本發(fā)明專利技術(shù)提供一種研究阿片類藥物經(jīng)關(guān)節(jié)周圍局部注射后發(fā)揮鎮(zhèn)痛作用機(jī)制的動(dòng)物模型構(gòu)建方法。本發(fā)明專利技術(shù)采用單碘醋酸鈉誘導(dǎo)大鼠踝關(guān)節(jié)疼痛癥狀，聯(lián)合關(guān)節(jié)周圍阿片類藥物給藥技術(shù)，可對(duì)阿片類藥物局部注射的鎮(zhèn)痛作用機(jī)制進(jìn)行動(dòng)物疼痛行為學(xué)和分子生物學(xué)層面的深入研究。本發(fā)明專利技術(shù)動(dòng)物模型的建立，將為阿片類藥物對(duì)關(guān)節(jié)炎癥疼痛治療作用的課題研究，尤其是探究局部用藥對(duì)關(guān)節(jié)炎癥的抗炎鎮(zhèn)痛作用機(jī)制，提供一種有效的研究手段。該技術(shù)基于與人類關(guān)節(jié)炎癥疼痛高度近似的大鼠關(guān)節(jié)炎癥疼痛模型和與臨床關(guān)節(jié)周圍注射鎮(zhèn)痛方式高度近似的給藥方式，進(jìn)行全面的疼痛相關(guān)行為學(xué)評(píng)估、痛閾變化測(cè)量及生物化學(xué)分析。該模型構(gòu)建方法簡(jiǎn)便易行，設(shè)備技術(shù)要求低，成功率高。
【技術(shù)實(shí)現(xiàn)步驟摘要】
本專利技術(shù)涉及一種用于研究阿片類藥物外周給藥鎮(zhèn)痛作用機(jī)制的大鼠關(guān)節(jié)疼痛和局部注射動(dòng)物模型的構(gòu)建方法，屬于醫(yī)學(xué)動(dòng)物模型研究領(lǐng)域。
技術(shù)介紹
四肢關(guān)節(jié)炎癥疼痛是臨床常見癥狀，病因復(fù)雜，幾乎覆蓋全年齡段各類人群，在退變性骨關(guān)節(jié)疾病高發(fā)的中老年患者群體中發(fā)病率高，可導(dǎo)致嚴(yán)重運(yùn)動(dòng)功能障礙，是導(dǎo)致老年致殘、失去自主生活能力的重要原因。目前臨床無(wú)特效治療手段，對(duì)疼痛嚴(yán)重患者需行人工關(guān)節(jié)置換手術(shù)治療，費(fèi)用高且損傷大，術(shù)中術(shù)后危及生命的并發(fā)癥多。但是，患者如疼痛控制良好，則一般不需手術(shù)治療。因此，開發(fā)適合長(zhǎng)期應(yīng)用的關(guān)節(jié)疼痛鎮(zhèn)痛方案，是骨關(guān)節(jié)外科臨床重點(diǎn)研究方向。現(xiàn)今臨床上主要應(yīng)用的鎮(zhèn)痛方法為口服非甾體類抗炎藥或阿片類藥物。其中非甾體類抗炎藥長(zhǎng)期應(yīng)用后患者不良反應(yīng)發(fā)生率高，包括危及生命的并發(fā)癥如嚴(yán)重胃腸道潰瘍、心血管疾病、凝血功能障礙等。口服阿片類藥物雖然相對(duì)安全，但患者嚴(yán)重惡心、嘔吐及便秘發(fā)生率高，一般無(wú)法耐受。近年臨床研究發(fā)現(xiàn)，嗎啡等阿片類藥物局部注射可能提供良好的關(guān)節(jié)鎮(zhèn)痛作用（參見文獻(xiàn)：GarciaJB,BarbosaNetoJO,VasconcelosJW,etal.Analgesicefficacyoftheintra-articularadministrationofhighdosesofmorphineinpatientsundergoingtotalkneearthroplasty.RevBrasAnestesiol.2010;60(1):1-12.），局部注射可減少全身不良反應(yīng)，能夠避免口服或注射非甾體類藥物可能導(dǎo)致的消化系統(tǒng)和心血管系統(tǒng)并發(fā)癥，適合反復(fù)長(zhǎng)期應(yīng)用。