一種D?二聚體定量檢測的磁微粒化學發光微流控芯片制造技術

本發明專利技術公開了一種D?二聚體定量檢測的磁微粒化學發光微流控芯片，其結構主要包括蓋片(1)和底片(11)；其中蓋片(1)上的加樣口(2)，樣本液流通道(6)，第一生物標記物存儲池(4)，微混合器(7)，過渡區(10)依次連接；底片(11)上的過濾器(12)，反應池(13)，清洗池(14)，檢測池(15)，溶液釋放通道(18)依次連接，底片(11)上的檢測池(15)通過溶液釋放通道(18)與清洗液存儲池(16)和發光液存儲池(17)連接。

【技術實現步驟摘要】

本專利技術涉及免疫體外診斷領域，具體涉及一種D-二聚體定量檢測的磁微粒化學發光微流控芯片，能夠在短時間內實現對生物樣品中D-二聚體的定量檢測，具有操作簡單，靈敏度高，低成本等特點。技術背景纖維蛋白溶解系統(fibrinolysissystem)是人體最重要的抗凝系統，由4種主要部分組成：纖溶酶原(plasmingen)、纖溶酶原激活劑(plasmingenactivator，如t-PA，u-PA)、纖溶酶(plasmin)、纖溶酶抑制物(plasminactivatorinhibitor，PAI-1，antiplasmin)。當纖維蛋白凝結塊(fibrinclot)形成時，在tPA的存在下，纖溶酶原激活轉化為纖溶酶，纖維蛋白溶解過程開始，纖溶酶降解纖維蛋白凝結塊形成各種可溶片段，形成纖維蛋白產物(FDP)，FDP由下列物質：X-寡聚體(X-oligomer)、D-二聚體(D-Dimer)、中間片段(Intermediatefragments)、片段E(FragmentE)組成。其中，X-寡聚體和D-聚體均含D-二聚體單位。纖溶蛋白降解產物中，唯D-二聚體交聯碎片可反映血栓形成后的溶栓活性。只要機體血管內有活化的血栓形成及纖維溶解活動，D-二聚體就會升高。在生理狀態下，人體正常D-二聚體的水平一般在200μg/L以下，機體保持著凝血與纖溶動態平衡，以保證纖維蛋白及時形成和及時清除。心肌梗死、腦梗死、肺栓塞、靜脈血栓形成、手術、腫瘤、彌漫性血管內凝血、感染及組織壞死等均可導致D-二聚體升高。因此，理論上，D-二聚體的定量檢測可反映藥物的溶栓效果、也可用于診斷、篩選新形成的血栓。目前，用于D-二聚體的定量檢測方法中應用較多的主要為：酶聯免疫吸附法(ELISA)、乳膠顆粒凝集法(LATEX)、免疫過濾膠體金染色法、雙抗體RBC凝集法和放免法等。臨床最常用是：ELISA、LATEX和免疫過濾膠體金染色法，其中LATEX法測定速度快，但敏感度不如ELISA法；ELISA法敏感度高，但檢測時耗時較長。中國專利(201110051367.2)公開了一種D-二聚體時間分辨熒光免疫分析試劑盒及其制備方法，該試劑盒由下述成分組成：1)D-二聚體校準品；2)D-二聚體單克隆抗體包被的微孔板；3)銪元素標記的另一株D-二聚體單克隆抗體；4)洗滌液；5)增強液；6)分析緩沖液。該試劑盒采用銪元素標記抗體，銪元素屬于鑭系稀土金屬元素，價格比較昂貴，且銪熒光壽命1ms，在水中不穩定，需要額外添加增強劑才能獲得穩定的熒光。近年來，生物分析
