一種穩定、抗干擾能力強的心肌肌鈣蛋白I試劑及檢測方法技術

本發明專利技術涉及心肌肌鈣蛋白I檢測技術領域，特別涉及一種心肌肌鈣蛋白I檢測試劑，試劑R1中含有50?mmol/L?pH?7.6?Tris-HCl緩沖液，25?ml/L?TritonX-100，7.7?mmol/L?疊氮鈉；試劑R1中含有50?mmol/L?pH?7.6?Tris-HCl緩沖液，30ml/L?羊抗人TnI抗體包被膠乳顆粒，15?mmol/L?聚乙二醇，7.7?mmol/L疊氮鈉。采用Tris-HCl緩沖液，添加膠乳顆粒和聚乙二醇，顯著改善了試劑的抗干擾能力和穩定性，是一種更加穩定、抗干擾能力強的心肌肌鈣蛋白I?(cTnI)?試劑。

【技術實現步驟摘要】
一種穩定、抗干擾能力強的心肌肌鈣蛋白I試劑及檢測方法
本專利技術涉及心肌肌鈣蛋白I檢測
，特別涉及一種心肌肌鈣蛋白I檢測試劑，還涉及使用此檢測試劑的檢測方法。
技術介紹
心肌肌鈣蛋白I是心肌肌鈣蛋白復合體的亞單位之一，存在于心肌和骨骼肌細胞中，按照來源和存在的組織類型不同又分為心肌亞型(CardiactroponinI,cTnI)和骨骼肌亞型(SkeletaltroponinI,sTnI)，兩者由不同基因編碼。sTnI的分子量為24000，cTnI的分子量為29000，其氨基末端較sTnI多31個氨基酸殘基。此外，cTnI與sTnI的氨基酸序列有40%差異，在損傷后再生的骨骼肌中，cTnI不表達，使其成為心肌特異性蛋白。當心肌細胞損傷后，cTnI先于肌酸肌酶及其同功酶等其它生化指標快速入血，形成較長的時間窗，便于臨床診斷和愈后觀察。研究表明，在急性心肌梗死4h后，cTnI即出現于血液中，持續時間超過96h。由于其獨有的心肌特異性，即使在伴隨骨骼肌損傷的情況下(外傷、挫傷及心臟手術等)也能協助準確診斷急性心肌梗死。因此，近年來許多專家建議用cTnI代替傳統生化指標作為心肌細胞損傷的特異性標志物。鑒于此，本專利技術在抗原-抗體特異性結合法的基礎上，優化反應體系，采用Tris-HCl緩沖液，添加膠乳顆粒和聚乙二醇，顯著改善了試劑的抗干擾能力和穩定性。是一種更加穩定、抗干擾能力強的心肌肌鈣蛋白I(cTnI)試劑。
技術實現思路
本專利技術的目的是提供一種用于檢測心肌肌鈣蛋白I(cTnI)的試劑及使用該試劑檢測心肌肌鈣蛋白I(cTnI)含量的方法。該試劑盒采用抗原-抗體特異性結合法，可以有效檢測心肌肌鈣蛋白I的含量，抗干擾能力強，穩定性好等優點。基本原理：本方法是一種膠乳增強免疫比濁法。將特異性抗體結合于膠乳顆粒表面，樣本與膠乳顆粒在Tris-HCl緩沖液中混合，樣本中的cTnI與膠乳顆粒表面的抗體結合，使相鄰的膠乳顆粒彼此交聯，在505nm波長下檢測溶液濁度變化，變化程度與樣本中的cTnI含量成正比。本專利技術是通過以下步驟得到的：一種心肌肌鈣蛋白I檢測試劑，包括試劑R1和試劑R2，所述試劑R1和試劑R2的組成如下：1)試劑R1的組分為：Tris-HCl緩沖液pH7.6········································50mmol/L；TritonX-100··················································25ml/L；疊氮鈉·······················································7.7mmol/L；2)試劑R2的組分為：Tris-HCl緩沖液pH7.6········································50mmol/L；羊抗人TnI抗體包被膠乳顆粒····································30ml/L；聚乙二醇·····················································15mmol/L；疊氮鈉·······················································7.7mmol/L。所述的心肌肌鈣蛋白I檢測試劑來檢測心肌肌鈣蛋白I的檢測方法，使用全自動生化分析儀日立7180，利用終點法進行測定，檢測主波長為505nm。所述的檢測方法，R1試劑和R2試劑的比例為3:1。本專利技術的有益效果：1）采用Tris-HCl緩沖體系，顯著改善了試劑的穩定性；2）采用膠乳顆粒和聚乙二醇，不僅顯著改善測定的性能，而且增強了試劑的穩定性和抗干擾能力；3）試劑的準確度和穩定性良好，價格便宜，使用方便，完全可以滿足臨床需要。附圖說明圖1為兩種試劑的相關性曲線圖，圖2為兩種試劑效期穩定性曲線圖。