PRIMA1基因在制備椎間盤退行性疾病診斷試劑中的應用制造技術

本發明專利技術公開了PRIMA1基因或其表達產物在制備椎間盤退行性疾病診斷試劑中的應用。本發明專利技術還公開了一種檢測椎間盤退行性疾病的試劑盒，所述試劑盒包括特異性擴增PRIMA1基因的引物組以及特異性捕獲PRIMA1基因的熒光探針。本發明專利技術還公開了一種治療椎間盤退行性疾病的藥物組合物，所述藥物組合物包含PRIMA1基因或其表達產物的激活劑。本發明專利技術發現了一種椎間盤退行性疾病的診斷分子標記物PRIMA1基因，并證實PRIMA1表達水平在椎間盤退行性疾病組織中表達下調。利用PRIMA1檢測椎間盤退行性疾病不僅能夠快速有效的做到早期診斷，其精確度大大提高，而且為基因治療、藥物治療等臨床應用提供了治療靶點和重要依據。

Application of PRIMA1 gene in the preparation of diagnostic reagent for intervertebral disc degenerative diseases

The invention discloses the application of PRIMA1 gene or its expression product in the preparation of a diagnostic reagent for intervertebral disc degenerative diseases. The invention also discloses a kit for detecting degenerative diseases of the intervertebral disc, wherein the kit comprises a primer set for specifically amplifying PRIMA1 genes and a fluorescent probe for specifically capturing the PRIMA1 gene. The invention also discloses a medicine composition for treating degenerative diseases of the intervertebral disc, comprising a PRIMA1 gene or an activator of its expression product. The invention identifies a molecular marker PRIMA1 gene for the diagnosis of degenerative disc disease, and confirms that the expression level of PRIMA1 is down regulated in the tissue of the degenerative disc disease. Using PRIMA1 for detection of degenerative disc disease can not only effectively achieve the early diagnosis, the accuracy is greatly improved, but also provides a therapeutic target and an important basis for the clinical application of gene therapy, etc..