得到了快速的發展，出現了很多重要的研究方向。微流控芯片分析技術是其中最活躍的一支，在科研和實際應用領域都獲得了廣泛的重視。微流控芯片作為一種新型的分析檢測平臺，具有高通量、集成化、便攜式、易操作、低成本等優點，已經在眾多領域中得到了廣泛的應用，尤其是在免疫分析領域已嶄露頭角。表面功能化的磁性微球作為固相載體，可以用來有效地捕獲核酸、蛋白分子、病毒顆粒甚至細胞，已經被廣泛地應用于各種生化指標的臨床診斷等領域。而微流控芯片系統具有快速、高效、集成化等特點，兩者相結合，將成為一種新型的高性能檢測方法，以解決當前檢測方法中存在的靈敏度低，檢測過程復雜，難以實現微量樣本檢測的問題，有望進一步推動臨床檢測儀器向便攜化和微型化發展。免疫磁珠的生物微流控芯片是將磁顆粒技術，免疫分析集成到微流控芯片上的一種分析檢測方法，目前這種綜合性的檢測方法的主要難點表現為：1)液體在芯片內部微流動的智能控制，目前常采用的方法是在芯片內部設置多個微泵和微閥，使得微流控體系變得更加復雜化；2)反應體系的混合不充分，導致反應不充分；3)集成化程度不高，導致非特異性背景高。
技術實現思路
為彌補現有技術的不足，本專利技術旨在提出一種D-二聚體定量檢測的磁微粒化學發光微流控芯片，檢驗人員只需經過簡單操作，即可在15分鐘內實現樣品中D-二聚體濃度的定量檢測。檢測結果靈敏度高，準確可靠，重復性好。本專利技術所述一種D-二聚體定量檢測的磁微粒化學發光微流控芯片，所述微流控芯片結構主要包括蓋片(1)和底片(11)；其中蓋片(1)上的加樣口(2)，樣本液流通道(6)，第一生物標記物存儲池(4)，微混合器(7)，過渡區(10)依次連接；底片(11)上的過濾器(12)，反應池(13)，清洗池(14)，檢測池(15)，溶液釋放通道(18)依次連接，底片(11)上的檢測池(15)通過溶液釋放通道(18)與清洗液存儲池(16)和發光液存儲池(17)連接；所述第一生物標記物存儲池(4)中存儲酶或發光劑標記的抗D-二聚體抗體溶液；所述清洗液存儲池(16)，發光液存儲池(17)中存儲清洗液、發光基底液；所述反應池(13)中包被磁顆粒標記的抗D-二聚體抗體；所述蓋片(1)和底片(11)用膠帶(20和22)密封組裝；所述第一生物標記物存儲池(4)、清洗液存儲池(16)、發光基底液存儲池(17)和檢測池(15)中存儲預封裝試劑；所述第一生物標記物存儲池(4)、清洗液存儲池(16)、發光基底液存儲池(17)為液體密封池，可通過外力擠壓而局部破裂，釋放液體；所述微流控芯片的過濾器(12)由一個具有固定形狀的腔體和濾血膜組成；所述過濾器濾血膜材料為玻璃纖維膜，聚酯纖維膜或CytoSep膜等。具體地，所述微流控芯片的第一生物標記物存儲池(4)、清洗液存儲池(16)和發光液存儲池(17)的體積為10～500μL，為液囊或腔體。優選地，微流控芯片的第一生物標記物存儲池(4)、清洗液存儲池(16)和發光液存儲池(17)的體積為10～300μL。具體地，所述微流控芯片的微混合器(7)是寬度為20～300μm，深度為10～100μm的蛇形，折線形或方波形結構。優選地，所述微混合器為寬150μm，深度為50μm的方形結構，在外部壓力作用下，可使樣本和試劑充分混合，提高反應效率。具體地，所述微流控芯片的反應池(13)為管狀通道或矩形的毛細管微通道，允許微液體流進或通過。具體地，所述微流控芯片的反應池(13)為管狀通道，直徑為0.5～10mm。優選地，所述微流控芯片的反應池(13)為管狀通道，直徑為5mm，進一步優選2mm或1mm。具體地，所述微流控芯片的反應池(13)為矩形通道，寬為0.1～5mm，深度為0.01～2mm，長為5～40mm。優選地，所述微流控芯片的反應池(13)為矩形通道，寬為0.3～2mm，深度為0.2～1mm，長為5～20mm。具體地，所述磁顆粒為本文檔來自技高網...

