單羽火筒樹抗癌活性部位LA-D及其藥物組合物和其化學(xué)成分分離和鑒定方法技術(shù)

提供單羽火筒樹[九節(jié)貍，Leea?asiatica(Linnaeus)Ridsdale]抗癌活性部位LA?D及其中的化學(xué)成分的提取和鑒定方法，以及，以該活性部位組成的藥物組合物，以及它們在制備治療腫瘤的藥物中的應(yīng)用。本發(fā)明專利技術(shù)采用色譜柱層析及半制備高效液相色譜的分離方法，以及質(zhì)譜和核磁共振波譜的鑒定方法，從LA?D中分離、鑒定出了山奈酚、山萘酚?3?O?α?L?吡喃鼠李糖苷、槲皮素、異槲皮苷、槲皮素?3?O?α?L?吡喃鼠李糖苷、楊梅素、楊梅素?3?O?α?L?吡喃鼠李糖苷、Europetin、Europetin?3?O?α?L?rhamnopyranoside和(?)?兒茶素和山楂酸。本發(fā)明專利技術(shù)首次闡明LA?D的主要化學(xué)成分，通過提供的方法，可以簡單、快速地從單羽火筒樹及其抗癌活性部位LA?D中獲取上述化學(xué)成分，用于建立單羽火筒樹及其抗癌活性部位LA?D的質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)。

A single feather the anticancer activity parts of tree LA D firepipe its pharmaceutical compositions and methods of isolation and identification of chemical composition

Provide a single feather drum tree [nine section of fox, Leea asiatica (Linnaeus) method for extraction and identification of Ridsdale] LA, the anticancer activity parts of D and the chemical composition and drug composition from the active site, and they used drugs for the treatment of tumor in the system. The invention adopts the method of separating column chromatography and semi preparative high performance liquid chromatography, mass spectrometry and nuclear magnetic resonance spectroscopy and the identification method, separation from LA, D identified kaempferol, kaempferol 3 O phenol alpha L pyran rhamnoside, quercetin and Isoquercitrin, quercetin skin in 3 O alpha L pyran rhamnoside, myricetin, myricetin 3 O alpha L pyran rhamnoside, Europetin, Europetin 3 O rhamnopyranoside and L alpha () catechin and malonic acid. The main chemical composition of the invention for the first time that LA D, by the method, can be simply and quickly from a single feather drum tree and its anticancer activity site of LA D obtain the chemical composition, to establish a quality control standard for site fire tree single plume and its antitumor activity of LA D.