【技術實現步驟摘要】
PRIMA1基因在制備椎間盤退行性疾病診斷試劑中的應用
本專利技術涉及生物醫藥領域，具體涉及PRIMA1基因在制備椎間盤退行性疾病診斷試劑中的應用。
技術介紹
椎間盤退行性疾病是指椎間盤組織在多種原因綜合作用下發生細胞介導的生物化學變化，引起老化加速、椎間盤力學特性改變，使臨近骨關節、韌帶發生相應變化，造成脊柱不穩，壓迫脊髓、神經根、動脈，引起相應臨床癥狀和體征的綜合征。它包括椎間盤源性腰痛、椎間盤突出癥、退行性脊椎不穩癥、退行性椎管狹窄癥、退行性滑脫癥等，是臨床上常見疾病之一。其病因尚不清楚，目前普遍認為椎間盤退行性疾病的發生是遺傳和環境因素共同作用的結果。隨著基因檢測技術的發展，近年來，人們逐漸意識到遺傳易感性即遺傳因素對于揭示椎間盤退行性疾病發病的重要作用。目前椎間盤退行性疾病一般采取保守治療，即從保守治療依次到微創、常規手術治療、非融合固定治療、融合固定治療的階梯。越是高級階梯的治療，創傷越大，對機體自然解剖狀態的干預越大，每一高級階梯的治療可作為對相對低級階梯治療的補救措施。對患者采取的治療方案要根據患者病情所處的階段，同時也要考慮到患者個體因素，如創傷、風險、費用以及患者的意愿。但是無論哪種手術方式，均不能在椎間盤退變的早期進行有效地干預，不能延緩或逆轉疾病的發展。開放手術(椎間盤切除融合內固定術)雖能較為徹底的切除退變椎間盤，但手術創傷大，費用高，內固定限制了脊柱的活動度，加速鄰近節段椎間盤的退變。微創手術不能徹底切除退變椎間盤組織，術后癥狀可能不能完全緩解，術后復發的可能性較大。
技術實現思路
本專利技術的目的之一在于提供PRIMA1基因或其表達產物在制備椎間盤退行性疾病診斷試劑中的應用。本專利技術的目的之二在于提供一種檢測椎間盤退行性疾病的試劑盒。本專利技術的目的之三在于提供一種治療椎間盤退行性疾病的藥物。為實現上述目的，本專利技術首先提供PRIMA1基因或其表達產物在用于制備椎間盤退行性疾病診斷試劑中的應用。優選地，所述PRIMA1基因或其表達產物在椎間盤退行性疾病組織中表達下調。優選地，所述診斷試劑包括基因水平的診斷試劑和蛋白水平的診斷試劑，所述基因水平的診斷試劑包括通過實時熒光定量PCR方法或基因芯片方法檢測基因表達水平；所述蛋白水平的診斷試劑包括通過免疫學方法檢測PRIMA1基因表達產物的表達水平。優選地，所述實時熒光定量PCR方法包括SYBRGreen法和TaqMan探針法。優選地，所述基因芯片包括固相載體以及固定在所述固相載體上的寡核苷酸探針，所述寡核苷酸探針包括特異性捕獲PRIMA1基因的部分或全部核苷酸序列。優選地，所述免疫學方法為ELISA檢測方法。優選地，所述ELISA法為使用ELISA檢測試劑盒，所述試劑盒包括：包被PRIMA1基因單克隆抗體的固相載體，酶標抗體，酶的底物，產物標準品，陰性對照品，稀釋液，洗滌液，酶反應終止液等。所述抗體可采用市售的PRIMA1基因單克隆抗體，也可以通過本領域技術人員公知的方法來獲得。進一步地，本專利技術提供一種椎間盤退行性疾病診斷試劑盒，所述試劑盒包括特異性擴增PRIMA1基因的引物組以及特異性捕獲PRIMA1基因的熒光探針。優選地，所述引物組包括如SEQIDNO:2所示核苷酸序列的上游引物和如SEQIDNO:3所示核苷酸序列的下游引物，所述熒光探針為如SEQIDNO:4所示核苷酸序列。優選地，所述試劑盒還包括PCR緩沖液、dNTP、Taq酶。優選地，所述試劑盒含有陽性對照和陰性對照。優選地，所述陽性對照為正常的椎間盤髓核組織RNA或DNA，所述陰性對照為ddH2O。進一步地，本專利技術還提供了一種椎間盤退行性疾病的治療方法，所述方法包括促進PRIMA1基因的表達，或促進PRIMA1基因產物的表達，或增強PRIMA1基因產物的活性。進一步地，本專利技術提供一種治療椎間盤退行性疾病的藥物組合物，所述藥物組合物包含PRIMA1基因或其表達產物的激活劑。優選地，所述藥物組合物還包括藥學上可接受的載體，這類載體包括(但并不限于)：稀釋劑、緩沖劑、混懸劑、乳劑、顆粒劑、包囊劑、賦形劑、填充劑、粘合劑、噴霧劑、透皮吸收劑、濕潤劑、崩解劑、吸收促進劑、表面活性劑、著色劑、矯味劑或吸附載體。