從發(fā)酵液的油相中提取4-雄烯二酮的方法技術(shù)

本發(fā)明專利技術(shù)屬于植物化學(xué)技術(shù)領(lǐng)域。本發(fā)明專利技術(shù)提供了一種從植物甾醇發(fā)酵液相中提取４－雄烯二酮的方法。本發(fā)明專利技術(shù)的方法提取效果好，產(chǎn)品純度高，回收油經(jīng)處理后，可以反復(fù)使用，減少環(huán)境污染；工藝路線短，適宜于規(guī)模型的工業(yè)化生產(chǎn)。（*該技術(shù)在2024年保護(hù)過(guò)期，可自由使用*）

【技術(shù)實(shí)現(xiàn)步驟摘要】

本專利技術(shù)屬于植物化學(xué)
具體涉及從發(fā)酵液的油相(植物油)中提取4-雄烯二酮4-Androstadiendione(4-AD)的方法。
技術(shù)介紹
植物甾醇在油相(植物油)為媒介的情況下，經(jīng)特殊的細(xì)菌發(fā)酵生物轉(zhuǎn)化后，可以將植物甾醇轉(zhuǎn)化為4-AD，由于4-AD具有較強(qiáng)的親油性，所以主要存在于發(fā)酵液中的油相媒介中。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路
本專利技術(shù)所要解決的技術(shù)問(wèn)題在于克服提取4-AD的現(xiàn)有工藝中的不足之處，設(shè)計(jì)一種提取收率高，環(huán)境污染少的提取方法。本專利技術(shù)提供了一種從發(fā)酵液的油相(植物油)中提取4-雄烯二酮(4-AD)的方法，該方法包括下列步驟(1)收集與萃取發(fā)酵液的油相在發(fā)酵液中加入適量的鹽使發(fā)酵液中的水相與油相部分分層，收集油相部分，用1∶1(V/V)的乙醇萃取4-5次，合并萃取液；(2)提取4-雄烯二酮粗品I將步驟(1)的萃取液在45℃、0.095Mpa條件下減壓蒸發(fā)回收乙醇，當(dāng)有少量晶體出現(xiàn)時(shí)停止?jié)饪s，冷卻至5℃結(jié)晶8小時(shí)，離心收集晶體，得粗品I；(3)純化制得4-雄烯二酮純品用1∶15(W/V)丙酮溶解粗品I，過(guò)濾，在25℃、0.095Mpa條件下減壓蒸發(fā)回收丙酮，當(dāng)有少量晶體出現(xiàn)時(shí)停止?jié)饪s，冷卻至5℃結(jié)晶8小時(shí)，離心收集晶體，得粗品II；用1∶20 W/V乙酸乙脂溶解，加0.1％ W/V活性碳攪拌脫色1小時(shí)，過(guò)濾，減壓蒸發(fā)至少量結(jié)晶析出時(shí)停止?jié)饪s，冷卻至5℃結(jié)晶8小時(shí)，離心得粗品III；將粗品III用1∶25 W/V甲醇溶解，加0.1％W/V活性碳攪拌脫色1小時(shí)，過(guò)濾，減壓蒸發(fā)至?xí)r少量結(jié)晶析出時(shí)停止?jié)饪s，冷卻至5℃結(jié)晶8小時(shí)，離心，用少量甲醇洗滌晶體，45℃、0.095Mpa真空干燥8小時(shí)得純品4-AD。另外，本專利技術(shù)的方法步驟(1)經(jīng)乙醇萃取后的油相部分再用1∶2(V/V)乙酸乙脂溶解，靜置分層8小時(shí)，上清液經(jīng)過(guò)濾處理后在45℃-60℃、0.095Mpa條件下減壓蒸發(fā)回收乙酸乙脂，得澄清的回收油，此油可重復(fù)用于生產(chǎn)。本專利技術(shù)的方法有下列特點(diǎn)①用加食鹽在發(fā)酵液中的方法，使發(fā)酵液水相和油相分層，并使部分溶解于水相部分的4-雄烯二酮全部溶于油相中；②用極性大的有機(jī)溶劑萃取溶解在油相中的4-雄烯二酮，使溶解于油相部分的4-雄烯二酮轉(zhuǎn)移到萃取液中；③用不同極性的溶劑反復(fù)溶解處理粗品結(jié)晶，使得不同極性的雜質(zhì)得到有效分離。萃取液經(jīng)濃縮，過(guò)濾，冷卻，得第一次粗品結(jié)晶后，用非極性有機(jī)溶劑溶解粗品結(jié)晶，經(jīng)過(guò)濾后除去部分極性雜質(zhì)；過(guò)濾液經(jīng)濃縮，冷卻，得第二次粗品結(jié)晶后，用極性小的有機(jī)溶劑溶解該粗品結(jié)晶，經(jīng)過(guò)濾除去部分雜質(zhì)；過(guò)濾液經(jīng)濃縮，冷卻，得第三次粗品結(jié)晶后，用極性大的有機(jī)溶劑溶解粗品結(jié)晶，經(jīng)活性碳脫色過(guò)濾后除去部分非極性雜質(zhì)及色素；過(guò)濾液經(jīng)濃縮，冷卻，得純品結(jié)晶。④用有機(jī)溶劑溶解處理萃取后的油相，使回收油達(dá)到可反復(fù)套用的目的。本專利技術(shù)的的方法與現(xiàn)有工藝的比較見(jiàn)表1 表1本專利技術(shù)技術(shù)水平與原工藝技術(shù)水平數(shù)據(jù)一覽表 本專利技術(shù)的方法工藝路線短、產(chǎn)品純度高、回收油可以重復(fù)利用，減少環(huán)境污染，適宜規(guī)模型工業(yè)化生產(chǎn)。