用于口蹄疫疫苗的復乳型佐劑及其制備方法技術

本發明專利技術提供用于口蹄疫疫苗的復乳型佐劑及其制備方法，涉及藥物制劑領域。用于口蹄疫疫苗的復乳型佐劑，由下述質量份的組分組成：礦物油?50?65份，維生素E?10?35份，蓖麻油乙基氧化物3?5份，吐溫80?2?8份，正戊醇?2?6份，硬脂醇聚氧乙烯醚?1?4份和去離子水?1?5份。本發明專利技術還提供含有復乳型佐劑的口蹄疫疫苗及其制備方法。含有該佐劑的口蹄疫疫苗在穩定性、免疫增強效果較好的前提下，較短時間內就能夠完全被動物吸收，避免接種部位發炎，因此顯著減少了副反應。

【技術實現步驟摘要】

本專利技術涉及藥物制劑領域，具體涉及用于口蹄疫疫苗的復乳型佐劑及其制備方法。
技術介紹
動物疫苗中油性佐劑使用最為廣泛，且免疫增強效果最好。含油佐劑疫苗有三種劑型：油包水(W/O)型、水包油包水(W/O/W)型及水包油(O/W)型。目前，含油佐劑疫苗以W/O(油乳劑)最為普遍、增強免疫效果最佳，但是存在不能代謝的礦物油含量高、黏度大和毒副反應強等缺點。豬、犬、貓等動物對該劑型疫苗尤為敏感，這限制了W/O劑型在實際中的應用。而O/W劑型克服了W/O的缺點，但佐劑活性太弱，提高免疫效果的能力有限，不能滿足養殖業的需求。水包油包水(W/O/W)型疫苗中常用的佐劑為水包油包水(W/O/W)型復乳。現有技術中，水包油包水(W/O/W)型復乳包括ISA206佐劑(法國SEPPIC公司)以及含有大量礦物油的佐劑，含有這些佐劑的疫苗雖然免疫活性高，但是免疫后較長時間才能夠被動物完全吸收，接種部位易發炎，因此副反應較大。
技術實現思路
本專利技術的目的是提供用于口蹄疫疫苗的復乳型佐劑，含有該佐劑的口蹄疫疫苗在穩定性、免疫增強效果較好的前提下，較短時間內就能夠完全被動物吸收，避免接種部位發炎，因此顯著減少了副反應。本專利技術的另一目的是提供含有復乳型佐劑的口蹄疫疫苗，該疫苗穩定性、免疫效果較好，在較短時間內就能夠完全被動物吸收，避免接種部位發炎，因此顯著減少了副反應。本專利技術的再一目的是提供上述疫苗的制備方法，該方法簡單，高效，安全。本專利技術的目的采用如下技術方案實現：用于口蹄疫疫苗的復乳型佐劑，由下述質量份的組分組成：礦物油50-65份，維生素E10-35份，蓖麻油乙基氧化物3-5份，吐溫802-8份，正戊醇2-6份，硬脂醇聚氧乙烯醚1-4份，去離子水1-5份。在本專利技術中，所述蓖麻油乙基氧化物為EmulsogenEL360，所述硬脂醇聚氧乙烯醚為硬脂醇聚氧乙烯(21)醚。本專利技術還提供所述用于口蹄疫疫苗的復乳型佐劑的制備方法，將各組分混合，攪拌均勻，滅菌。本專利技術還提供含有所述復乳型佐劑的口蹄疫疫苗。在本專利技術中，所述疫苗由所述復乳型佐劑和口蹄疫抗原組成。優選的技術方案中，所述復乳型佐劑和口蹄疫抗原的質量比為1:05～1.5。本專利技術還提供所述口蹄疫疫苗的制備方法，將復乳型佐劑和口蹄疫抗原預熱至15～30℃，將復乳型佐劑與口蹄疫抗原混合，手搖或攪拌均勻，得到口蹄疫疫苗。本專利技術用于口蹄疫疫苗的復乳型佐劑，采用維生素E代替部分礦物油，選用低毒性表面活性劑，含有該佐劑的口蹄疫疫苗在穩定性、免疫增強效果較好的前提下，在較短時間內易被動物完全吸收，避免接種部位發炎，因此顯著降低了對動物的毒副作用。該復乳型佐劑與滅活抗原可以通過手搖、磁力攪拌或機器攪拌，制成穩定的W/O/W型疫苗。制備過程無需精密儀器，操作方便，制備成本低。本專利技術含有復乳型佐劑的口蹄疫疫苗，注射方便，制備方法簡單、高效、安全。具體實施方式實施例1制備復乳型佐劑本實施例中EmulsogenEL360購自科萊恩化工有限公司，產品編號CNP1004847；硬脂醇聚氧乙烯(21)醚購自上海美豪精細化工有限公司，產品編號PCN/4500713528。復乳型佐劑1配方：復乳型佐劑2配方：復乳型佐劑3配方：對照佐劑1配方：對照佐劑2配方(是公開號為CN104398478A、名稱“獸用藥物的復乳型載體及其應用”專利技術專利申請中實施例1的油相3)：制備復乳型佐劑1-3和對照佐劑1、2，具體方法如下：按照配方稱取各組分，混合，攪拌均勻，于115℃條件下采用高壓蒸氣滅菌20分鐘。佐劑于室溫避光保存。實施例2口蹄疫疫苗(W/O/W型)的制備豬口蹄疫滅活病毒液(O型，Mya98株)由金宇保靈生物藥品有限公司提供，滅活前每0.2毫升病毒液中病毒含量為107.17LD50。將復乳型佐劑1-3、對照佐劑1分別與豬口蹄疫滅活病毒液按照質量比1:1混合，通過手搖5-10分鐘或在250rpm條件下攪拌30分鐘，使各組分混合均勻，得到口蹄疫疫苗，口蹄疫疫苗的編號與佐劑的對應關系見表1。佐劑、病毒液在混合前最好預熱至15～30℃。按照公開號為CN104398478A、名稱“獸用藥物的復乳型載體及其應用”專利技術專利申請中實施例3方法，將對照佐劑2與豬口蹄疫滅活病毒液(O型，Mya98株)制成口蹄疫疫苗，編號為疫苗E。佐劑編號疫苗編號復乳型佐劑1口蹄疫疫苗A復乳型佐劑2口蹄疫疫苗B復乳型佐劑3口蹄疫疫苗C對照佐劑1口蹄疫疫苗D對照佐劑2口蹄疫疫苗E口蹄疫疫苗A-E均為W/O/W型，它們的物理性狀均一致，乳化液呈淡粉色，搖動時壁上略帶淡藍色劑型。采用如下方法檢測口蹄疫疫苗A-E：取一250mL燒杯，盛放100mL冷水，取一清潔吸管，吸取少許疫苗滴于冷水表面，各疫苗的液滴均呈云霧狀擴散。黏度：用1mL吸管(出口內徑1.2mm)吸取25℃左右的疫苗1.0mL,令其垂直自然流出，記錄流出0.4mL所需的時間，結果：各疫苗的流出時間均在8秒以內。粒徑：用移液槍精確取疫苗10μL于測試杯中，加入290μLPBS緩沖液充分混勻，確保乳化顆粒良好分散，將測試杯放入馬爾文納米粒度儀中測定，測定溫度設定為25℃，結果各疫苗的平均粒徑在130-190nm范圍內。離心穩定性：取疫苗10mL加入離心管中，在3000rpm/min離心15min，盛放各疫苗的管底均無析出水相。37℃穩定性：將疫苗置于37℃培養箱中，每天定時觀察，各疫苗放置14天后不破乳。口蹄疫疫苗A-E在4℃冰箱中放置12個月，均穩定。實施例3口蹄疫疫苗A、B、C的安全檢驗檢驗實施例2中口蹄疫疫苗A-E對小鼠和豬的安全性。(1)小鼠安全試驗取16-22g清潔級小鼠60只，隨機分成6組，其中一組不接種作為對照，另外五組分別免疫口蹄疫疫苗A、B、C、D或E，每只小鼠頸部皮下注射1/2頭份(0.5ml，這里的1/2頭份是相對于豬的)口蹄疫疫苗。疫苗接種后1周、2周、3周，各組隨機剖解小鼠3只，觀察注射部位吸收情況，結果見表2。通過表2可以看出：接種小鼠注射部位剖解，疫苗A、B、C組注射后2周3/3完全吸收；D組注射后2周僅有1/3完全吸收，注射后3周才3/3完全吸收；E組注射后2周僅有1/3完全吸收，注射后3周才3/3完全吸收。小鼠安全試驗結果說明：采用本專利技術佐劑1-3制備的口蹄疫疫苗，在注射后兩周就被全部試驗動物完全吸收，避免了由于疫苗長時間未完全吸收在接種部位引起的發炎，因此與對比佐劑1、2相比，顯著降低了副反應，安全性高。表2口蹄疫疫苗的安全檢驗結果(2)豬安全試驗取口蹄疫抗體陰性的30-35日齡健康仔豬各30頭，隨機分成6組，其中一組不接種作對照組，另外五組分別接種口蹄疫疫苗A、B、C、D或E，每頭肌肉注射4頭份(4ml)口蹄疫疫苗。接種后觀察14天，所有試驗豬觀察指標包括體溫、精神、食欲等局部、全身反應以及剖解注射部位吸收情況，結果見表3。通過表3可以看出：所有試驗豬精神、體溫、食欲等均未見異常。疫苗接種仔豬未見疫苗接種引起的異常反應。高劑量(4ml)接種豬注射部位剖解，口蹄疫疫苗A、B、C接種14天后所有豬只完全吸收，口蹄疫疫苗D接種14天后只有2/5豬只完全吸收，口蹄疫疫苗E接種14天后只有1/5豬只完全吸收。豬安全本文檔來自技高網...

