一種心肌梗塞快速定量檢測(cè)試紙條制造技術(shù)

本實(shí)用新型專利技術(shù)公開(kāi)了一種心肌梗塞快速定量檢測(cè)試紙條，包括底板、樣品墊、熒光標(biāo)記物結(jié)合墊、硝酸纖維素膜和吸水墊；所述試紙條由樣品墊、熒光標(biāo)記物結(jié)合墊、硝酸纖維素膜、吸水墊依次搭接粘貼在底板上構(gòu)成。所述熒光標(biāo)記物結(jié)合墊含有鏈霉親和素標(biāo)記熒光蛋白和生物素標(biāo)記的心肌肌鈣蛋白I單克隆抗體、生物素標(biāo)記的心臟型脂肪酸結(jié)合蛋白單克隆抗體、生物素標(biāo)記的肌酸激酶同工酶單克隆抗體；所述硝酸纖維素膜上有檢測(cè)線和質(zhì)控線。本實(shí)用新型專利技術(shù)不僅大大縮短了檢測(cè)時(shí)間，提高了檢測(cè)靈敏度，同時(shí)聯(lián)合檢測(cè)還大大提高了便利性。

【技術(shù)實(shí)現(xiàn)步驟摘要】

本技術(shù)屬于免疫檢測(cè)領(lǐng)域，具體涉及一種高靈敏度心肌梗塞快速定量檢測(cè)試紙條。
技術(shù)介紹
心肌肌I丐蛋白I (Cardiac troponin I，cTnl)是分子量22.5kD的心肌蛋白，和肌鈣蛋白T(TnT)，肌鈣蛋白C(TnC) —起，形成肌鈣蛋白復(fù)合體，從而對(duì)細(xì)胞內(nèi)鈣離子信號(hào)的傳遞和肌動(dòng)-肌球蛋白的相互作用起著極其主要的作用。急性心肌梗塞(AMI)發(fā)作后肌鈣蛋白復(fù)合體分解，cTnl快速地釋放入血液循環(huán)。盡管骨髂肌中也有肌鈣蛋白I，但其氨基酸組成和cTnl不同，造成二者的免疫活性不同，進(jìn)而保證了 cTnl測(cè)試的準(zhǔn)確性。AMI癥狀發(fā)作后4-6小時(shí)cTnl才達(dá)到正常值上限，12-24小時(shí)后達(dá)到最高濃度，有時(shí)能維持6_10天。正常血清cTnl低于0.06ng/ml，有些AMI患者cTnl可高達(dá)1，300ng/mlo與CK-MB相比，cTnl對(duì)心肌損傷的診斷敏感性更高，特導(dǎo)性更強(qiáng)，持續(xù)時(shí)間更長(zhǎng)。因此cTnl測(cè)定對(duì)再發(fā)AMI的診斷尤其有幫助，還可診斷微小心梗，故對(duì)不穩(wěn)定性心絞痛(UA)和非ST抬高的AMI的鑒別有極大幫助。脂肪酸結(jié)合蛋白(Fatty Acid Binding Protein，F(xiàn)ABP)是多種功能的小分子蛋白家族，主要存在于大量耗能的細(xì)胞胞質(zhì)，在細(xì)胞內(nèi)脂肪代謝中起轉(zhuǎn)運(yùn)游離脂肪酸的作用。最先于心肌中發(fā)現(xiàn)的FABP又稱為心臟型脂肪酸結(jié)合蛋白(Heart-type Fatty Acid-BindingProtein, H-FABP)，是一種低分子量的心肌細(xì)胞漿非酶類蛋白，分子量為14500D，由132個(gè)氨基酸殘基組成，其分子結(jié)構(gòu)與免疫學(xué)特性不同于其他類型的FABP，具有心肌特異性。國(guó)內(nèi)外大量研究發(fā)現(xiàn)，在AMI早期，由于心肌細(xì)胞對(duì)缺血、缺氧的高度敏感性，動(dòng)員脂肪酸供能，導(dǎo)致心肌細(xì)胞內(nèi)Η-FABP迅速升高，而Η-FABP相對(duì)分子質(zhì)量小，可快速釋放入血，在AMI早期即可檢測(cè)到高水平的血漿Η-FABP。血中Η-FABP濃度升高的多少可反映心肌受損的程度，因此，Η-FABP是一種可以幫助測(cè)定心肌受損癥狀開(kāi)始的指標(biāo)。AMI發(fā)病后，Η-FABP在l_3h開(kāi)始升高，6-8h達(dá)到峰值，24-30h恢復(fù)正常。多項(xiàng)研究表明，在AMI發(fā)生后早期(< 6h)檢測(cè)Η-FABP有較高的臨床應(yīng)用價(jià)值。由于其快速的清除率，對(duì)于發(fā)生在24h后的AMI診斷意義不大肌酸激酶(Creatinekinase，CK)舊稱為肌酸磷酸激酶(Creatinephosphokinase，CPK)。CK分子量為81000，由兩個(gè)亞基組成。通常存在于動(dòng)物的心臟、肌肉以及腦等組織的細(xì)胞漿和線粒體中，是一個(gè)與細(xì)胞內(nèi)能量運(yùn)轉(zhuǎn)、肌肉收縮、ATP再生有直接關(guān)系的重要激酶，它可逆地催化肌酸與ATP之間的轉(zhuǎn)磷酰基反應(yīng)。CK在ATP參與下催化肌酸磷酸化，生成ATP和磷酸肌酸。肌酸激酶有四種同功酶形式:肌肉型(CK-MM)、腦型(CK-BB)、雜化型(CK-MB)和線粒體型(CK-MiMi)。CK-MM型主要存在于各種肌肉細(xì)胞中，CK-BB型主要存在于腦細(xì)胞中，CK-MB型主要存在于心肌細(xì)胞中，CK-MiMi型主要存在于心肌和骨骼肌線粒體中。CK-MB在傳統(tǒng)心肌酶學(xué)中曾作為診斷AMI的金標(biāo)準(zhǔn)，然而25% -50%的AMI患者在發(fā)病4小時(shí)內(nèi)處于正常水平，造成約10%的患者被漏診。CK-MB的心肌特異性較高，胸痛發(fā)生后4-6小時(shí)開(kāi)始升高，但亦存在于骨骼肌中，骨骼肌損傷時(shí)增高。另正常人血中也存在，正常存在與病理性增加之間有交叉，敏感性不高，不能診斷微小心肌梗死。綜上所述，cTn1、H-FABP、CK-MB幾種心肌標(biāo)志物的臨床診斷價(jià)值各不相同，如果單一檢測(cè)某一項(xiàng)指標(biāo)對(duì)AMI的檢測(cè)是不夠的。