*發(fā)酵油中析純產(chǎn)物系指植物甾醇經(jīng)發(fā)酵轉(zhuǎn)為為AD后的總質(zhì)量。*收率(析純)合格產(chǎn)品經(jīng)析純后與投入的植物甾醇重量之比，指重量收率。說(shuō)明以上數(shù)據(jù)為5次實(shí)驗(yàn)結(jié)果的平均數(shù)據(jù)。從數(shù)據(jù)上可以看出本專利技術(shù)在提取收率上要比原工藝提高近11個(gè)百分點(diǎn)。產(chǎn)物質(zhì)量從純度、熔點(diǎn)，比懸及付產(chǎn)物含量上都要優(yōu)于原工藝的產(chǎn)品。具體實(shí)施例方式(1)將30kg食鹽加入500L發(fā)酵液中，攪拌30分鐘，靜止分層8小時(shí)，收集油相部分120L。在萃取罐中分次萃取5次，每次都用1∶1(V/V)的乙醇萃取，合并5次萃取液約610L，(萃余油約110L待回收處理)。將610L萃取液在濃縮罐中減壓濃縮，冷卻結(jié)晶，離心過(guò)濾得粗品約20kg；用300L丙酮溶解20kg粗品，過(guò)濾，在濃縮罐中減壓濃縮，冷卻結(jié)晶，離心過(guò)濾得粗品約15kg；用300L乙酸乙脂溶解15kg粗品，加0.3kg活性碳，攪拌脫色1小時(shí)，過(guò)濾，在濃縮罐中減壓濃縮，冷卻結(jié)晶，離心過(guò)濾得粗品約12kg；用300L甲醇溶解12kg粗品，加0.3kg活性碳，攪拌脫色1小時(shí)，過(guò)濾，在濃縮罐中減壓濃縮，冷卻結(jié)晶，離心洗滌結(jié)晶，在真空干燥箱中45℃、0.095Mpa真空干燥8小時(shí)得純品4-AD約8kg；(2)將萃余油約110L用220L乙酸乙脂攪拌溶解，靜置分層8小時(shí)，棄去下層沉淀部分，上清液經(jīng)過(guò)濾后在45℃—60℃、0.095Mpa條件下減壓蒸發(fā)回收乙酸乙脂，得澄清的回收油約80L，此油可重復(fù)用于生產(chǎn)。權(quán)利要求1.一種從植物甾醇發(fā)酵液油相中提取4-雄烯二酮的方法，其特征在于該方法包括下列步驟(1)收集與萃取發(fā)酵液的油相在發(fā)酵液中加入適量的鹽使發(fā)酵液中的水相與油相部分分層，收集油相部分，用1∶1(V/V)的乙醇萃取4-5次，合并萃取液；(2)提取4-雄烯二酮粗品I將步驟(1)的萃取液在45℃、0.095Mpa條件下減壓蒸發(fā)回收乙醇，當(dāng)有少量晶體出現(xiàn)時(shí)停止?jié)饪s，冷卻至5℃結(jié)晶8小時(shí)，離心收集晶體，得粗品I；(3)純化制得4-雄烯二酮純品用1∶15(W/V)丙酮溶解粗品I，過(guò)濾，在25℃、0.095Mpa條件下減壓蒸發(fā)回收丙酮，當(dāng)有少量晶體出現(xiàn)時(shí)停止?jié)饪s，冷卻至5℃結(jié)晶8小時(shí)，離心收集晶體，得粗品II；用1∶20W/V乙酸乙脂溶解，加0.1％W/V活性碳攪拌脫色1小時(shí)，過(guò)濾，減壓蒸發(fā)至少量結(jié)晶析出時(shí)停止?jié)饪s，冷卻至5℃結(jié)晶8小時(shí)，離心得粗品III；將粗品III用1∶25W/V甲醇溶解，加0.1％W/V活性碳攪拌脫色1小時(shí)，過(guò)濾，減壓蒸發(fā)至?xí)r少量結(jié)晶析出時(shí)停止?jié)饪s，冷卻至5℃結(jié)晶8小時(shí)，離心，用少量甲醇洗滌晶體，45℃、0.095Mpa真空干燥8小時(shí)得純品4-AD。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種從植物甾醇發(fā)酵液油相中提取4-雄烯二酮的方法，其特征在于其中步驟(1)經(jīng)乙醇萃取后的油相部分再用1∶2(V/V)乙酸乙脂溶解，靜置分層8小時(shí)，上清液經(jīng)過(guò)濾處理后在45℃-60℃、0.095Mpa條件下減壓蒸發(fā)回收乙酸乙脂，得澄清的回收油，此油可重復(fù)用于生產(chǎn)。全文摘要本專利技術(shù)屬于植物化學(xué)
本專利技術(shù)提供了一種從植物甾醇發(fā)酵液相中提取4－雄烯二酮的方法。本專利技術(shù)的方法提取效果好，產(chǎn)品純度高，回收油經(jīng)處理后，可以反復(fù)使用，減少環(huán)境污染；工藝路線短，適宜于規(guī)模型的工業(yè)化生產(chǎn)。文檔編號(hào)C07J1/00GK1712410SQ20041002516公開(kāi)日2005年12月28日 申請(qǐng)日期2004年6月15日 優(yōu)先權(quán)日2004年6月15日專利技術(shù)者鄭雄敏, 榮紹豐 申請(qǐng)人:上海迪賽諾醫(yī)藥發(fā)展有限公司, 上海迪賽諾生物技術(shù)有限公司本文檔來(lái)自技高網(wǎng)...

