本發明專利技術屬于生物技術和醫學領域，具體涉及一種SET基因在制備治療和/或診斷胃癌產品中的應用。本發明專利技術證明SET在胃癌組織中頻繁高表達(80％)，SET表達升高與胃癌病人的侵襲表型及更差預后顯著相關(P<0.05)。低表達SET明顯抑制胃癌細胞的遷移和侵襲。并且SET通過PP2A/Akt信號通路促進腫瘤惡性轉化。此外，胃癌組織中SET的蛋白水平明顯高于癌旁組織。因此SET基因可作為診斷胃癌的特異標志基因，使胃癌診斷更加準確、快速。本發明專利技術SET基因為防治胃癌提供了新的治療靶點。
【技術實現步驟摘要】
本專利技術屬于生物技術和醫學領域，具體涉及一種SET基因在制備診斷和/或治療胃癌產品中的應用。
技術介紹
胃癌是東亞(包括中國、日本和韓國)和東歐最常見的癌癥之一。過去的半個世紀胃癌的發病率和死亡率已大有減少。在發達的國家，但它依然是死亡率最高的癌癥之一。在中國，大約三分之二的胃癌患者會發生轉移，>50％的患者有治療后復發風險。轉移和復發是患者死亡的重要原因。蛋白磷酸酶2A(proteinphosphatase2A,PP2A)是一種絲氨酸/蘇氨酸蛋白磷酸酶，在多種細胞過程中發揮著重要作用，包括蛋白合成，信號轉導，周期進程，凋亡，代謝，及應激反應等。作為腫瘤抑制因子，PP2A的活性喪失和多種腫瘤惡性轉移及耐藥密切相關。在腫瘤細胞中PP2A內源性抑制因子的過表達是PP2A活性喪失的重要原因。PP2A的內源性抑制因子包括CIP2A(cancerousinhibitorofproteinphosphatase2A)；蛋白磷酸酶2A抑制劑-1(inhibitorofproteinphosphatase2A-1,I1PP2A)；蛋白磷酸酶2A抑制劑-2(inhibitorofproteinphosphatase2A-2,I2PP2A)三種類型。三種PP2A抑制因子中，CIP2A研究得最為透徹，且其表達升高與多種腫瘤(包括結肺癌、乳腺癌、胃癌、白血病、結直腸癌等)的進展和轉移相關。I2PP2A又稱SET(patientSEtranslocation)，目前關于其基因和蛋白表達、功能調控的機制研究尚不豐富。
技術實現思路
本專利技術的首要目的在于克服現有技術的缺點和不足，提供一種SET基因在制備診斷胃癌產品中的應用。本專利技術的另一目的在于提供上述基因在制備治療胃癌產品中的應用。本專利技術的目的通過下述技術方案實現：一種SET基因在制備診斷胃癌產品中的應用，所述的診斷胃癌產品包括：通過RT-PCR、實時定量PCR、免疫檢測、原位雜交或基因芯片診斷胃癌的產品；所述的通過RT-PCR診斷胃癌的產品包括至少一對特異擴增SET基因的引物；所述的特異擴增SET基因的引物優選為引物SET-CDS-F和引物SET-CDS-R：引物SET-CDS-F：5’-ACTTCCCTAACAGCATGGCCCCT-3’；引物SET-CDS-R：5’-CTCCTTCATCCTCCTCTCCTTCC-3’。所述的通過實時定量PCR診斷胃癌的產品包括至少一對特異擴增SET基因的引物；所述的特異擴增SET基因的引物優選為引物SET-F和引物SET-R：引物SET-F：5’-AAATATAACAAACTCCGCCAACC-3’；引物SET-R：5’-CAGTGCCTCTTCATCTTCCTC-3’。所述的通過免疫檢測診斷胃癌的產品包括：與胃癌蛋白特異性結合的抗體，包括多克隆抗體和單克隆抗體；所述的通過原位雜交診斷胃癌的產品包括：與SET基因的核酸序列雜交的探針；所述的通過基因芯片診斷胃癌的產品包括：與SET基因的核酸序列雜交的探針；在本專利技術中，可以使用一系列本領域已知的方法來制備針對SET蛋白特異的抗體。例如，將提純的人SET基因產物或它的抗原片段注射入動物體內以產生多克隆抗體。同樣，表達人SET蛋白或它的抗原片段的細胞也可以用來對動物致免疫而產生抗體。根據本專利技術制備的抗體也可以是單克隆抗體，這些單克隆抗體可用雜交瘤技術制備。本專利技術的抗體包括可以阻抑SET功能的抗體，也可以是不影響人SET功能的抗體。每一類抗體都可以通過對人SET基因產物的片段或功能域致免疫而產生，而人SET基因產物及其片段可以用重組方法產生或用多肽合成儀進行合成。與非修飾形式的SET基因產物結合的抗體，可以利用在原核細胞例如E.coli中產生的基因產物來免疫動物而得到。