研究認(rèn)為對(duì)cTn1、H-FABP、CK-MB這三種標(biāo)志物聯(lián)合檢測(cè)，進(jìn)行動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)，有助于防止漏診。在胸痛發(fā)作l_3h內(nèi)H-FABP的檢測(cè)優(yōu)于cTnl，但在4-6h這三種標(biāo)志物均具有較高的敏感性，因此對(duì)胸痛的患者進(jìn)行cTn1、H-FABP和CK-MB三項(xiàng)指標(biāo)的聯(lián)合檢測(cè)，提高了單一指標(biāo)診斷AMI的敏感性和特異性，對(duì)于AMI的早期發(fā)現(xiàn)有重要價(jià)值。三者有效結(jié)合，對(duì)AMI的早期診斷和排除提供了更確鑿的指標(biāo)支持，提高了診斷的窗口期，為胸痛發(fā)作或臨床可疑為AMI的病人作出正確和及時(shí)的診斷，進(jìn)而為臨床醫(yī)師及時(shí)搶救和診治病人提供了快捷有效的依據(jù)。目前國(guó)內(nèi)市場(chǎng)上暫無(wú)此類檢測(cè)產(chǎn)品。生物素-親和素系統(tǒng)(b1tinavidin system，BAS)，是一種新型生物反應(yīng)放大系統(tǒng)。隨著各種生物素衍生物的問(wèn)世，BAS很快被廣泛應(yīng)用于醫(yī)學(xué)各領(lǐng)域。將該系統(tǒng)應(yīng)用于免疫組化，酶聯(lián)免疫，熒光免疫，放射免疫等檢測(cè)技術(shù)中，可顯著地提高以上技術(shù)方法的敏感性、特異性和穩(wěn)定性，使方法更簡(jiǎn)便，有助于臨床快速診斷，并利于進(jìn)行大規(guī)模流行病學(xué)調(diào)查，成為研究免疫反應(yīng)的有力工具。由于BAS檢測(cè)系統(tǒng)經(jīng)濟(jì)快速，又無(wú)放射物質(zhì)污染，不需復(fù)雜儀器，充分顯示了此系統(tǒng)的巨大潛力和應(yīng)用的可能性。生物素-親和素系統(tǒng)檢測(cè)原理:BAS是在常規(guī)ELISA原理的基礎(chǔ)上，結(jié)合生物素與親和素間的高度放大作用，而建立的一種檢測(cè)系統(tǒng)。親和素是卵白蛋白中提取的一種堿性糖蛋白，分子量為68kDa，由4個(gè)亞單位組成，對(duì)生物素有非常高的親和力(結(jié)合常數(shù)高達(dá)115M1K生物素很易與蛋白質(zhì)(如抗體等)以共價(jià)鍵結(jié)合。這樣，結(jié)合了酶的親和素分子與結(jié)合有特異性抗體的生物素分子產(chǎn)生反應(yīng)，既起到了多級(jí)放大作用，又由于酶在遇到相應(yīng)底物時(shí)的催化作用而呈色，達(dá)到檢測(cè)未知抗原(或抗體)分子的目的。鏈霉親和素是與親和素有相似生物學(xué)特性的一種蛋白質(zhì)，鏈霉親和素與親和素一樣分子中每條肽鏈都能結(jié)合一個(gè)生物素，因幾乎所有用于標(biāo)記的物質(zhì)均可以同親和素或鏈霉親合素結(jié)合。利用生物素-親和素系統(tǒng)研制一種心肌梗塞快速定量檢測(cè)快速診斷試劑尚無(wú)報(bào)道。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路
本技術(shù)的目的，在于提供一種心肌梗塞快速定量檢測(cè)試紙條，其基于雙抗體夾心法、熒光免疫側(cè)向?qū)游龊蜕锼?鏈霉親和素放大系統(tǒng)，提供一種高靈敏度的心肌梗塞快速定量檢測(cè)。使用本技術(shù)時(shí)，提高了檢測(cè)靈敏度和檢測(cè)穩(wěn)定性，降低了非特異性結(jié)合，聯(lián)合檢測(cè)大幅度提尚檢測(cè)的準(zhǔn)確性和便利性，檢測(cè)時(shí)間不大于10分鐘，大大提尚了診斷效率。本技術(shù)解決其技術(shù)問(wèn)題的解決方案是:一種心肌梗塞快速定量檢測(cè)試紙條，其包括底板，所述底板上依次設(shè)有樣品墊、熒光標(biāo)記物結(jié)合墊、硝酸纖維素膜和吸水墊，所述吸水墊和熒光標(biāo)記物結(jié)合墊分別交疊壓在硝酸纖維素膜的兩端后在硝酸纖維素膜的表面形成檢測(cè)區(qū)，所述樣品墊交疊壓在熒光標(biāo)記物結(jié)合墊上，所述熒光標(biāo)記物結(jié)合墊上固定有生物素標(biāo)記的心肌肌鈣蛋白I單克隆抗體、生物素標(biāo)記的心臟型脂肪酸結(jié)合蛋白單克隆抗體、生物素標(biāo)記的肌酸激酶同工酶單克隆抗體和鏈霉親和素標(biāo)記的熒光蛋白；所述檢測(cè)區(qū)內(nèi)的硝酸纖維素膜上固定有識(shí)別心肌肌鈣蛋白I另外一個(gè)表位的單克隆抗體構(gòu)成的第一檢測(cè)線、識(shí)別心臟型脂肪酸結(jié)合蛋白另外一個(gè)表位的單克隆抗體構(gòu)成的第二檢測(cè)線、識(shí)別肌酸激酶同工酶另外一個(gè)表位的單克隆抗體構(gòu)成的第三檢測(cè)線和羊抗鼠IgG多克隆抗體構(gòu)成的質(zhì)控線。作為上述技術(shù)方案的進(jìn)一步改進(jìn)，所述熒光標(biāo)記物結(jié)合墊包括層疊的第一熒光標(biāo)記物結(jié)合墊和第二熒光標(biāo)記物結(jié)合墊，所述第一熒光標(biāo)記物結(jié)合墊的一端墊在樣品墊的本文檔來(lái)自技高網(wǎng)...