【技術(shù)保護(hù)點(diǎn)】
一種從植物甾醇發(fā)酵液油相中提取４－雄烯二酮的方法，其特征在于該方法包括下列步驟：（１）收集與萃取發(fā)酵液的油相：在發(fā)酵液中加入適量的鹽使發(fā)酵液中的水相與油相部分分層，收集油相部分，用１∶１（Ｖ／Ｖ）的乙醇萃取４－５次，合并萃取 液；（２）提取４－雄烯二酮粗品Ⅰ：將步驟（１）的萃取液在４５℃、０．０９５Ｍｐａ條件下減壓蒸發(fā)回收乙醇，當(dāng)有少量晶體出現(xiàn)時(shí)停止?jié)饪s，冷卻至５℃結(jié)晶８小時(shí)，離心收集晶體，得粗品Ⅰ；（３）純化制得４－雄烯二酮純品：　 　用１∶１５（Ｗ／Ｖ）丙酮溶解粗品Ⅰ，過(guò)濾，在２５℃、０．０９５Ｍｐａ條件下減壓蒸發(fā)回收丙酮，當(dāng)有少量晶體出現(xiàn)時(shí)停止?jié)饪s，冷卻至５℃結(jié)晶８小時(shí)，離心收集晶體，得粗品Ⅱ；用１∶２０Ｗ／Ｖ乙酸乙脂溶解，加０．１％Ｗ／Ｖ活性碳攪拌脫色１小時(shí)，過(guò)濾，減壓蒸發(fā)至少量結(jié)晶析出時(shí)停止?jié)饪s，冷卻至５℃結(jié)晶８小時(shí)，離心得粗品Ⅲ；將粗品Ⅲ用１∶２５Ｗ／Ｖ甲醇溶解，加０．１％Ｗ／Ｖ活性碳攪拌脫色１小時(shí)，過(guò)濾，減壓蒸發(fā)至?xí)r少量結(jié)晶析出時(shí)停止?jié)饪s，冷卻至５℃結(jié)晶８小時(shí)，離心，用少量甲醇洗滌晶體，４５℃、０．０９５Ｍｐａ真空干燥８小時(shí)得純品４－ＡＤ。...

【技術(shù)特征摘要】

【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：鄭雄敏，榮紹豐，
申請(qǐng)(專利權(quán))人：上海迪賽諾醫(yī)藥發(fā)展有限公司，上海迪賽諾生物技術(shù)有限公司，
類型：發(fā)明
國(guó)別省市：31[中國(guó)|上海]