局部麻醉藥物或激素類藥物外周注射鎮(zhèn)痛效果亦較好，但與阿片類藥物相比，局部麻醉藥物和激素類藥物存在明顯的軟骨細(xì)胞毒性及肌肉骨骼干細(xì)胞毒性問題，并不適合反復(fù)或長(zhǎng)期應(yīng)用（參見文獻(xiàn)：GungorI,YilmazA,OzturkAM,etal.Bupivacaineandlevobupivacaineinduceapoptosisinratchondrocytecellculturesatultra-lowdoses.EurJOrthopSurgTraumatol.2014;24(3):291-295.）。阿片類藥物外周注射給藥有效且安全性高（參見文獻(xiàn)：FicklschererA,KreuzPC,SieversB,etal.Fentanylislesstoxiconadulthumanmesenchymalstemcellscomparedtoropivacainewhenusedintraarticularly.Acontrolledinvitrostudy.ConnectTissueRes.2013;54(6):403-407.），但是，經(jīng)關(guān)節(jié)周圍局部注射的阿片類藥物，體內(nèi)發(fā)揮作用機(jī)制不同于口服或靜脈等全身給藥方式，全身給藥時(shí)主要通過激活中樞神經(jīng)系統(tǒng)內(nèi)阿片類受體產(chǎn)生鎮(zhèn)痛作用。由于關(guān)節(jié)周圍存在大量的外周阿片類受體，局部注射阿片類藥物后，其產(chǎn)生鎮(zhèn)痛作用的途徑將發(fā)生變化。因此，經(jīng)關(guān)節(jié)周圍局部注射的阿片類藥物，通過何種機(jī)制發(fā)揮鎮(zhèn)痛作用、如何決定最佳注射劑量、藥物配伍和應(yīng)用頻次，尚缺少深入有效的基礎(chǔ)研究，尚未建立起專用的在體動(dòng)物模型進(jìn)行全面科學(xué)的臨床前研究。單碘醋酸鈉生理鹽水注射液可用于建立大鼠等膝關(guān)節(jié)骨性關(guān)節(jié)炎動(dòng)物模型，可良好的模擬臨床骨性關(guān)節(jié)炎癥狀和病理表現(xiàn)（參見文獻(xiàn)：KimJK,KimTH,ParkSW,etal.Protectiveeffectsofhumanplacentaextractoncartilagedegradationinexperimentalosteoarthritis.BiolPharmBull.2010;33(6):1004-10.）。但在造模過程中因?qū)嶒?yàn)動(dòng)物小，膝關(guān)節(jié)給藥困難，實(shí)際應(yīng)用的失敗率較高。本專利技術(shù)改進(jìn)傳統(tǒng)注射部位，選擇踝關(guān)節(jié)注射，使注射操作簡(jiǎn)便易行，同時(shí)保證在動(dòng)物模型中良好復(fù)制臨床關(guān)節(jié)炎癥的疼痛癥狀，尚未有相關(guān)報(bào)道。此外，本專利技術(shù)所選擇關(guān)節(jié)周圍鎮(zhèn)痛藥物注射部位給藥方便，重復(fù)性良好，尚無(wú)報(bào)道上述實(shí)驗(yàn)技術(shù)在阿片類藥物外周鎮(zhèn)痛作用機(jī)制研究中的應(yīng)用。綜上，建立起真實(shí)反應(yīng)臨床上阿片類藥物關(guān)節(jié)周圍注射治療關(guān)節(jié)炎癥疼痛的在體動(dòng)物模型，對(duì)深入研究阿片類藥物在關(guān)節(jié)炎癥疼痛治療中的作用機(jī)制有重要意義，將加快研究進(jìn)程，明確阿片類藥物局部應(yīng)用在臨床上發(fā)揮關(guān)節(jié)鎮(zhèn)痛作用的潛在機(jī)制及鎮(zhèn)痛療效。