【技術保護點】
一種D?二聚體定量檢測的磁微粒化學發光微流控芯片，其特征在于，所述微流控芯片結構主要包括蓋片(1)和底片(11)；其中蓋片(1)上的加樣口(2)，樣本液流通道(6)，第一生物標記物存儲池(4)，微混合器(7)，過渡區(10)依次連接；底片(11)上的過濾器(12)，反應池(13)，清洗池(14)，檢測池(15)，溶液釋放通道(18)依次連接，底片(11)上的檢測池(15)通過溶液釋放通道(18)與清洗液存儲池(16)和發光液存儲池(17)連接；所述第一生物標記物存儲池(4)中存儲酶或發光劑標記的抗D?二聚體抗體溶液；所述清洗液存儲池(16)，發光液存儲池(17)中存儲清洗液、發光基底液；所述反應池(13)中包被磁顆粒標記的抗D?二聚體抗體；所述蓋片(1)和底片(11)用膠帶(20和22)密封組裝；所述第一生物標記物存儲池(4)、清洗液存儲池(16)、發光基底液存儲池(17)和檢測池(15)中存儲預封裝試劑；所述第一生物標記物存儲池(4)、清洗液存儲池(16)、發光基底液存儲池(17)為液體密封池，可通過外力擠壓而局部破裂，釋放液體；所述微流控芯片的過濾器(12)由一個具有固定形狀的腔體和濾血膜組成；所述過濾器濾血膜材料為玻璃纖維膜，聚酯纖維膜或CytoSep膜等。...

【技術特征摘要】
1.一種D-二聚體定量檢測的磁微粒化學發光微流控芯片，其特征在于，所述微流控芯片
結構主要包括蓋片(1)和底片(11)；其中蓋片(1)上的加樣口(2)，樣本液流通道(6)，
第一生物標記物存儲池(4)，微混合器(7)，過渡區(10)依次連接；底片(11)上的過濾
器(12)，反應池(13)，清洗池(14)，檢測池(15)，溶液釋放通道(18)依次連接，底片
(11)上的檢測池(15)通過溶液釋放通道(18)與清洗液存儲池(16)和發光液存儲池(17)
連接；
所述第一生物標記物存儲池(4)中存儲酶或發光劑標記的抗D-二聚體抗體溶液；所述
清洗液存儲池(16)，發光液存儲池(17)中存儲清洗液、發光基底液；所述反應池(13)中
包被磁顆粒標記的抗D-二聚體抗體；所述蓋片(1)和底片(11)用膠帶(20和22)密封組
裝；所述第一生物標記物存儲池(4)、清洗液存儲池(16)、發光基底液存儲池(17)和檢測
池(15)中存儲預封裝試劑；
所述第一生物標記物存儲池(4)、清洗液存儲池(16)、發光基底液存儲池(17)為液體
密封池，可通過外力擠壓而局部破裂，釋放液體；所述微流控芯片的過濾器(12)由一個具
有固定形狀的腔體和濾血膜組成；所述過濾器濾血膜材料為玻璃纖維膜，聚酯纖維膜或
CytoSep膜等。
2.如權利要求1所述微流控芯片，其特征在于，所述微流控芯片測試流程如下：
步驟1)從加樣口(2)加入樣本，蓋上血液蓋，將微流控芯片放入配套儀器中，從第一
生物標記物存儲池(4)釋放酶或發光劑標記的抗D-二聚體抗體后，樣本和酶或發光劑標記
的抗D-二聚體抗體進入微混器(7)中混合均勻且發生化學反應，形成一種免疫復合物通過
過渡區(10)，然后流入底片過濾器(12)中；
步驟2)樣本經過濾器后，到達反應池(13)，復溶包被在該區域的磁顆粒標記的抗D-

【專利技術屬性】
技術研發人員：范玉霞，李泉，
申請(專利權)人：深圳華邁興微醫療科技有限公司，
類型：發明
國別省市：廣東;44