺旋體屬是長的、薄的、活動的、螺旋的或平波的細菌(Guyard,C.,etal.,Periplasmicflagellarexportapparatusprotein,FliH,isinvolvedinpost-transcriptionalregulationofFlaB,motilityandvirulenceoftherelapsingfeverspirocheteBorreliahermsii.PLoSOne,2013.8(8):p.e72550.)。在螺旋體門內形成高度獨特的單系譜系。該屬的成員是萊姆病和回歸熱的病原體(Adeolu,M.andR.S.Gupta,AphylogenomicandmolecularmarkerbasedproposalforthedivisionofthegenusBorreliaintotwogenera:theemendedgenusBorreliacontainingonlythemembersoftherelapsingfeverBorrelia,andthegenusBorreliellagen.nov.containingthemembersoftheLymediseaseBorrelia(Borreliaburgdorferisensulatocomplex).AntonieVanLeeuwenhoek,2014.105(6):p.1049-72.)，萊姆病是目前北美洲和歐亞大陸溫帶地區最流行的媒介傳播疾病，回歸熱是世界許多不同地區特有的疾病(Elbir,H.,D.Raoult,andM.Drancourt,RelapsingfeverborreliaeinAfrica.AmJTropMedHyg,2013.89(2):p.288-92；Trape,J.F.,etal.,TheepidemiologyandgeographicdistributionofrelapsingfeverborreliosisinWestandNorthAfrica,withareviewoftheOrnithodoroserraticuscomplex(Acari:Ixodida).PLoSOne,2013.8(11):p.e78473；Wilting,K.R.,etal.,Louse-bornerelapsingfever(Borreliarecurrentis)inasylumseekersfromEritrea,theNetherlands,July2015.EuroSurveill,2015.20(30).)。但如何獲得更快的制備有效的抗體用于回歸熱螺旋體的血清學檢測是需要研究的課題。
技術實現思路
疏螺旋體鞭毛蛋白FlaB具有保守性而且是主要的抗原蛋白，本專利技術通過原核表達系統表達疏螺旋體鞭毛蛋白FlaB，并用純化的鞭毛蛋白FlaB免疫小鼠，制備抗FlaB抗體，以期為回歸熱螺旋體的血清學檢測及后續其它研究奠定基礎。對此，本專利技術提供一種疏螺旋體鞭毛蛋白FlaB的抗體制備方法，其特征在于：包括如下步驟：(1)用鞭毛蛋白FlaB免疫小鼠；(2)收集免疫后小鼠血清制備抗體，所述抗體用于檢測螺旋體。優選地，所述鞭毛蛋白FlaB通過基因工程獲得，更優選地，所述鞭毛蛋白FlaB通過基因工程獲得方法具體包括如下步驟：(1)擴增疏螺旋體FlaB基因引物的設計；(2)疏螺旋體FlaB基因的PCR擴增；(3)疏螺旋體鞭毛蛋白FlaB基因克隆；(4)疏螺旋體鞭毛蛋白Fl本文檔來自技高網...
【技術保護點】
1.一種疏螺旋體鞭毛蛋白FlaB的抗體制備方法，其特征在于：包括如下步驟：（1）用鞭毛蛋白FlaB免疫小鼠；（2）收集免疫后小鼠血清制備抗體，所述抗體用于檢測螺旋體。
【技術特征摘要】
1.一種疏螺旋體鞭毛蛋白FlaB的抗體制備方法，其特征在于：包括如下步驟：（1）用鞭毛蛋白FlaB免疫小鼠；（2）收集免疫后小鼠血清制備抗體，所述抗體用于檢測螺旋體。2.如權利要求1所述的方法，其特征在于：所述鞭毛蛋白FlaB通過基因工程獲得。3.如權利要求2所述的方法，其特征在于：所述鞭毛蛋白FlaB通過基因工程獲得方法具體包括如下步驟：（1）擴增疏螺旋體FlaB基因引物的設計；（2）疏螺旋體FlaB基因的PCR擴增；（3）疏螺旋體鞭毛蛋白FlaB基因克隆；（4）疏螺旋體鞭毛蛋白FlaB表達和蛋白純化，其所述用表達載體為載體pET-30a，表達系統為原核表達系統，優選為大腸桿菌。4.如權利要求1所述的方法，其特征在于：所述免疫小鼠的步驟為：（1）取免疫前的小鼠全血制備免疫前血清，制備抗原溶液；（2）抗原溶液與佐劑QuickAntibody–Mouse5W混合制備免疫注射藥劑；（3）通過小鼠左右大腿進行肌肉注射；其中優選采用8-12周齡Balb/c小鼠；（4）3周后以同...
【專利技術屬性】
技術研發人員：劉紅旗，時宇，陸巍，李昕潼，張靜，陶玉芬，劉建生，
申請(專利權)人：中國醫學科學院醫學生物學研究所，
類型：發明
國別省市：云南,53
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