【技術保護點】
用于口蹄疫疫苗的復乳型佐劑，由下述質量份的組分組成：礦物油???????????????50?65份，維生素E??????????????10?35份，蓖麻油乙基氧化物?????3?5份，吐溫80???????????????2?8份，正戊醇???????????????2?6份，硬脂醇聚氧乙烯醚?????1?4份，去離子水?????????????1?5份。

【技術特征摘要】
1.用于口蹄疫疫苗的復乳型佐劑，由下述質量份的組分組成：礦物油50-65份，維生素E10-35份，蓖麻油乙基氧化物3-5份，吐溫802-8份，正戊醇2-6份，硬脂醇聚氧乙烯醚1-4份，去離子水1-5份。2.根據權利要求1所述口蹄疫疫苗的復乳型佐劑，其特征在于所述蓖麻油乙基氧化物為EmulsogenEL360，所述硬脂醇聚氧乙烯醚為硬脂醇聚氧乙烯（21）醚。3.權利要求1或2所述用于口蹄疫疫苗的復乳型佐劑的制備方法，將各組分混...

【專利技術屬性】
技術研發人員：鄧碧華，盧宇，呂芳，張金秋，趙艷紅，侯繼波，
申請(專利權)人：江蘇省農業科學院，
類型：發明
國別省市：江蘇;32