本專利技術的藥物組合物可根據需要制備成各種劑型，包括但不限于，片劑、溶液劑、顆粒劑、貼劑、膏劑、膠囊劑、氣霧劑或栓劑。本專利技術的藥物組合物的施用途徑不受限制，只要它能發揮期望的治療效果或預防效果即可，包括但不限于口服、靜脈注射、肌肉注射、皮下注射、舌下含化、直腸灌注、鼻腔噴霧、口腔噴霧、皮膚局部或全身經皮用藥。本專利技術的藥物組合物還可與其他治療椎間盤退行性病變的藥物聯用，多種藥物聯合使用可以大大提到治療的成功率。優選地，所述激活劑能促進PRIMA1基因的表達或增強其活性。優選地，所述激活劑通過構建過表達載體的方法促進PRIMA1基因或其產物的表達。優選地，所述激活劑為PcDNA3.1-PRIMA1。本專利技術的激活劑一方面可以用于補充內源性的PRIMA1基因產物的缺失或不足，通過提高內源性產物的表達，從而治療因內源性產物缺乏導致的椎間盤退行性疾病。另一方面可以用于增強內源性產物的活性，從而治療椎間盤退行性疾病。優選地，所述載體是本領域已知的各種載體，如市售的載體、包括質粒、粘粒、噬菌體、病毒等。進一步地，本專利技術提供的藥物組合物在促進椎間盤退行性疾病細胞增殖中的應用。本專利技術PRIMA1基因的編碼序列如SEQIDNO.1所示的核苷酸序列。本專利技術使用體外培養的髓核細胞研究PRIMA1基因對椎間盤退行性病變的治療作用。本領域技術人員可知，椎間盤退行性病變發生的一個重要的生理特征在于髓核細胞的增殖減緩、衰老加快、凋亡加劇，因此本專利技術利用髓核細胞生長指標變化來研究PRIMA1基因與椎間盤退行性病變治療的關系。本專利技術的有益效果如下：本專利技術發現了一種椎間盤退行性疾病診斷分子標記物PRIMA1基因，并進一步證實PRIMA1基因表達水平在椎間盤退行性疾病組織中表達下調。利用PRIMA1基因檢測椎間盤退行性疾病不僅能夠快速有效的做到疾病早期診斷，其精確度大大提高，而且為基因治療、藥物治療等臨床應用提供了治療靶點和重要依據。附圖說明圖1實時熒光定量PCR檢測PRIMA1基因在椎間盤退行性疾病髓核組織中的表達情況；圖2實時熒光定量PCR檢測PRIMA1基因在椎間盤退行性疾病髓核細胞中的表達情況；圖3PRIMA1基因的過表達對髓核細胞增殖能力的影響。具體實施方式以下實施例用于說明本專利技術，但不用來限制本專利技術的范圍。若未特別指明，實施例中所用的技術手段為本領域技術人員所熟知的常規手段。實施例中未注明具體條件的實驗方法，通常為本領域常規方法，如按照常規條件如Sambrook等人，分子克隆，實驗手冊(第三版)(科學出版社，2002)中的所述條件，或按照試劑制造廠家所建議的條件。本專利技術的專利技術人對10例椎間盤退行性疾病患者的髓核組織樣本及4例對照樣本進行高通量測序，結果發現，椎間盤退行性疾病患者的髓核組織中PRIMA1基因的水平與對照相比顯著下調。進一步地，專利技術人采用TaqMan實時熒光定量PCR方法驗證了PRIMA1基因在椎間盤退行性疾病患者髓核組織中表達下調，其相關制劑可用于椎間盤退行性疾病。PRIMA1(prolineric本文檔來自技高網...

【技術保護點】
PRIMA1基因或其表達產物在制備椎間盤退行性疾病診斷試劑中的應用。

【技術特征摘要】
1.PRIMA1基因或其表達產物在制備椎間盤退行性疾病診斷試劑中的應用。2.如權利要求1所述的應用，其特征在于，所述PRIMA1基因或其表達產物在椎間盤退行性疾病組織中表達下調。3.如權利要求1或2所述的應用，其特征在于，所述診斷試劑包括基因水平的診斷試劑和蛋白水平的診斷試劑，所述基因水平的診斷試劑包括通過實時熒光定量PCR方法或基因芯片方法檢測基因表達水平；所述蛋白水平的診斷試劑包括通過免疫學方法檢測PRIMA1基因表達產物的表達水平。4.一種檢測椎間盤退行性疾病的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒包括特異性擴增PRIMA1基因的引物組以及特異性捕獲PRIMA1基因的熒光探針。5.如權利要求4所述試劑盒，其特征在于，所述的引物組包括...

【專利技術屬性】
技術研發人員：康艷娜，
申請(專利權)人：北京昊源生物醫學科技有限公司，
類型：發明
國別省市：北京,11