本專利技術(shù)制備的關(guān)節(jié)炎癥疼痛模型簡(jiǎn)便易行，重復(fù)性及穩(wěn)定性良好，為臨床開發(fā)適合長(zhǎng)期應(yīng)用且無(wú)嚴(yán)重不良反應(yīng)的關(guān)節(jié)鎮(zhèn)痛治療方法提供條件。隨著相關(guān)技術(shù)的不斷更新和發(fā)展，研究者對(duì)阿片類藥物局部應(yīng)用的認(rèn)識(shí)和理解將愈加深入和透徹，將更好改進(jìn)當(dāng)前用藥方案，造福患者和社會(huì)。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路
本專利技術(shù)的目的在于提供一種簡(jiǎn)便易行、對(duì)技術(shù)設(shè)備要求低而制備成功率高、能夠真實(shí)模擬臨床阿片類藥物局部注射后治療關(guān)節(jié)炎癥疼痛情況的動(dòng)物模型的構(gòu)建方法。為了實(shí)現(xiàn)上述目的，本專利技術(shù)提供了一種用于研究阿片類藥物外周給藥鎮(zhèn)痛作用機(jī)制的大鼠關(guān)節(jié)疼痛和局部注射動(dòng)物模型的構(gòu)建方法，包括：（1）單碘醋酸鈉踝關(guān)節(jié)注射誘導(dǎo)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物關(guān)節(jié)炎癥疼痛癥狀；（2）實(shí)驗(yàn)動(dòng)物關(guān)節(jié)周圍阿片類藥物注射。其中，步驟（1）中，采用雄性大鼠，體重質(zhì)量200±20克，麻醉，取單碘醋酸鈉生理鹽水溶液，在實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組大鼠后足墊部向踝關(guān)節(jié)方向注射，劑量為60μL/只，即可制備大鼠關(guān)節(jié)疼痛模型。所述單碘醋酸鈉生理鹽水溶液中，單碘醋酸鈉濃度為60mg/mL，每1ml生理鹽水溶液中含單碘醋酸鈉60mg，經(jīng)足后墊行踝關(guān)節(jié)腔內(nèi)注射，用于誘導(dǎo)大鼠關(guān)節(jié)疼痛癥狀。所述雄性大鼠為雄性Wistar大鼠或Sprague-Dawley大鼠。步驟（2）中，實(shí)驗(yàn)組關(guān)節(jié)周圍注射的藥物為鹽酸嗎啡注射液（5mg/kg），或鹽酸曲馬多注射液，或其它注射用阿片類藥物注射液，對(duì)照組關(guān)節(jié)周圍注射安慰劑為與實(shí)驗(yàn)組等體積生理鹽水。注射部位為大鼠膝關(guān)節(jié)后外側(cè)，腓骨小頭下方約5mm處，局部解剖位置在脛,腓骨間隙中，深度應(yīng)達(dá)肌筋膜層。對(duì)如上注射了阿片類藥物的動(dòng)物疼痛癥狀行為學(xué)、血清學(xué)及分子生物學(xué)相關(guān)指標(biāo)進(jìn)行檢測(cè)。在動(dòng)物模型制備成功后4小時(shí)，完成行為學(xué)評(píng)估和痛閾測(cè)量后，對(duì)實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組動(dòng)物作靜脈采血后處死，對(duì)動(dòng)物血清學(xué)相關(guān)炎癥指標(biāo)進(jìn)行鑒定。行為學(xué)評(píng)估內(nèi)容：?jiǎn)蔚獯姿徕c生理鹽水溶液注射后24小時(shí)，定性觀察大鼠是否出現(xiàn)三足跛行和踝關(guān)節(jié)紅腫癥狀，確定關(guān)節(jié)炎癥疼痛模型造模成功。確定造模成功后，行實(shí)驗(yàn)組鹽酸嗎啡注射液和對(duì)照組生理鹽水注射。注射后4小時(shí)開始本文檔來(lái)自技高網(wǎng)...
