靶向抗腫瘤藥物系統(tǒng)及其制備方法技術(shù)方案

本發(fā)明專利技術(shù)提供一種靶向抗腫瘤藥物系統(tǒng)及其制備方法，所述靶向抗腫瘤藥物系統(tǒng)包括核酸適體載體與固載在核酸適體載體上的抗腫瘤藥物；所述抗腫瘤藥物為蒽環(huán)類抗生素和卟啉；所述核酸適體載體為經(jīng)過退火處理的核酸適體。本發(fā)明專利技術(shù)提供的靶向抗腫瘤藥物系統(tǒng)及其制備方法，旨在基于核酸適體的導(dǎo)向作用和高選擇性作用，靶向負(fù)載雙重抗腫瘤藥物，實(shí)現(xiàn)運(yùn)用化學(xué)療法和光動(dòng)力療法聯(lián)合使用，達(dá)到雙重抑制腫瘤增殖的目的。

Target antitumor drug system and its preparation methods

【技術(shù)實(shí)現(xiàn)步驟摘要】
靶向抗腫瘤藥物系統(tǒng)及其制備方法
本專利技術(shù)屬于靶向給藥
，具體涉及一種靶向抗腫瘤藥物系統(tǒng)及其制備方法，特別是涉及基于核酸適體靶向固載雙重抗腫瘤藥物的藥物系統(tǒng)及其制備方法。
技術(shù)介紹
道諾霉素是第一代蒽環(huán)類抗腫瘤抗生素，用于各種類型的急性白血病(包括粒細(xì)胞性、淋巴細(xì)胞性和單核細(xì)胞性以及粒-單核細(xì)胞性)、紅白血病、慢性粒細(xì)胞性白血病、惡性淋巴瘤，也可用于神經(jīng)母細(xì)胞病、尤因肉瘤和腎母細(xì)胞瘤等。但是可以引起脫發(fā)、骨髓抑制和心臟毒性等毒副反應(yīng)。目前市售的道諾霉素制劑無法區(qū)分正常細(xì)胞和癌細(xì)胞，缺少靶向性，導(dǎo)致其在治療中對正常細(xì)胞有極大的損害。病人在化療后要忍受藥物的各種副反應(yīng)，其中心臟毒性是不可逆的。光動(dòng)力療法是二十世紀(jì)80年代新發(fā)展起來的一種腫瘤治療方法，通過光敏藥物(光敏劑)進(jìn)入體內(nèi)，富集與病灶后，在匹配吸收波長的激光作用下，生產(chǎn)活性很強(qiáng)的單線態(tài)氧，產(chǎn)生細(xì)胞毒性作用，進(jìn)而導(dǎo)致細(xì)胞受損乃至死亡。光動(dòng)力療法對靶組織及損傷程度具有選擇性，可減少對正常組織的損失，用于臨床腫瘤的輔助治療，可有效提高傳統(tǒng)治療方法的療效。卟啉是常用的光敏劑，經(jīng)過紫外光照射一定時(shí)間，會(huì)產(chǎn)生活性氧從而抑制腫瘤生長。將光動(dòng)力療法與傳統(tǒng)療法進(jìn)行結(jié)合具有顯著協(xié)同增效的抗腫瘤作用，越來越多的研究顯示納米系統(tǒng)或納米載體在聯(lián)合治療手段方面具有獨(dú)特優(yōu)勢。隨著近年來對核酸的深入科學(xué)研究，作為生物材料，核酸已展現(xiàn)了諸多優(yōu)勢，具體包括核酸的生物可降解性、生物相容性好、高穩(wěn)定性、易修飾性和便于分子工程等等。具體對于核酸適體來說，其生物安全性已經(jīng)隨著2004年美國FDA對第一個(gè)核酸適體類藥物的審批而得到了廣泛認(rèn)可。核酸適體是一段寡聚核苷酸，通過配體指數(shù)富集的系統(tǒng)進(jìn)化技術(shù)(Systematicevolutionofligandsbyexponentialenrichment，SELEX)篩選得到。核酸適體具有易篩選、易合成、易儲存、易修飾、高親和力、高生物相容性和生物可降解性等優(yōu)點(diǎn)，并能高效、特異性地與靶分子結(jié)合。另外，很多報(bào)道已顯示，大量的核酸適體具有能被靶細(xì)胞內(nèi)吞的作用。這些優(yōu)點(diǎn)使得核酸適體在醫(yī)學(xué)診斷治療、藥物分子設(shè)計(jì)等方面具有廣泛的應(yīng)用前景。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路
針對現(xiàn)有技術(shù)的不足，本專利技術(shù)提供一種靶向抗腫瘤藥物系統(tǒng)及其制備方法，旨在基于核酸適體的導(dǎo)向作用和高選擇性作用，靶向負(fù)載雙重抗腫瘤藥物，實(shí)現(xiàn)運(yùn)用化學(xué)療法和光動(dòng)力療法聯(lián)合使用，達(dá)到雙重抑制腫瘤增殖的目的。為解決上述問題，一方面，本專利技術(shù)在于提供一種靶向抗腫瘤藥物系統(tǒng)，包括核酸適體載體與固載在核酸適體載體上的抗腫瘤藥物；所述抗腫瘤藥物為蒽環(huán)類抗生素和卟啉；所述核酸適體載體為經(jīng)過退火處理的核酸適體。進(jìn)一步地，所述蒽環(huán)類抗生素為阿霉素、道諾霉素、伊達(dá)比星、米托蒽醌或表阿霉素。進(jìn)一步地，所述卟啉為TMPYP、原卟啉、血卟啉或血卟啉單甲醚。進(jìn)一步地，所述核酸適體為APS8。進(jìn)一步地，所述核酸適體載體的一部分經(jīng)退火后形成具有空間構(gòu)型的G-四連體結(jié)構(gòu)的AS1411，另一部分是含有多個(gè)G-C結(jié)構(gòu)的雙鏈DNA。