水產品中微囊藻毒素的檢測方法技術

本發明專利技術涉及一種水產品中微囊藻毒素的檢測方法，所述檢測方法為直接分析離子源-質譜法，包括以下步驟：(1)水產品前處理制備待測樣品；(2)將待測樣品用直接分析離子源電離；(3)質譜檢測已離子化的待測樣品。該方法簡化了樣品前處理，將檢測時間從現有技術的數十個小時縮短到幾十分鐘，提高了檢測效率，能夠滿足實時、快速、原位的檢測要求，解決了現有檢測技術樣品前處理復雜，難以直接檢測水產品中微囊藻毒素的問題；且該方法可以對水產品中的多種微囊藻毒素同時進行定性和相對定量分析，滿足實際檢測需求，可應用于海關、農產品檢疫部門、水產養殖基地等。

【技術實現步驟摘要】

本專利技術涉及分析
，特別是涉及一種水產品中微囊藻毒素的檢測方法。
技術介紹
富營養化導致的藍藻水華頻發，引發各種衍生物污染，嚴重時造成重大生態災害事件。其中微囊藻毒素以其毒性大、分布廣和結構穩定的特點，成為水環境中常見的潛在危害物質，它主要由微囊藻產生，是一類具有多種異構體的環狀七肽物質。微囊藻毒素通過水產品(魚、蝦、蟹、螺、蚌)的直接攝食在生物體內累積，并通過食物鏈對人類健康產生危害。為了減少食用有毒水產品對人類健康造成的損害，水產品中微囊藻毒素的檢測方法受到關注。近年來，發展了多種基于生物化學的微囊藻毒素的檢測方法(如酶聯免疫吸附法、蛋白磷酸酶抑制法)或者基于復雜分析儀器的微囊藻毒素檢測方法(薄層色譜、毛細電泳、高效液相色譜、高效液相色譜-質譜聯用等)。這些方法都需要通過復雜的樣品處理過程，把水產品中的微囊藻毒素提取到液相中，再對液體樣品進行檢測。樣品處理步驟一般包括勻質化(切碎、超聲等)、冷凍干燥、萃取、離心等，需要花費較長的時間(一般在1天以上)，消耗大量的有毒有機試劑，這致使樣品測試的成本較高，對環境及實驗操作者的身體健康造成嚴重威脅，且不利于大量樣品的快速檢測。國內外已有一些關于利用酶聯免疫吸附法和液相色譜-質譜法檢測鮮魚中微囊藻毒素的方法，這些報道與本專利技術的樣品預處理方式、進樣方式、電離方法、檢測原理不同，且樣品需要經過復雜的預處理。([1]EllenP.Preece,BarryC.Moore,MarkE.Swanson,F.JoanHardy.IdentifyingbestmethodsforroutineELISAdetectionofmicrocystininseafood.EnvironMonitAssess187(2015):12.[2]GeorgeWilliamAtwokiNyakairuetc.Assessmentofcyanobacteriatoxinsinfreshwaterfish:AcasestudyofMurchisonBay(LakeVictoria)andLakeMburo,Uganda.Toxicon55(2010)939–946.)。另外，國內外也有利用電噴霧解吸電離源質譜分析檢測丙酮、藥品、爆炸物的文獻報道，這些報道與本專利技術的樣品預處理方式、進樣方式、離子源設置、檢測目的、檢測對象不同。(GuangmingXu,BoChen,GuozhuLiu,ShouzhuoYao.Rapidanalysisofacetoneinhumanplasmabyderivatizatingondesorptionelectrosprayionization.Analyst135(2010):2415-2419.)現有技術中未發現用實時快速的質譜檢測技術來檢測水產品中的微囊藻毒素，因此發展一種實時、快速的水產品中微囊藻毒素的質譜檢測技術極其重要。
技術實現思路
基于此，本專利技術的目的在于提供一種水產中微囊藻毒素的檢測方法，能夠實現水體中微囊藻毒素的實時、快速檢測。為實現上述專利技術目的，具體技術方案如下：一種水產品中微囊藻毒素的檢測方法，所述檢測方法為直接分析離子源-質譜法，包括以下步驟：(1)水產品前處理制備待測樣品；(2)將待測樣品用直接分析離子源電離；(3)質譜檢測已離子化的待測樣品。在其中一些實施例中，所述直接分析離子源選自電噴霧解吸電離源和介質阻擋放電離子源中的一種。在其中一些實施例中，所述直接分析離子源為電噴霧解吸電離源；步驟(1)所述水產品前處理的方法為：用活檢槍取得水產品的組織樣品，速凍，切薄片，制得待測樣品；步驟(2)的參數設置如下：電噴溶液管路與樣品臺的角度為10～90度，電噴溶液管路與樣品的距離為1～8mm，質譜儀大氣壓接口與樣品臺的角度為20～80度，質譜儀大氣壓接口與樣品的距離為2～10mm。在其中一些實施例中，步驟(1)所述速凍的溫度為-50～-20℃，速凍的時間為10～50min，薄片的厚度為10～25μm。在其中一些實施例中，步驟(1)所述速凍的溫度為-40～-30℃，速凍的時間為15～25min，薄片的厚度為15～20μm。在其中一些實施例中，步驟(2)的參數設置如下：電噴溶液管路與樣品臺的角度為45～55度，電噴溶液管路與樣品的距離為2～4mm，質譜儀大氣壓接口與樣品臺的角度為35～45度，質譜儀大氣壓接口與樣品的距離為4～5mm。在其中一些實施例中，步驟(2)所述電離的電噴溶液選自二甲基甲酰胺、乙腈、甲醇、乙酸、水中的兩種或多種，電噴溶液的流量為1～50μL/min，電噴溶液被施加的電壓為2～10kV。在其中一些實施例中，步驟(2)所述電離的電噴溶液為體積比為1：1的二甲基甲酰胺和乙腈的混合溶劑或者體積比為80：19：1的甲醇、水和乙酸的混合溶劑，電噴溶液的流量為5～10μL/min，電噴溶液被施加的電壓為4kV或5kV。在其中一些實施例中，步驟(2)所述電離的霧化氣為氮氣、氦氣或氙氣，霧化氣的線速度為100～400m/s。在其中一些實施例中，步驟(2)所述電離的霧化氣為氮氣，霧化氣的線速度為200～240m/s。本專利技術具有以下有益效果：本專利技術提供的快速檢測水產品中微囊藻毒素的新方法，利用活檢槍取得生物組織樣品，經過速凍和切片后，平鋪于樣品臺上，在解凍狀態下進行檢測，通過直接分析電離源和電噴溶液將微囊藻毒素萃取電離后，直接進入質譜儀進行定性和相對定量分析。該方法簡化了樣品前處理，將檢測時間從現有技術的數十個小時縮短到幾十分鐘，提高了檢測效率，能夠滿足實時、快速、原位的檢測要求，解決了現有檢測技術樣品前處理復雜，難以直接檢測水產品中微囊藻毒素的問題；且該方法可以對水產品中的多種微囊藻毒素同時進行檢測分析，滿足實際檢測需求，可應用于海關、農產品檢疫部門、水產養殖基地等。附圖說明圖1為直接分析離子源-質譜法檢測水產品中微囊藻毒素的流程示意圖；圖2為電噴霧解析電離源示意圖；圖3為實施例中的電噴霧解析電離源示意圖；圖4為含微囊藻毒素MC-RR和MC-LR的鯽魚樣品的質譜圖。具體實施方式以下將結合具體實施例對本專利技術做進一步說明。實施例1一、實驗儀器與材料按常規方法制備電噴霧解吸電離源，如圖2和圖3所示，主要部件包括：三維移動平臺、電噴液管路、霧化器、樣品臺等，電離源的結構和原理參考美國普渡大學的研究成果：R.GrahamCooks,ZhengOuyang,ZoltanTakats,JustinM.Wiseman.AmbientMassSpectrometry.Science311(2006):1566-1570。鯽魚樣品：樣品來源的魚塘水中微囊藻毒素MC-RR、MC-LR的濃度分別為12μg/L、6μg/L(按照GB/T20466-2006中高效液相色譜法檢測)。二、實驗方法(1)樣品前處理：利用活檢槍取得鯽魚組織樣品(10mmx1mmx1mm)，在-40℃條件下速凍25min，然后切薄片(厚度15μm)，制得待測樣品平鋪于樣品臺上待測。(2)儀器調試：調整電噴溶液管路與樣品臺的角度α為45度，電噴溶液管路與樣品的距離a為2mm，質譜儀大氣壓接口與樣品臺的角度β為35度，質譜儀大氣壓接口與樣品的本文檔來自技高網...

