本發明專利技術公開了針對于FAP多肽分子抗原表位的一種FAP納米抗體，同時還公布了編碼該FAP納米抗體的基因序列以及能夠表達該FAP納米抗體的表達載體和宿主細胞，并且公開了該FAP納米抗體的用途。通過本發明專利技術公開的FAP納米抗體、基因序列及宿主細胞等，可以在大腸桿菌內高效表達出FAP納米抗體，其與FAP免疫反應特異性好、親和力高，可應用于制備FAP檢測試劑或抗腫瘤藥物等。
A FAP nano antibody Nb26
The invention discloses a nano antibody in FAP for FAP peptide epitopes, also released gene sequence encoding the FAP nano antibodies and capable of expressing the FAP nano antibody expression vectors and host cells, and discloses the application of the FAP nano antibody. The inventive FAP nano antibody, gene sequences and host cells, can be highly expressed in Escherichia coli FAP nano antibody, and FAP immune response with high specificity and high affinity, which can be applied to the preparation of FAP reagent or antitumor drugs.
【技術實現步驟摘要】
一種FAP納米抗體Nb26
本專利技術屬于生物醫學或生物制藥
，更具體地說，涉及一種針對于FAP多肽分子抗原表位分子的納米抗體(Nb26)、其編碼序列及用途。
技術介紹
成纖維細胞激活蛋白(fibroblastactivationprotein，FAP)是腫瘤相關成纖維細胞特異性表達的一種表面抗原，具有二肽基肽酶和膠原酶活性，它基因組穩定，具有促進腫瘤細胞生長，侵襲及免疫抑制的作用。FAP由761個氨基酸組成，在不同哺乳動物細胞中的糖基化水平不同，單體相對分子質量有8.8×104、9.5×104、9.7×104等多種報道，二聚體相對分子質量為1.7×105。FAP的結構分為胞漿區、跨膜區和胞外區三部分，其中胞漿區是由開頭6個氨基酸組成的短肽鏈，跨膜區是由19個氨基酸組成，起到固定作用的疏水跨膜片段，然而FAP分子中氨基酸序列20～761的絕大部分都暴露在細胞外的微環境中，這一部分就是胞外區，是關鍵的酶催化區。FAP同時具有二肽基肽酶活性和膠原酶活性，能夠降解基質中的二肽和Ⅰ型膠原。FAP與屬于二肽基肽酶家族的DPPIV(dipeptidylpeptidaseIV/CD26)具有50％的同源性，均具有肽鏈外切酶活性，常形成復合物。因此，推測FAP可通過調節腫瘤基質中某些肽類生長因子，修飾活性肽并改變其功能，從而促進腫瘤的發生發展。在惡性腫瘤中，FAP陽性的成纖維細胞僅占腫瘤細胞總數的2％，但當其被去除后，癌細胞及基質細胞都會發生迅速的壞死。由此可以看出，FAP對惡性腫瘤的發生和發展具有非常重要的作用，而在腫瘤治療方面則具有廣闊的應用前景。靶向腫瘤微環境，尤其是靶向FAP的治療策略在腫瘤治療中扮演著非常重要的角色。在腫瘤發生、發展過程中，腫瘤細胞不僅被動地逃避免疫系統的攻擊，同時也主動地抑制其生長環境中的免疫細胞的正常功能，它與其所處的微環境相互作用，形成抑制性腫瘤微環境并促進腫瘤的惡性進展，這些因素的存在為探討腫瘤發生機制及開辟新的腫瘤免疫治療方案提供了思路。目前已經發展了幾種FAP特異性單克隆抗體，并開始在臨床診斷和治療中得到應用，其對腫瘤組織的親和力得到了提高。但是這種傳統方法存在抗體穩定性差、靈敏度低、生產成本高等缺點。納米抗體技術，是生物醫學科學家在傳統抗體的基礎上，運用分子生物學技術結合納米粒子科學的概念進行的抗體工程革命，從而研發出的最新和最小的抗體分子，最初由比利時科學家萊曼德.哈馬斯在駱駝血液中發現。普通的抗體蛋白由兩條重鏈和兩條輕鏈組成，而從駱駝血液中發現的新型抗體只有兩條重鏈，沒有輕鏈，這些“重鏈抗體”能像正常抗體一樣與抗原等靶標緊緊結合，但不像單鏈抗體那樣相互黏連聚集成塊。以該“重鏈抗體”為基礎的納米抗體不僅分子量只是普通抗體的1/10，而且化學性質也更加靈活，穩定性好，可溶性高，表達容易且容易獲得，并容易偶聯其他分子。但是，現有技術中并沒有針對FAP研發出適用的納米抗體。
技術實現思路
