一種免疫增強組合物、制備方法及其應用技術

本發明專利技術提供一種免疫增強組合物、制備方法及其應用，其特征在于：該組合物包含無免疫原性、可體內降解的膠原蛋白、多糖物質和活性因子的疏松顆粒。該免疫增強組合物用于疫苗接種中能強化抗原免疫反應，減少免疫反應中的炎癥、肉芽腫、膿腫等副作用。

Immune enhancing composition, preparation method and application thereof

The present invention provides a composition for enhancing immunity, preparation method and application thereof, which is characterized in that the composition contains loose particles without immunogenicity, degradation of collagen, polysaccharides and active factors. The immune enhancing composition can strengthen antigen immunity reaction in vaccine inoculation, and reduce the side effects of inflammation, granuloma and abscess in the immune reaction.

【技術實現步驟摘要】
一種免疫增強組合物、制備方法及其應用
本專利技術涉及醫用生物材料
，具體涉及一種免疫增強組合物，本身無免疫反應，但是可以與抗原配伍，增強人體免疫反應。
技術介紹
疫苗接種是目前最具有性價比的預防疾病的方法，疫苗經過滅活、裂解步驟后，已經不是一個活的抗原物質，不會造成感染。在疫苗使用過程中為了減少抗原的用量，相對地擴大疫苗產量，還需要添加適當的免疫增強劑進行配比。免疫增強劑是非特異性免疫增強劑，當與抗原一起注射或預先注入機體時，可增強機體對抗原的免疫應答或改變免疫應答類型，添加免疫增強劑的疫苗比無免疫增強劑疫苗更能幫助刺激機體產生免疫反應，從而降低疫苗接種時疫苗的使用量。因此在預防疾病的策略下，尋找安全有效的疫苗和免疫增強劑是疫苗開發中的兩個熱點課題。理想的免疫增強劑本身不具有免疫原性，但與抗原合并使用能增強抗原免疫性的物質，同時可以廣譜使用、生物可降解并安全可靠。目前越來越多的材料被發現具有免疫增強劑活性，常見的有鋁鹽佐劑、弗氏佐劑、多糖佐劑及脂質體、細胞因子納米材料等。這些材料雖能較好地強化免疫反應，但是存在不同的缺點，如形成肉芽腫、局部膿腫、持續時間短、易引起發熱炎癥等。目前被FDA批準用于人體免疫的免疫增強劑只有鋁鹽佐劑，而該免疫增強劑由于材料的高度異質性，生產過程也難以實現統一標準，皮下注射易引起嚴重反應(如出現紅斑、皮下結節、接觸性過敏和肉芽腫性炎癥)。因此，免疫增強劑還可以從新材料中尋找更安全、更有效的替代品。細胞外基質材料是一種潛在的生物型免疫增強劑材料，因為其本身在動物體內可以起到調控細胞微環境的作用，從而促進細胞相互作用、血管化及免疫反應。免疫原去除小腸粘膜下層(SIS)材料是在臨床上廣泛應用于腹壁、泌尿道、硬腦膜、血心管修復等軟組織缺損修復、加固的生物醫用材料。本身基質中除了I型膠原蛋白的主要成分，還含有糖胺聚糖、蛋白聚糖、纖維粘連蛋白、堿性纖維生長因子、血管內皮生長因子等生物因子，具有良好的生物相容性，可以促進缺損組織修復、血管化及功能重建。最為關鍵的是SIS材料與吞噬樹突狀細胞(DC)具有高度親和性，而后者為最有效的抗原提呈細胞(APC)。另外SIS材料植入體內所激發的免疫反應主要為Th2通路，實現材料與宿主組織的整合與重建，而抑制Th1通路介導的促炎癥反應。因此，SIS有望作為安全、可降解、高效的免疫增強劑，避免植入體內后引起炎癥反應。
技術實現思路