進(jìn)一步地，所述AS1411的核苷酸序列如SEQIDNO:1所示；所述雙鏈DNA的核苷酸序列如SEQIDNO:2所示。進(jìn)一步地，所述核酸適體載體的核苷酸序列如SEQIDNO:3所示。另一方面，本專利技術(shù)在于提供一種靶向抗腫瘤藥物系統(tǒng)的制備方法，具體包括如下步驟：步驟1：核酸適體的退火處理：核酸適體用無核酸酶水溶解后，用等體積的退火液進(jìn)行退火處理，降至室溫后形成一部分具有空間構(gòu)型的G-四連體結(jié)構(gòu)的AS1411而另一部分含有多個(gè)G-C結(jié)構(gòu)的雙鏈DNA的核酸適體載體；步驟2：蒽環(huán)類抗生素固載：取步驟1所得的核酸適體載體溶液，加入蒽環(huán)類抗生素混勻后進(jìn)行固載；步驟3：卟啉固載：取步驟2所得的混合物溶液，加入卟啉固載后得到靶向抗腫瘤藥物系統(tǒng)。進(jìn)一步地，所述退火液的配制過程如下：取200mM的KCl、4mM的MgCl2、28mM的Tris-HCl于容器中，加水溶解，定量至1L制得。進(jìn)一步地，所述步驟1中退火處理的溫度為90℃，處理時(shí)間為10min。進(jìn)一步地，所述步驟2中固載在冰浴中進(jìn)行2h。進(jìn)一步地，所述步驟3中固載在常溫下進(jìn)行2h。所述常溫是指室溫，具體可以是20～40℃。進(jìn)一步地，所述步驟3得到的靶向抗腫瘤藥物系統(tǒng)在冰箱4℃下保存?zhèn)溆谩Ｅc現(xiàn)有技術(shù)相比，本專利技術(shù)具有如下有益效果：本專利技術(shù)提供一種靶向抗腫瘤藥物系統(tǒng)及其制備方法，所述靶向抗腫瘤藥物系統(tǒng)將單一的化療藥道諾霉素與核酸適體結(jié)合后，增加了藥物的生物相容性，并賦予其靶向性，為減少化療藥物對正常細(xì)胞殺傷作用提供一種可能；同時(shí)又固載光敏劑卟啉，實(shí)現(xiàn)化學(xué)療法和光動(dòng)力療法的雙重殺滅腫瘤的目的。本專利技術(shù)提供的靶向抗腫瘤藥物系統(tǒng)中的核酸適體能夠特異性識別有些腫瘤細(xì)胞中過表達(dá)的膜蛋白核仁素，主動(dòng)靶向并轉(zhuǎn)運(yùn)到細(xì)胞中。同時(shí)核酸適體載體經(jīng)退火處理后形成具有空間構(gòu)型的G-四鏈體結(jié)構(gòu)的AS1411，能夠和TMPYP結(jié)合，另一部分經(jīng)退火后形成含有多個(gè)G-C結(jié)構(gòu)的雙鏈DNA，而道諾霉素對G-C結(jié)構(gòu)有很強(qiáng)的選擇性，利用這一特點(diǎn)來固載DNM(道諾霉素)。靶向抗腫瘤藥物系統(tǒng)運(yùn)用化學(xué)療法和光動(dòng)力療法聯(lián)合使用，達(dá)到雙重抑制腫瘤增殖的作用的目的。附圖說明圖1APS8固載DNM的熒光圖；圖2APS8固載TMPYP的熒光圖；圖3靶向抗腫瘤藥物系統(tǒng)APS8固載DNM固載TMPYP的穩(wěn)定性考察圖；圖中，1是退火后的APS8，2是APS8固載DNM固載TMPYP；圖4藥物與DNA的結(jié)合情況CD光譜圖；圖5aA549細(xì)胞的MTT實(shí)驗(yàn)結(jié)果圖；圖5bCT26細(xì)胞的MTT實(shí)驗(yàn)結(jié)果圖；圖6熒光顯微鏡拍照結(jié)果圖；圖a為避光組，圖中，1-明場、2-TMPYP活性氧熒光、3-DNM熒光、4-疊加圖；圖b為光照組，圖中，1-明場、2-TMPYP活性氧熒光、3-DNM熒光、4-疊加圖圖7激光共聚焦拍照結(jié)果；圖7中，1是空白圖，2是明場細(xì)胞，3是暗場DNM的熒光情況，4是明場和暗場的重疊圖圖8靶向抗腫瘤藥物系統(tǒng)APS8固載DNM固載TMPYP的合成流程圖；圖9靶向抗腫瘤藥物系統(tǒng)APS8固載DNM固載TMPYP的作用機(jī)理圖。圖中，cellviability細(xì)胞活力，normal正常，fluorescenceintensity熒光強(qiáng)度，wavelength波長具體實(shí)施方式簡寫詞下面結(jié)合實(shí)施例對本專利技術(shù)作進(jìn)一步的說明，但并不局限于此。DNM、TMPYP與APS8的固載比例實(shí)驗(yàn)：將單鏈DNA固體粉末(APS8)用無核酸酶水在超凈臺中溶成濃度為100μmol/l的溶液，取25μl，加入等體積的退火液，在PCR儀中設(shè)置程序90℃退火10min，然后緩慢降至室溫，形成一部分具有空間構(gòu)型的G-四連體結(jié)構(gòu)(AS1411，以下記做AP)而另一部分含有多個(gè)G-C結(jié)構(gòu)(S8)的雙鏈DNA的核酸適體載體(以下簡稱APS8)。退火液的制備過程如下：取200mM的KCl、4mM的MgCl2、28mM的Tris-HCl于容器中，加水溶解，定量至1L制得。DNM、TMPYP自身都有一定的熒光性，當(dāng)與DNA結(jié)合后，其熒光被淬滅。利用這種特性來測定APS8對DNM、TMPYP這兩種藥的固載情況。取10μl濃度為189.566μmol/l的DNM溶于2.5ml的超純水中，熒光分光光度計(jì)測其熒光，依次本文檔來自技高網(wǎng)...