具體實施方式下面結合具體實施例對本專利技術進行進一步說明：實施例1心肌肌鈣蛋白I的檢測試劑，包括試劑R1和試劑R2：1)試劑R1的組分為：Tris-HCl緩沖液pH7.6·········································50mmol/L；TritonX-100···················································25ml/L；疊氮鈉························································7.7mmol/L；2)試劑R2的組分為：Tris-HCl緩沖液pH7.6·········································50mmol/L；羊抗人TnI抗體包被膠乳顆粒·····································30ml/L；聚乙二醇······················································15mmol/L；疊氮鈉························································7.7mmol/L；3）本實施例試劑的使用方法：本實施例描述的心肌肌鈣蛋白I檢測試劑，在使用時采用具有雙試劑功能的全自動生化分析儀，如日立7180全自動分析儀等，利用終點法進行測定。將R1和R2按照3:1的比例放置到對應的試劑位上，在樣品盤的對應位置放置好蒸餾水、標準品和樣本，操作如表1：表1實施例1試劑檢測方法計算：心肌肌鈣蛋白I（μg/L）＝（?A測定÷?A標準）×C標準。實施例2干擾性試驗：取新鮮混合血清，分成2等份，然后將每等份再分成5等份，加入不同的干擾物質，使其在血清中的濃度達到表2的要求。然后分別用實施例1所得試劑，與市場常見并認可的心肌肌鈣蛋白I(cTnI)試劑同時對比測定血清中心肌肌鈣蛋白I的含量，對照組測定結果與加入不同干擾物質后各組的測定結果見表2。相對偏差(%)=(干擾樣本的測定均值－對照樣本的測定均值)/對照樣本的測定均值×100%。由表2可以看出，實施例1試劑在抗壞血酸≤23.4μmol/L、膽紅素≤548μmol/L、白蛋白≤70g/L、總膽固醇≤15.3mmol/L對測試結果沒有明顯干擾。而對照組試劑在上述濃度干擾物質存在時，受到明顯干擾，這說明實施例1試劑的抗干擾性能遠遠優于對比試劑。表2實施例試劑抗干擾性能比較實施例3相關性實驗：利用實施例1配方配制試劑，與市場常見的國家食品藥品監督管理局認可的某公司的心肌肌鈣蛋白I試劑盒進行對照檢測，同時檢測了20個臨床血清樣本，檢測結果如表3所示。并獲得了兩種試劑的相關性曲線（如圖1所示），通過檢測結果顯示，兩個試劑盒的相關系數為0.998，說明了兩者有極大的相關性。表3實施例1試劑與市場常見并得到認可的心肌肌鈣蛋白I測定試劑盒對比檢測結果實施例4試劑的穩定性對比試驗：對實施例1中的試劑，均勻分裝13組，每組的試劑量為R1為18mL，R2為6mL；并且取13組市場常見的國家食品藥品監督管理局認可的某公司的心肌肌鈣蛋白I(cTnI)試劑盒作對照。放置到2-8℃本文檔來自技高網...

【技術保護點】
一種心肌肌鈣蛋白I?(cTnI)?檢測試劑，其特征在于包括試劑R1和試劑R2，所述試劑R1和試劑R2的組成如下：1)?試劑R1的組分為：Tris?HCl緩沖液?pH?7.6

【技術特征摘要】
1.一種心肌肌鈣蛋白I(cTnI)檢測試劑，其特征在于包括試劑R1和試劑R2，所述試劑R1和試劑R2的組成如下：1)試劑R1的組分為：Tris-HCl緩沖液pH7.6········································50mmol/L；TritonX-100··················································25ml/L；疊氮鈉·······················································7.7mmol/L；2)試劑R2的組分為：Tris-HCl緩沖液pH7.6········································50mmol/L；羊抗人TnI抗體包被膠乳顆粒····································30ml/L；聚乙二醇··········...

【專利技術屬性】
技術研發人員：王進，李艷梅，胡曉飛，甘宜梧，
申請(專利權)人：山東博科生物產業有限公司，
類型：發明
國別省市：山東,37