本發明專利技術涉及診斷標志物，具體公開了一種鼻咽癌相關標志物Galectin?10(genebank登錄號ID1178)，并提供了該標志物及其特異性抗體在制備檢測鼻咽癌試劑盒中的應用，所述試劑盒可為免疫組化試劑盒或酶聯免疫檢測試劑盒。本發明專利技術為有效判斷人鼻咽疾病進程提供了新的科學依據，可實現鼻咽癌的早發現和早治療。
Galectin 10 and the specificity of the antibody in preparing application kit in the detection of nasopharyngeal carcinoma
The present invention relates to diagnostic markers, particularly discloses a nasopharyngeal carcinoma markers Galectin 10 (genebank accession No. ID1178), and provides the markers and their application in the preparation of specific antibody detection of nasopharyngeal carcinoma in the kit, the kit for immunohistochemical kit or ELISA Kit box. The invention provides a new scientific basis for effectively judging the process of human nasopharyngeal diseases, and can realize early detection and early treatment of nasopharyngeal carcinoma.
【技術實現步驟摘要】
Galectin-10及其特異性抗體在制備檢測鼻咽癌試劑盒中的應用
本專利技術涉及診斷標志物，具體地說，涉及Galectin-10在檢測鼻咽癌中的應用。
技術介紹
鼻咽癌是一種頻發于我國南方各省及東南亞地區的具有顯著種族和地域分布特點的上皮源性惡性腫瘤。鼻咽癌的發病與遺傳因素、EB病毒感染和其它環境因素多種因素相關。隨著醫學科技的高速發展，越來越多的先進設備已用于鼻咽癌的檢查。目前鼻咽癌的檢測方法主要包括臨床檢查、鼻咽鼻鏡檢查、影像學檢查、病理形態學檢查和血清學檢查。影像學檢查的靈敏度有限，且價格不菲；病理形態學檢查有創；EB病毒抗體的血清學檢查由于精密度和準確度問題也只能用于篩查，且對治療后的觀察無意義。血清學檢查方法簡便，價格低廉，病人易于接受。因此尋找、鑒定鼻咽癌相關標志物對防治鼻咽癌非常重要。Galectin-10是半乳糖凝集素家族的一員，人Galectin-10蛋白基因名為LGALS10(genebank登錄號ID1178)，又名人晶體蛋白(CharcotLeydenCrystalProtein，CLC)，位于染色體19q13.2區段，全長6777bp，包含4個外顯子。人Galectin-10蛋白分子量為16.5KDa，由142個氨基酸組成(蛋白質登錄號Q05315，http://www.uniprot.org/)。有報道稱Galectin-10參與調節調控細胞的生長、血管生成和炎癥進展，但其在鼻咽癌中發揮的生物學功能尚未見報道。
技術實現思路
為了解決現有技術中存在的問題，本專利技術的目的是提供一種鼻咽癌相關標志物，并提供了該標志物及其特異性抗體在制備檢測鼻咽癌試劑盒中的應用。為了實現本專利技術目的，本專利技術的技術方案如下：本專利技術首先提供了一種鼻咽癌相關標志物Galectin-10，基因名為LGALS10(genebank登錄號ID1178)，又名人晶體蛋白(CharcotLeydenCrystalProtein，CLC)，位于染色體19q13.2區段，全長6777bp，包含4個外顯子。人Galectin-10蛋白分子量為16.5KDa，由142個氨基酸組成(蛋白質登錄號Q05315，http://www.uniprot.org/)。進一步地，本專利技術提供了Galectin-10或其特異性抗體在制備檢測鼻咽癌的試劑或試劑盒中的應用。所述試劑盒可為免疫組化試劑盒或酶聯免疫檢測試劑盒。本專利技術的有益效果在于：本專利技術提供了鼻咽癌診斷與預后的生物標志物Galectin-10，根據Galectin-10的表達水平可實現鼻咽癌的早發現和早治療。本專利技術為有效判斷人鼻咽疾病進程提供了新的科學依據。附圖說明圖1為檢測Galectin-10在正常鼻咽上皮和鼻咽癌組織表達的免疫組化圖。圖2為Galectin-10在永生化鼻咽上皮細胞NP69和鼻咽癌細胞CNE1，CNE2，HK1細胞中表達的westernblot檢測結果。