本專利技術針對現有技術的上述不足，提供一種免疫增強組合物，該免疫增強組合物用于疫苗接種中能強化抗原免疫反應，減少免疫反應中的炎癥、肉芽腫、膿腫等副作用。為了解決上述技術問題，本專利技術采用的技術方案為：一種免疫增強組合物，其特征在于：該組合物為由包含無免疫原性、可體內降解的膠原蛋白、多糖物質和活性因子的疏松顆粒狀構成的組合物。所述的膠原蛋白為包含I型、III型、IV型和VI型膠原蛋白的組合物。所述的多糖物質為包含硫酸軟骨素和透明質酸的組合物。所述的活性因子為包含纖維粘連蛋白、層粘連蛋白、整合素及生長因子的組合物。所述的體內降解時間為1-3個月。所述的疏松顆粒狀為具有孔隙結構的顆粒。所述的免疫增強組合物形態為顆粒狀。所述的顆粒狀的粒徑為500μm以下。尺寸為500μm以下的顆粒可以經皮下注射進入人體。本專利技術還提供一種上述新型免疫增強組合物的制備方法，其特征在于：采用動物小腸粘膜下層組織作為原料，依次通過組織前置處理、病毒滅活、免疫原消除、冷凍干燥和破碎成型步驟，獲得清除動物源病毒風險、細胞成分、DNA成分和α-Gal抗原，同時保留細胞外基質成分的免疫增強組合物。本專利技術上述制備方法中步驟(1)的組織前置處理，具體的為：取動物小腸粘膜下層組織材料，清洗并將水濾干。本專利技術步驟(2)的病毒滅活，具體的為：采用過氧乙酸-乙醇溶液和氫氧化鈉溶液分別浸泡動物小腸粘膜下層組織材料進行病毒滅活。本專利技術此處采用了兩步病毒滅活工藝，氫氧化鈉也用于病毒滅活。本專利技術步驟(3)的免疫原去除，具體為：免疫原去除液采用包含胰蛋白酶和EDTA的PBS溶液，免疫原去除過程在多頻超聲波裝置中進行，所述多頻超聲波裝置能夠產生至少兩個不同頻率。本專利技術步驟(4)的冷凍干燥，具體為：在真空冷凍干燥機中進行。本專利技術步驟(5)的破碎成型：將冷凍干燥后的小腸粘膜下層組織材料剪碎，使用液氮冷凍破碎裝置研磨破碎，然后通過篩網進行顆粒篩分。本專利技術上述方法還包括破碎成型后的滅菌解析步驟。所述動物為哺乳動物，優選豬或牛。所述的組織前置處理步驟為采用流動純水清洗至初始污染菌不高于100cfu/g。所述的病毒滅活步驟為采用過氧乙酸-乙醇溶液和氫氧化鈉二步法進行。病毒滅活滴度可高于6個log。所述的過氧乙酸-乙醇溶液中過氧乙酸的濃度(體積百分比)為0.1-5％、乙醇的濃度(體積百分比)為5-40％，過氧乙酸-乙醇溶液與動物小腸粘膜下層組織材料的比例(體積比)為(3-20)︰1，作用時間2小時；氫氧化鈉溶液采用0.2-2mol/L，的濃度，氫氧化鈉的濃度也可以優選為0.8-1.2mol/L，作用時間15-30min，溫度采用室溫20℃。所述的免疫原消除步驟為將病毒滅活后的動物小腸粘膜下層組織材料(組織原料)按比例浸于去除液中，采用雙頻超聲處理至動物源DNA殘留量為3-20ng/mg，α-Gal抗原清除率不低于99％。所述的去除液為含有0.01-0.1％(質量百分比濃度)的胰蛋白酶和0.1-1mmol/L濃度的EDTA的pH6-8的PBS溶液，所述的小腸粘膜下層組織材料與去除液的比例(體積比)為1：20-40。所述的雙頻超聲包含低頻和高頻兩個頻率，其中低頻頻率為20-30KHz，高頻頻率為60-80KHz，超聲功率為3-5kW，其中低頻處理1-10min，高頻處理1-10min，溫度范圍為10-40℃；超聲功率5000W以上。所述的破碎成型步驟為先剪碎，然后在液氮冷凍破碎裝置中進行破碎，通過篩網篩分出<500μm顆粒。本專利技術上述的組合物是動物小腸粘膜下層組織經過一系列上述處理步驟之后的固有組分。本專利技術進一步提供上述新型免疫增強組合物的應用，具體為：通過抗原配伍，增強人體免疫反應，激活Th1或Th2應答，產生特異性抗體反應。所述的配伍比例為抗原、免疫增強組合物、溶劑按1：(10-50)：(100-1000)的質量比。所述的抗體為IgG1型。與現有技術相比，本專利技術具有以下顯著優點和有益效果：(1)多頻超聲免疫原去除工藝：減少了細胞洗脫過程化學試劑使用量與作用時間，保護免疫原去除外基質膠原蛋白纖維完整性與三維多孔結構；(2)酶法細胞洗脫工藝：采用胰蛋白酶和EDTA復合溶液，脫除細胞過程溫和，減少對基質結構的破壞，保留基質中的活性生長因子；(3)高效破碎技術：低溫超高速剪切破碎技術，保護膠原蛋白、生物因子成分不受破壞；(4)可降解吸收：體內可降解，降解過程可控，作用周期長；(5)本專利技術此處采用了采用過氧乙酸-乙醇溶液和氫氧化鈉溶液分別浸泡小腸粘膜下層組織材料進行病毒滅活的兩步病毒滅活工藝，滅活更加徹底，獲得的免疫增強組合物應用于疫苗免疫增強劑，與細菌、病毒等病原微生物疫苗或腫瘤疫苗配合使用，增強機體對抗原的免疫應答，降低引起過敏、感染、炎癥、肉芽腫、局部膿腫的風險，可用于皮下注射和肌肉注射。(6)采本文檔來自技高網...