與翻譯后修飾形式如糖基化或磷酸化SET蛋白或多肽結合的抗體，可以利用在真核細胞如酵母或昆蟲細胞中產生的基因產物來免疫動物而得到。在本專利技術中，所述探針可以是DNA、RNA、DNA-RNA嵌合體、PNA或其它衍生物。所述探針的長度沒有限制，只要完成特異性雜交、與目的核苷酸序列特異性結合，任何長度都可以。所述探針的長度可短至25、20、15、13或10個堿基長度。同樣，所述探針的長度可長至60、80、100、150、300個堿基對或更長，甚至整個基因。由于不同的探針長度對雜交效率、信號特異性有不同的影響，所述探針的長度通常至少是14個堿基對，最長一般不超過30個堿基對，與目的核苷酸序列互補的長度以15～25個堿基對最佳。所述探針自身互補序列最好少于4個堿基對，以免影響雜交效率。一種SET基因在制備治療胃癌產品中的應用，所述的治療胃癌產品包括：通過RNA干擾抑制SET基因表達的雙鏈核糖核酸、基于SET抗原蛋白的腫瘤疫苗和用于抑制SET蛋白活性的化學分子。所述的通過RNA干擾抑制SET基因表達的雙鏈核糖核酸優選為靶向SET基因的siRNA；所述的靶向SET基因的siRNA靶向序列為siRNA#1或siRNA#2；所述的siRNA#1的靶向序列為：siRNA#1：5’-AACCATCCACAAGTGTCTGCA-3’；所述的siRNA#2的序列為：siRNA#2：5’-AAGATGAAGAGGCACTGCATT-3’。在本專利技術中，所述RNA干擾(RNAinterference，RNAi)是指在進化過程中高度保守的、由雙鏈RNA(double-strandedRNA，dsRNA)誘發的、同源mRNA高效特異性降解的現象。使用RNAi技術可以特異性剔除或關閉特定基因的表達，該技術已被廣泛用于探索基因功能和傳染性疾病及惡性腫瘤的基因治療領域。以細胞為基礎的RNAi篩選在功能基因學研究方面具有許多優勢，主要表現在大多數細胞類型都能使用RNAi方法，并且相對較容易下調或沉默任何目的基因的表達。本專利技術相對于現有技術具有如下的優點及效果：(1)本專利技術實驗證明SET在胃癌組織中頻繁高表達(81％)，SET表達升高與胃癌病人的侵襲表型及更差預后明顯相關(P<0.05)。低表達SET顯著抑制胃癌細胞的遷移和侵襲。并且通過調節PP2A/Akt信號通路促進胃癌惡性轉化。此外，胃癌組織中SET的蛋白水平明顯高于癌旁組織。因此SET基因可作為胃癌診斷或預后判斷標志物。(2)本專利技術SET基因為防治胃癌提供了新的治療靶點。附圖說明圖1為SET在MKN28、MGC803、BGC823、SGC7901四種胃癌細胞系及正常胃黏膜上皮細胞系(GES-1)中基因及蛋白表達圖。圖2為胃癌患者及正常胃組織中SET表達情況分析。其中：圖2A是免疫組化染色強度結果分析圖；圖2B為IHC檢測25例正常胃組織和102例胃癌組織中SET的表達水平分析圖。圖3為胃癌患者組織中SET中低表達及高表達總體生存時間比較。圖4是實施例4中增殖和侵襲實驗結果分析圖，NC：瞬轉表達NCshRNA的胃癌細胞；shSET：瞬轉SETshRNA的胃癌細胞。其中，圖4A為Westernblot檢測胃癌細胞中shRNA對SET的干擾效果；圖4B為熒光定量PCR檢測胃癌細胞中shRNA對SET的干擾效果；圖4C為NC組和shSET組顯微鏡下侵襲變化；圖4D為NC組和shSET組顯微鏡下遷移變化。具本文檔來自技高網...
【技術保護點】
一種靶向SET基因的siRNA在制備治療胃癌產品中的應用，其特征在于：所述的靶向SET基因的siRNA靶序列為siRNA#1或siRNA#2；所述的siRNA#1的序列為：siRNA#1：5’?AACCATCCACAAGTGTCTGCA?3’；所述的siRNA#2的序列為：siRNA#2：5’?AAGATGAAGAGGCACTGCATT?3’。
【技術特征摘要】
1.一種靶向SET基因的siRNA在制備治療胃癌產品中的應用，其特征在于：所述的靶向SET基因的siRNA靶序列為siRNA#1或siRNA#2；所述的siRNA#1的序列為...
【專利技術屬性】
技術研發人員：劉瑩，欽閃閃，季娟麗，張云飛，張亮，孫智婷，
申請(專利權)人：湖北醫藥學院，
類型：發明
國別省市：湖北;42
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