【技術保護點】
一種水產品中微囊藻毒素的檢測方法，其特征在于，所述檢測方法為直接分析離子源?質譜法，包括以下步驟：(1)水產品前處理制備待測樣品；(2)將待測樣品用直接分析離子源電離；(3)質譜檢測已離子化的待測樣品。

【技術特征摘要】
1.一種水產品中微囊藻毒素的檢測方法，其特征在于，所述檢測方法為直接分析離子源-質譜法，包括以下步驟：(1)水產品前處理制備待測樣品；(2)將待測樣品用直接分析離子源電離；(3)質譜檢測已離子化的待測樣品。2.根據權利要求1所述的水產品中微囊藻毒素的檢測方法，其特征在于，所述直接分析離子源選自電噴霧解吸電離源、介質阻擋放電離子源中的一種。3.根據權利要求2所述的水產品中微囊藻毒素的檢測方法，其特征在于，所述直接分析離子源為電噴霧解吸電離源；步驟(1)所述水產品前處理的方法為：用活檢槍取得水產品的組織樣品，速凍，切薄片，制得待測樣品；步驟(2)的參數設置如下：電噴溶液管路與樣品臺的角度為10～90度，電噴溶液管路與樣品的距離為1～8mm，質譜儀大氣壓接口與樣品臺的角度為20～80度，質譜儀大氣壓接口與樣品的距離為2～10mm。4.根據權利要求3所述的水產品中微囊藻毒素的檢測方法，其特征在于，步驟(1)所述速凍的溫度為-50～-20℃，速凍的時間為10～50min，薄片的厚度為10～25μm。5.根據權利要求4所述的水產品中微囊藻毒素的檢測方法，其特征在于，步驟(1)所述速凍的溫度為-40～-30℃，速凍的時間為15～25min，薄片的厚度為15～20μm。...

【專利技術屬性】
技術研發人員：朱梟強，黃正旭，高偉，李雪，李磊，周振，
申請(專利權)人：廣州禾信分析儀器有限公司，暨南大學，
類型：發明
國別省市：廣東;44