【技術(shù)保護(hù)點(diǎn)】
一種靶向抗腫瘤藥物系統(tǒng)，其特征在于，包括核酸適體載體與固載在核酸適體載體上的抗腫瘤藥物；所述抗腫瘤藥物為蒽環(huán)類抗生素和卟啉；所述核酸適體載體為經(jīng)過退火處理的核酸適體。

【技術(shù)特征摘要】
1.一種靶向抗腫瘤藥物系統(tǒng)，其特征在于，包括核酸適體載體與固載在核酸適體載體上的抗腫瘤藥物；所述抗腫瘤藥物為蒽環(huán)類抗生素和卟啉；所述核酸適體載體為經(jīng)過退火處理的核酸適體。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的靶向抗腫瘤藥物系統(tǒng)，其特征在于，所述蒽環(huán)類抗生素為阿霉素、道諾霉素、伊達(dá)比星、米托蒽醌或表阿霉素。3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的靶向抗腫瘤藥物系統(tǒng)，其特征在于，所述卟啉為TMPYP、原卟啉、血卟啉或血卟啉單甲醚。4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的靶向抗腫瘤藥物系統(tǒng)，其特征在于，所述核酸適體為APS8。5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的靶向抗腫瘤藥物系統(tǒng)，其特征在于，所述核酸適體載體的一部分經(jīng)退火后形成具有空間構(gòu)型的G-四連體結(jié)構(gòu)的AS1411，另一部分是含有多個(gè)G-C結(jié)構(gòu)的雙鏈DNA。6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的靶向抗腫瘤藥物系統(tǒng)，其特征在于，所述AS1411的核苷酸序列如SEQIDNO:1所示；所述雙鏈DNA的核苷酸序列如SEQIDNO:2所示；所述核酸適體載體的核苷酸序列如SEQIDNO:3所示。7.一種靶...

【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：趙平，孫翔玉，付波，林慧超，柳敏超，
申請(專利權(quán))人：廣東藥科大學(xué)，
類型：發(fā)明
國別省市：廣東,44