【技術(shù)實(shí)現(xiàn)步驟摘要】

：本專利技術(shù)屬于天然產(chǎn)物提取分離
，尤其涉及單羽火筒樹抗癌活性部位LA-D，其藥物組合物，及其化學(xué)成分分離和鑒定方法。
技術(shù)介紹
：單羽火筒樹[Leeaasiatica(Linnaeus)Ridsdale]，又名九節(jié)貍，為葡萄科火筒樹屬植物。單羽火筒樹的根具有清熱利但的功能，用于治療黃疸肝炎[朱兆云,云南天然藥物圖鑒(第5卷).昆明:云南科技出版社.2009:285]。本申請人調(diào)查發(fā)現(xiàn)，在云南德宏，當(dāng)?shù)鼐用穹Q單羽火筒樹為“九節(jié)貍”，用其治療扁桃腺炎、三腺炎、乳房纖維瘤、子宮肌瘤、卵巢囊腫、毛囊炎等疾病。前人曾報道該植物甲醇提取物具有抗腸道寄生蟲和抗氧化的作用[SenS,DeB,DevannaN,ChakrabortyR.AnthelminticandinvitroantioxidantevaluationoffractionsofmethanolextractofLeeaasiaticaleaves.AncientScienceofLife2012,31(3),101-106]。單羽火筒樹的化學(xué)成分及其提取物的抗癌活性尚未見報道。因此，闡明單羽火筒樹抗癌活性的化學(xué)物質(zhì)基礎(chǔ)，對進(jìn)一步的新藥研發(fā)和質(zhì)量控制具有重要的意義。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路
：本專利技術(shù)針對現(xiàn)有技術(shù)存在了上述問題，提供單羽火筒樹[Leeaasiatica(Linnaeus)Ridsdale]抗癌癥活性部位LA-D，以其活性成分的藥物組合物，以及LA-D中的化學(xué)成分的提取和鑒定方法。由于單羽火筒樹具有一定的抗癌癥活性，但是其活性部位及其化學(xué)成分不清楚，不能建立質(zhì)量控制標(biāo)準(zhǔn)。所以，本專利技術(shù)提供了單羽火筒樹的活性部位乙酸乙酯部位LA-D分離鑒定方法用于解決這個技術(shù)問題。為了實(shí)現(xiàn)本專利技術(shù)的上述目的，本專利技術(shù)提供了如下的技術(shù)方案：單羽火筒樹提取物乙酸乙酯萃取部位LA-D，所述的LA-D由下述方法制備而得：單羽火筒樹干燥全株粉碎后用甲醇冷浸7天，過濾，濾渣繼續(xù)提取，總共提取4次，合并濾液，回收溶劑，得浸膏，將浸膏用水制成混懸液，分別用石油醚、氯仿和乙酸乙酯萃取，回收溶劑獲得石油醚部分、氯仿部分、乙酸乙酯部分，乙酸乙酯部分為LA-D。如所述的單羽火筒樹提取物乙酸乙酯萃取部位LA-D，其中所述的LA-D中化學(xué)成分山奈酚、山萘酚-3-O-α-L-吡喃鼠李糖苷、槲皮素、異槲皮苷、槲皮素-3-O-α-L-吡喃鼠李糖苷、楊梅素、楊梅素-3-O-α-L-吡喃鼠李糖苷、Europetin、Europetin3-O-α-L-rhamnopyranoside、(-)-兒茶素和山楂酸的總含量以重量百分比計(jì)，占LA-D的10-95％。如所述的單羽火筒樹提取物乙酸乙酯萃取部位LA-D，其中所述的LA-D中化學(xué)成分山奈酚、山萘酚-3-O-α-L-吡喃鼠李糖苷、槲皮素、異槲皮苷、槲皮素-3-O-α-L-吡喃鼠李糖苷、楊梅素、楊梅素-3-O-α-L-吡喃鼠李糖苷、Europetin、Europetin3-O-α-L-rhamnopyranoside、(-)-兒茶素和山楂酸是從單羽火筒樹乙酸乙酯部位LA-D分離得到，步驟為：(1)LA-D經(jīng)硅膠柱層析用20:1，15:1，10:1，5:1，3:1，1:1的氯仿-甲醇混合溶劑梯度洗脫劃段，得到Fr.A1、Fr.A2、Fr.B1、Fr.B2、Fr.C、Fr.D、Fr.E、Fr.F、Fr.G、Fr.H等10個部分；(2)取Fr.A1部分經(jīng)C18反相硅膠柱層析，10:90→100:0的甲醇-水，得到80％甲醇洗脫部分純化得到化合物山楂酸；(3)取Fr.B1部分經(jīng)C18反相硅膠柱層析，10:90→100:0的甲醇-水，得到5％甲醇洗脫部分，過LH-20凝膠柱層析，甲醇洗脫后得到B1-2-3和B1-2-5兩個主要部分。