圖3為ELISA法檢測Galectin-10在鼻咽癌患者血清中的表達結果。具體實施方式下面將結合實施例對本專利技術的優選實施方式進行詳細說明。需要理解的是以下實施例的給出僅是為了起到說明的目的，并不是用于對本專利技術的范圍進行限制。本領域的技術人員在不背離本專利技術的宗旨和精神的情況下，可以對本專利技術進行各種修改和替換。下述實施例中所使用的實驗方法如無特殊說明，均為常規方法。下述實施例中所用的材料、試劑等，如無特殊說明，均可從商業途徑得到。實施例1本實施例用于說明免疫組化分析Galectin-10在鼻咽癌組織中表達的臨床意義：以Galectin-10特異性抗體(sigmaaldrich公司購買，C0998)聯合邁新S-P免疫組化試劑盒(福建邁新公司)組成本實施例的診斷試劑盒。活檢鼻咽部組織經10％多聚甲醛固定后，常規梯度酒精脫水透明，石蠟包埋，組織切成4μm厚的薄片，貼片烤片。按照免疫組織化學超敏試劑盒說明書步驟進行免疫組織化學染色操作：1)經100％二甲苯對石蠟組織切片脫蠟二次，每次半小時，至完全脫蠟干凈；2)用新鮮配制的100％、95％、90％、75％梯度酒精水化后，PBS液(PH6.0)沖洗3次，每次3min；3)抗原修復：處理好的切片置于切片架，置枸櫞酸鹽緩沖液的燒杯中電磁爐上加熱至沸騰，維持15min，以達到抗原全面表達的最佳狀態。自然冷卻至室溫，雙蒸水沖洗二次，PBS沖洗二次；4)加一滴過氧化物阻斷溶液(試劑A)，37℃下孵育8min，PBS沖洗10min×3次；5)用吸水紙從周邊吸除多余的PBS液，加一滴正常非免疫動物血清(試劑B)，完全覆蓋住樣本，繼續孵育10min；6)同樣吸除血清，分別加入稀釋的兔抗人Galectin-10(1:200)。為避免假陽性結果，采用PBS代替一抗做陰性對照；7)孵育完后，PBS沖洗10min×3次，同樣吸除PBS液。滴加一滴生物標記的二抗(試劑C)，室溫下孵育10min，PBS沖洗10min×3次。8)吸除PBS液，加一滴鏈霉素抗生物素-過氧化物酶溶液(試劑D)，室溫下孵育10min，PBS沖洗10min×3次。9)吸除PBS液，加二滴新鮮配制的DAB溶液，顯微鏡下觀察1-10min，至顯色合適為止。10)自來水沖洗，蘇木素復染至合適程度，自來水沖洗泛藍。11)最后采用新鮮配制的梯度酒精脫水干燥，二甲苯透明，中性樹膠封固玻片。對組織化學染色圖片進行分析。染色評分標準如下：隨機選取至少10個高倍鏡視野，計數1000個細胞，以積分法計算結果。即根據每張切片的染色強度和陽性細胞比例計分。染色強度計分原則為無色0分；淺黃色1分；棕黃色2分；棕褐色3分。著色細胞比例計分原則為無著色0分；＜30％為1分；30％-60％為2分；≥60％為3分，著色強度和著色細胞比例所得積分兩者相加，0-2分為表達陰性，3分以上為表達陽性。應用SPSS15.0統計軟件對蛋白質在組織間的表達差異進行分析，P＜0.05表示具有統計學意義。按照上述方法對存檔的石蠟包埋的組織標本包括24例正常鼻咽組織，53例鼻咽癌組織化學染色分析。結果如下：1)免疫組化分析Galectin-10在正常鼻咽上皮和鼻咽癌組織中的表達(圖1)。圖1A是Galectin-10在正常鼻咽上皮的典型圖片，為陰性表達，圖1B是Galectin-10在鼻咽癌組織中表達的典型圖片，為陽性表達。2)表1結果顯示Galectin-10在正常鼻咽上皮和鼻咽癌組織中之間的表達存在差異且有統計學意義(P＜0.05)。Galectin-10在正常鼻咽上皮組織中大部分成陰性表達(陽性率為29.2％)，而Galectin-10在鼻咽癌組織中陽性表達明顯升高(陽性率為77.4％)，陽性率存在顯著性差異(P＜0.05)。galectin10的表達在正常和患者中存在統計學差異，但對個體而言，精密度和準確度不可兼得，所以在臨床實踐中得結合其他的診斷方法，輔助診斷。表1Galectin-10在鼻咽癌組織和正常鼻咽粘膜組織中的表達實施例2本實施例用于說明Westernblotting檢測Galectin-10蛋白的表達情況蛋白準備：鼻咽癌細胞系CNE1、CNE2和HK1用含100U/ml抗生素(青霉素和鏈霉素)和10％小牛血清配制的RPMI1640完全培養基進行常規培養本文檔來自技高網...
【技術保護點】
Galectin?10或其特異性抗體在制備檢測鼻咽癌試劑盒中的應用。
【技術特征摘要】
1.Galectin-10或其特異性抗體在制備檢測鼻咽癌試劑盒中的應用。2.根據權利要求1所述的應用，其特征在于，所述試劑盒為免疫組化試劑盒。3...
【專利技術屬性】
技術研發人員：湯參娥，彭芳，朱江，趙師，劉芬，李巧羽，朱勁飛，
申請(專利權)人：中南大學湘雅醫院，
類型：發明
國別省市：湖南,43
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