【技術保護點】
一種免疫增強組合物，其特征在于：該組合物包含無免疫原性、可體內降解的膠原蛋白、多糖物質和活性因子的疏松顆粒。

【技術特征摘要】
1.一種免疫增強組合物，其特征在于：該組合物包含無免疫原性、可體內降解的膠原蛋白、多糖物質和活性因子的疏松顆粒。2.根據權利要求1所述的免疫增強組合物，其特征在于：所述組合物以動物小腸粘膜下層組織材料制成。3.根據權利要求2所述的免疫增強組合物，其特征在于：所述動物為哺乳動物，優選豬或牛。4.根據權利要求1所述的免疫增強組合物，其特征在于：所述的膠原蛋白為包含I型、III型、IV型和VI型膠原蛋白的組合物，所述的多糖物質為包含硫酸軟骨素和透明質酸的組合物，所述的活性因子為包含纖維粘連蛋白、層粘連蛋白、整合素及生長因子的組合物。5.根據權利要求1所述的免疫增強組合物，其特征在于：所述的體內降解時間為1-3個月，所述的顆粒狀的粒徑為小于500μm。6.一種免疫增強組合物的制備方法，其特征在于：步驟包括：采用動物小腸粘膜下層組織作為原料，依次通過組織前置處理、病毒滅活、免疫原去除、冷凍干燥和破碎成型步驟，獲得清除動物源病毒風險、細胞成分、DNA成分和α-Gal抗原，保留細胞外基質成分的免疫增強組合物。7.根據權利要求6所述的免疫增強組合物的制備方法，其特征在于：具體的制備步驟包括：(1)組織前置處理：取動物小腸粘膜下層組織材料，清洗并將水濾干；(2)病毒滅活：采用過氧乙酸-乙醇溶液和氫氧化鈉溶液分別浸泡動物小腸粘膜下層組織材料進行病毒滅活；(3)免疫原去除：免疫原去除液采用包含胰蛋白酶和EDTA的PBS溶液，免疫原去除過程在多頻超聲波裝置中進行，所述的多頻超聲波裝置能夠產生至少兩個不同頻率；(4)冷凍干燥：在真空冷凍干燥機中進行；(5)破碎成型：將冷凍干燥后的小腸粘膜下層組織材料剪碎，使用液氮冷凍破碎裝置研磨破碎，然后通過篩網篩分，獲得粒徑小于50...

【專利技術屬性】
技術研發人員：趙博，夏磊磊，王洪權，趙延瑞，李學軍，張晉輝，
申請(專利權)人：北京博輝瑞進生物科技有限公司，
類型：發明
國別省市：北京,11