B1-2-3經(jīng)半制備高效液相色譜純化得到山奈酚、山萘酚-3-O-α-L-吡喃鼠李糖苷、Europetin和Europetin3-O-α-L-rhamnopyranoside；B1-2-5經(jīng)半制備高效液相色譜純化得到(-)-兒茶素；(4)取Fr.B2部分和Fr.C部分合并后經(jīng)C18反相硅膠柱層析，10:90→100:0的甲醇-水，得到15％和20％甲醇洗脫部分。15％甲醇洗脫部分用半制備高效液相色譜純化得到異槲皮苷；20％甲醇洗脫部分經(jīng)LH-20凝膠柱層析得到槲皮素、楊梅素-3-O-α-L-吡喃鼠李糖苷和一個混合物，后者經(jīng)半制備高效液相色譜純化得到楊梅素；(5)取Fr.D部分和Fr.E部分合并后經(jīng)C18反相硅膠柱層析，10:90→100:0的甲醇-水，得到40％甲醇洗脫部分，40％甲醇洗脫部分經(jīng)LH-20凝膠層析柱得到槲皮素-3-O-α-L-吡喃鼠李糖苷；其中，(3)所述B1-2-3的半制備高效液相色譜是用安捷倫1200液相色譜儀，UltimateAQ-C18色譜柱，色譜柱大小4.6×300mm，洗脫劑為甲醇-水(含0.05％三氟乙酸)，比例40:60，流速2mL/min；B1-2-5的半制備高效液相色譜是用安捷倫1200液相色譜儀，UltimateAQ-C18色譜柱，色譜柱大小4.6×300mm，洗脫劑為甲醇-水(含0.05％三氟乙酸)，比例15:85，流速2mL/min；(4)所述15％甲醇洗脫部分的半制備高效液相色譜是用安捷倫1200液相色譜儀，UltimateAQ-C18色譜柱，色譜柱大小4.6×300mm，洗脫劑為甲醇-水(含0.05％三氟乙酸)，比例15:85，流速2mL/min；20％甲醇洗脫部分的半制備高效液相色譜是用安捷倫1200液相色譜儀，UltimateAQ-C18色譜柱，色譜柱大小4.6×300mm，洗脫劑為甲醇-水(含0.05％三氟乙酸)，比例30:70，流速2mL/min。本專利技術(shù)還提供了一種藥物組合物，其中含有治療有效量的所述的單羽火筒樹乙酸乙酯萃取部位LA-D和藥學(xué)上可接受的載體。本專利技術(shù)另外還提供了一種單羽火筒樹乙酸乙酯萃取部位LA-D的化學(xué)成分分離鑒定方法，該方法是從單羽火筒樹乙酸乙酯萃取部位LA-D分離得到山奈酚、山萘酚-3-O-α-L-吡喃鼠李糖苷、槲皮素、異槲皮苷、槲皮素-3-O-α-L-吡喃鼠李糖苷、楊梅素、楊梅素-3-O-α-L-吡喃鼠李糖苷、Europetin、Europetin3-O-α-L-rhamnopyranoside、(-)-兒茶素和山楂酸，其步驟為：(1)LA-D經(jīng)硅膠柱層析用20:1，15:1，10:1，5:1，3:1，1:1的氯仿-甲醇混合溶劑梯度洗脫劃段，得到Fr.A1、Fr.A2、Fr.B1、Fr.B2、Fr.C、Fr.D、Fr.E、Fr.F、Fr.G、Fr.H等10個部分；(2)取Fr.A1部分經(jīng)C18反相硅膠柱層析，10:90→100:0的甲醇-水，得到80％甲醇洗脫部分純化得到化合物山楂酸(maslinicacid)；(3)取Fr.B1部分經(jīng)C18反相硅膠柱層析，10:90→100:0的甲醇-水，得到5％甲醇洗脫部分，過LH-20凝膠柱層析，甲醇洗脫后得到B1-2-3和B1-2-5兩個主要部分。B1-2-3經(jīng)半制備高效液相色譜純化得到山奈酚、山萘酚-3-O-α-L-吡喃鼠李糖苷、Europetin和Europetin3-O-α-L-rhamnopyranosi本文檔來自技高網(wǎng)...