本專利技術要解決的技術問題在于，針對現有技術中缺乏針對FAP表位的納米抗體的缺陷，提供一種FAP納米抗體，同時提供編碼該FAP納米抗體的DNA分子以及該納米抗體的用途等。本專利技術解決其技術問題所采用的技術方案是：本專利技術的第一方面，提供了一種FAP納米抗體，該FAP納米抗體為針對FAP表位的納米抗體，包括兩條如SEQIDNO：9所示氨基酸序列的VHH鏈。本專利技術中該FAP納米抗體可以簡稱為Nb26。本專利技術第二方面，提供了一種針對FAP納米抗體的VHH鏈，包括框架區FR和互補決定區CDR，所述框架區FR包括下組的FR的氨基酸序列：SEQIDNO：1所示的FR1，SEQIDNO：2所示的FR2，SEQIDNO：3所示的FR3，SEQIDNO：4所示的FR4；所述互補決定區CDR包括下組的CDR的氨基酸序列：SEQIDNO：5所示的CDR1，SEQIDNO：6所示的CDR2，SEQIDNO：7所示的CDR3。框架區結構相對保守，主要起著維持蛋白質結構的作用；互補決定區結構相對多樣化，主要負責抗體的識別。優選地，所述針對FAP納米抗體的VHH鏈，它具有SEQIDNO：9所示的氨基酸序列。本專利技術第三方面，提供了一種DNA分子，它用于編碼選自下組的蛋白質：本專利技術所述的FAP納米抗體Nb26，或者本專利技術所述的針對FAP納米抗體的VHH鏈。優選地，所述的DNA分子，它具有SEQIDNO：8所示的核苷酸序列。本專利技術提供的FAP納米抗體可通過噬菌體擴增或基因工程重組表達的方式進行大量制備。噬菌體擴增是指將展示有FAP納米抗體Nb26的噬菌體，通過生物擴增的方式，大量繁殖生產展示有FAP納米抗體Nb26的噬菌體粒子。基因工程重組表達的方式是指將編碼FAP納米抗體Nb26的基因，通過克隆至表達載體，以蛋白表達的形式進行納米抗體的大量制備。本專利技術的第四方面，提供了一種表達載體，它含SEQIDNO：8所示的核苷酸序列。本專利技術的第五方面，提供了一種宿主細胞，它可以表達本專利技術的FAP納米抗體Nb26。本專利技術的第六方面，提供了本專利技術所述的FAP納米抗體Nb26在制備FAP檢測試劑方面的用途。本專利技術的FAP納米抗體Nb26可以替代傳統的FAP抗體，制備FAP檢測試劑，用于檢測FAP多肽分子。本專利技術還提供了FAP納米抗體Nb26在制備抗腫瘤藥物方面的用途。本專利技術也相應提供了一種FAP檢測試劑或抗腫瘤藥物，包括如前所述的FAP納米抗體Nb26。本專利技術的第七方面，提供了本專利技術所述的FAP納米抗體Nb26在非治療目的免疫學檢測中的用途。該免疫學檢測的類型包括酶聯免疫吸附檢測、膠體金免疫層析、免疫斑點雜交等基于抗原抗體特異性反應的免疫學分析檢測類型。本專利技術FAP納米抗體Nb26在應用時，可以通過噬菌體擴增獲得的展示有FAP納米抗體Nb26的噬菌體粒子直接用于分析檢測以及將FAP納米抗體Nb26經過原核生物或真核生物表達后以蛋白的形式進行免疫學檢測分析。本專利技術的第八方面，提供了本專利技術所述的FAP納米抗體Nb26在制備結合吸附FAP試劑中的應用。例如，可以將本專利技術FAP納米抗體制成免疫親和柱，吸附抓取FAP，在富集后供進一步的研究等。實施本專利技術，具有以下有益效果：本專利技術首先合成FAP多肽，并使其具有免疫原性，然后將FAP分子偶聯在酶標板上，展示該蛋白的正確空間結構，以此形式的抗原利用噬菌體展示技術篩選免疫納米抗體基因庫(駱駝重鏈抗體噬菌體展示基因庫)，從而獲得了FAP特異性的納米抗體基因，將此基因轉至大腸桿菌中，從而建立了能在大腸桿菌中高效表達的納米抗體株；本專利技術方法篩選得到的FAP納米抗體具有與FAP免疫反應特性，且特異性好、親和力高，可應用于制備FAP檢測試劑或抗腫瘤藥物等。附圖說明下面將結合附圖及實施例對本專利技術作進一步說明，附圖中：圖1為FAP納米抗體的氨基酸編號和結構示意圖；圖2是FAP納米抗體的DNA電泳圖；圖3是FAP納米抗體經鎳柱樹脂凝膠親和層析純化后的SDS-PAGE的電泳圖。具體實施方式為了使本專利技術的目的、技術方案及優點更加清楚明白，以下結合附圖及實施例，對本專利技術進行進一步詳細說明。本專利技術利用噬菌體展示技術，從駝源免疫的單域重鏈抗體庫中篩選能與靶分子FAP抗原特異性結合的單域重鏈抗體(VHH)噬菌體克隆，而獲得本文檔來自技高網...
【技術保護點】
一種FAP納米抗體，其特征在于，所述FAP納米抗體為針對FAP表位的納米抗體，包括兩條如SEQ?ID?NO：9所示氨基酸序列的VHH鏈。
【技術特征摘要】
1.一種FAP納米抗體，其特征在于，所述FAP納米抗體為針對FAP表位的納米抗體，包括兩條如SEQIDNO：9所示氨基酸序列的VHH鏈。2.一種針對FAP納米抗體的VHH鏈，包括框架區FR和互補決定區CDR，其特征在于，所述框架區FR包括下組的FR的氨基酸序列：SEQIDNO：1所示的FR1，SEQIDNO：2所示的FR2，SEQIDNO：3所示的FR3，SEQIDNO：4所示的FR4；所述互補決定區CDR包括下組的CDR的氨基酸序列：SEQIDNO：5所示的CDR1，SEQIDNO：6所示的CDR2，SEQIDNO：7所示的CDR3。3.根據權利要求2所述的針對FAP納米抗體的VHH鏈，其特征在于，它具有SEQIDNO：9...
【專利技術屬性】
技術研發人員：盧小玲，趙永祥，
申請(專利權)人：廣西醫科大學，
類型：發明
國別省市：廣西,45
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