【技術(shù)保護(hù)點(diǎn)】
一種用于研究阿片類藥物外周給藥鎮(zhèn)痛作用機(jī)制的大鼠關(guān)節(jié)疼痛和局部注射動(dòng)物模型，其特征在于，通過如下方法構(gòu)建：（1）單碘醋酸鈉踝關(guān)節(jié)注射誘導(dǎo)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物關(guān)節(jié)炎癥疼痛癥狀；（2）實(shí)驗(yàn)動(dòng)物關(guān)節(jié)周圍阿片類藥物注射。
【技術(shù)特征摘要】
1.一種用于研究阿片類藥物外周給藥鎮(zhèn)痛作用機(jī)制的大鼠關(guān)節(jié)疼痛和局部注射動(dòng)物
模型，其特征在于，通過如下方法構(gòu)建：
（1）單碘醋酸鈉踝關(guān)節(jié)注射誘導(dǎo)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物關(guān)節(jié)炎癥疼痛癥狀；
（2）實(shí)驗(yàn)動(dòng)物關(guān)節(jié)周圍阿片類藥物注射。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種用于研究阿片類藥物外周給藥鎮(zhèn)痛作用機(jī)制的大鼠關(guān)節(jié)
疼痛和局部注射動(dòng)物模型，其特征在于：步驟（1）中踝關(guān)節(jié)注射藥物誘導(dǎo)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物關(guān)節(jié)炎癥
疼痛癥狀的方法為：采用雄性大鼠，體重質(zhì)量200±20克，取單碘醋酸鈉生理鹽水溶液，在實(shí)
驗(yàn)組和對(duì)照組大鼠后足墊部向踝關(guān)節(jié)方向注射，劑量為60μL/只。
3.根據(jù)權(quán)利要求1或2所述的一種用于研究阿片類藥物外周給藥鎮(zhèn)痛作用機(jī)制的大鼠
關(guān)節(jié)疼痛和局部注射動(dòng)物模型，其特征在于：所述的單碘醋酸鈉生理鹽水溶液濃度為60mg/
mL。
4.根據(jù)權(quán)利要求1-3任何一項(xiàng)所述的一種用于研究阿片類藥物外周給藥鎮(zhèn)痛作用機(jī)制
的大鼠關(guān)節(jié)疼痛和局部注射動(dòng)物模型，其特征在于，所述動(dòng)物為雄性Wistar大鼠或
Sprague-Dawley大鼠。
5.根據(jù)權(quán)利要求1-4任何一項(xiàng)所述的一種用于研究阿片類藥物外周給藥鎮(zhèn)痛作用機(jī)制
的大鼠關(guān)節(jié)疼痛和局部注射動(dòng)物模型，其特征在于，所述實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組包括但不僅限于實(shí)
驗(yàn)組（阿片類藥物注射）和對(duì)照組（生理鹽水注射），可根據(jù)具體研究要求增加設(shè)置空白對(duì)照
組及其它干預(yù)措施組等。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種用于研究阿片類藥物外周給藥鎮(zhèn)痛作用機(jī)制的大鼠關(guān)節(jié)
疼痛和局部注射動(dòng)物模型，其特征在于：步驟（2）中關(guān)節(jié)周圍注射藥物中，實(shí)驗(yàn)組動(dòng)物接受
注射的藥物為鹽酸嗎啡注射液，或鹽酸曲馬多注射液，或其它注射用阿片類藥物注射液，對(duì)
照組動(dòng)物接受注射的藥物是與實(shí)驗(yàn)組藥物等體積的生理鹽...
【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：張淼，張旭然，
申請(qǐng)(專利權(quán))人：張淼，張旭然，
類型：發(fā)明
國(guó)別省市：遼寧;21
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