【技術(shù)保護(hù)點(diǎn)】
單羽火筒樹提取物乙酸乙酯萃取部位LA?D，其特征在于所述的LA?D由下述方法制備而得：單羽火筒樹干燥全株粉碎后用甲醇冷浸7天，過濾，濾渣繼續(xù)提取，總共提取4次，合并濾液，回收溶劑，得浸膏，將浸膏用水制成混懸液，分別用石油醚、氯仿和乙酸乙酯萃取，回收溶劑獲得石油醚部分、氯仿部分、乙酸乙酯部分，乙酸乙酯部分為LA?D。

【技術(shù)特征摘要】
1.單羽火筒樹提取物乙酸乙酯萃取部位LA-D，其特征在于所述的LA-D由下述方法制備而得：單羽火筒樹干燥全株粉碎后用甲醇冷浸7天，過濾，濾渣繼續(xù)提取，總共提取4次，合并濾液，回收溶劑，得浸膏，將浸膏用水制成混懸液，分別用石油醚、氯仿和乙酸乙酯萃取，回收溶劑獲得石油醚部分、氯仿部分、乙酸乙酯部分，乙酸乙酯部分為LA-D。2.如權(quán)利要求1所述的單羽火筒樹提取物乙酸乙酯萃取部位LA-D，其特征在于所述的LA-D中化學(xué)成分山奈酚、山萘酚-3-O-α-L-吡喃鼠李糖苷、槲皮素、異槲皮苷、槲皮素-3-O-α-L-吡喃鼠李糖苷、楊梅素、楊梅素-3-O-α-L-吡喃鼠李糖苷、Europetin、Europetin3-O-α-L-rhamnopyranoside、(-)-兒茶素和山楂酸的總含量以重量百分比計(jì)，占LA-D的10-95％。3.如權(quán)利要求1所述的單羽火筒樹提取物乙酸乙酯萃取部位LA-D，其特征在于所述的LA-D中化學(xué)成分山奈酚、山萘酚-3-O-α-L-吡喃鼠李糖苷、槲皮素、異槲皮苷、槲皮素-3-O-α-L-吡喃鼠李糖苷、楊梅素、楊梅素-3-O-α-L-吡喃鼠李糖苷、Europetin、Europetin3-O-α-L-rhamnopyranoside、(-)-兒茶素和山楂酸是從單羽火筒樹乙酸乙酯部位LA-D分離得到，步驟為：(1)LA-D經(jīng)硅膠柱層析用20:1，15:1，10:1，5:1，3:1，1:1的氯仿-甲醇混合溶劑梯度洗脫劃段，得到Fr.A1、Fr.A2、Fr.B1、Fr.B2、Fr.C、Fr.D、Fr.E、Fr.F、Fr.G、Fr.H等10個部分；(2)取Fr.A1部分經(jīng)C18反相硅膠柱層析，10:90→100:0的甲醇-水，得到80％甲醇洗脫部分純化得到化合物山楂酸；(3)取Fr.B1部分經(jīng)C18反相硅膠柱層析，10:90→100:0的甲醇-水，得到5％甲醇洗脫部分，過LH-20凝膠柱層析，甲醇洗脫后得到B1-2-3和B1-2-5兩個主要部分。B1-2-3經(jīng)半制備高效液相色譜純化得到山奈酚、山萘酚-3-O-α-L-吡喃鼠李糖苷、Europetin和Europetin3-O-α-L-rhamnopyranoside；B1-2-5經(jīng)半制備高效液相色譜純化得到(-)-兒茶素；(4)取Fr.B2部分和Fr.C部分合并后經(jīng)C18反相硅膠柱層析，10:90→100:0的甲醇-水，得到15％和20％甲醇洗脫部分。15％甲醇洗脫部分用半制備高效液相色譜純化得到異槲皮苷；20％甲醇洗脫部分經(jīng)LH-20凝膠柱層析得到槲皮素、楊梅素-3-O-α-L-吡喃鼠李糖苷和一個混合物，后者經(jīng)半制備高效液相色譜純化得到楊梅素；(5)取Fr.D部分和Fr.E部分合并后經(jīng)C18反相硅膠柱層析，10:90→100:0的甲醇-水，得到40％甲醇洗脫部分，40％甲醇洗脫部分經(jīng)LH-20凝膠層析柱得到槲皮素-3-O-α-L-吡喃鼠李糖苷；其中，(3)所述B1-2-3的半制備高效液相色譜是用安捷倫1200液相色譜儀，UltimateAQ-C18色譜柱，色譜柱大小4.6×300mm，洗脫劑為甲醇-水(含0.05％三氟乙酸)，比例40:60，流速2mL/min；B1-2-5的半制備高效液相色譜是用安捷倫1200液相色譜儀，UltimateAQ-C18色譜柱，色譜柱大小4.6×300mm，洗脫劑為甲醇-水(含0.05％三氟乙酸)，比例15:85，流速2mL/min；(4)所述15％甲醇洗脫部分的半制備高效液相色譜是用安捷倫1200液相色譜儀，UltimateAQ-C18色譜柱，色譜柱大小4.6×300mm，洗脫劑為甲醇-水(含0.05％三氟乙酸)，比例15:85，流速2mL/min；20％甲醇洗脫部分的半制備高效液相色譜是用安捷倫1200液相色譜儀，UltimateAQ-C18色譜柱，色譜柱大小4.6×300mm，洗脫劑為甲醇-水(含0.05％三氟乙酸)，比例30:70，流速2mL/min。4.藥物組合物，其中含有治療有效量的權(quán)利要求1或2或3所述的單羽火筒樹乙酸乙酯萃取部位LA-D和藥學(xué)上可接受的載體。5.一種單羽火筒樹乙酸乙酯萃...

【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：楊珺，黃鐵堅(jiān)，黃靖，柯鐳喻，王躍虎，羅吉鳳，李恒，
申請(專利權(quán))人：中國科學(xué)院昆明植物研究所，瑞麗市畹町經(jīng)濟(jì)開發(fā)區(qū)博鴻實(shí)業(yè)有限公司，
類型：發(fā)明
國別省市：云南;53