【技術(shù)保護(hù)點(diǎn)】
一種心肌梗塞快速定量檢測(cè)試紙條，其特征在于：其包括底板，所述底板上依次設(shè)有樣品墊、熒光標(biāo)記物結(jié)合墊、硝酸纖維素膜和吸水墊，所述吸水墊和熒光標(biāo)記物結(jié)合墊分別交疊壓在硝酸纖維素膜的兩端后在硝酸纖維素膜的表面形成檢測(cè)區(qū)，所述樣品墊交疊壓在熒光標(biāo)記物結(jié)合墊上，所述熒光標(biāo)記物結(jié)合墊上固定有生物素標(biāo)記的心肌肌鈣蛋白I單克隆抗體、生物素標(biāo)記的心臟型脂肪酸結(jié)合蛋白單克隆抗體、生物素標(biāo)記的肌酸激酶同工酶單克隆抗體和鏈霉親和素標(biāo)記的熒光蛋白；所述檢測(cè)區(qū)內(nèi)的硝酸纖維素膜上固定有識(shí)別心肌肌鈣蛋白I另外一個(gè)表位的單克隆抗體構(gòu)成的第一檢測(cè)線、識(shí)別心臟型脂肪酸結(jié)合蛋白另外一個(gè)表位的單克隆抗體構(gòu)成的第二檢測(cè)線、識(shí)別肌酸激酶同工酶另外一個(gè)表位的單克隆抗體構(gòu)成的第三檢測(cè)線和羊抗鼠IgG多克隆抗體構(gòu)成的質(zhì)控線。

【技術(shù)特征摘要】

【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：宋建勛，黃柳鏘，王小明，夏坤，佟順剛，
申請(qǐng)(專利權(quán))人：廣州天寶頌原生物科技開(kāi)發(fā)有限公司，
類型：新型
國(guó)別省市：廣東;44