輔助檢測食品中是否存在轉(zhuǎn)基因蛋白質(zhì)的方法技術(shù)

本發(fā)明專利技術(shù)公開了一種輔助檢測食品中是否存在轉(zhuǎn)基因蛋白質(zhì)的方法，包括：提取總蛋白；將總蛋白質(zhì)注射到檢測裝置的加樣孔，封閉第一多孔板體上的孔洞，該檢測裝置包括：第一多孔板體；加樣裝置，其包括第二多孔板體、圓錐體和多條加樣通道；中空纖維聚丙烯膜管，其設(shè)置于第一多孔板體和第二多孔板體之間，內(nèi)壁上附著有與待檢測轉(zhuǎn)基因蛋白質(zhì)特異性結(jié)合的第一抗體；打開第一多孔板體上的孔洞，洗滌；再次封閉第一多孔板體上的孔洞，將第二抗體注射到檢測裝置的加樣孔；再次打開第一多孔板體上的孔洞，洗滌；檢測中空纖維聚丙烯膜上是否存在第二抗體的標(biāo)記，若存在標(biāo)記，則認(rèn)為該總蛋白中存在該轉(zhuǎn)基因蛋白，并判斷該原材料中存在轉(zhuǎn)基因成分。

【技術(shù)實(shí)現(xiàn)步驟摘要】

本專利技術(shù)涉及一種輔助檢測食品中是否存在轉(zhuǎn)基因蛋白質(zhì)的方法。
技術(shù)介紹
通過基因工程技術(shù)將一種或幾種外源性基因轉(zhuǎn)移到某種特定的生物體中，并使其有效地表達(dá)出相應(yīng)的產(chǎn)物(多肽或蛋白質(zhì))，此過程叫轉(zhuǎn)基因。以轉(zhuǎn)基因生物為原料加工生產(chǎn)的食品就是轉(zhuǎn)基因食品。根據(jù)轉(zhuǎn)基因食品來源的不同可分為植物性轉(zhuǎn)基因食品，動(dòng)物性轉(zhuǎn)基因食品和微生物性轉(zhuǎn)基因食品。轉(zhuǎn)基因食品有較多的優(yōu)點(diǎn)：可增加作物產(chǎn)量；可以降低生產(chǎn)成本；可增強(qiáng)作物抗蟲害、抗病毒等的能力；提高農(nóng)產(chǎn)品耐貯性。轉(zhuǎn)基因生物的安全評價(jià)是轉(zhuǎn)基因生物及其產(chǎn)品市場化和商品化的前提，在安全評價(jià)中轉(zhuǎn)基因成分的檢測是一項(xiàng)重要內(nèi)容，建立轉(zhuǎn)基因生物快速、簡便、準(zhǔn)確的檢測方法為安全評價(jià)和管理奠定基礎(chǔ)。針對轉(zhuǎn)基因植物及其產(chǎn)品中外源目的基因表達(dá)的特異性蛋白進(jìn)行定性和定量檢測，其結(jié)果相對更加精準(zhǔn)，可靠性也更好，但是Elisa和Western等目前的檢測蛋白的手段都比較繁瑣，出結(jié)果也較慢。提高食品中轉(zhuǎn)基因成分的檢出速度是目前急需解決的問題。而基因表達(dá)后最終產(chǎn)生的是蛋白質(zhì)，行駛該基因功能的產(chǎn)物也是蛋白質(zhì)，因此，檢測食品中是否存在轉(zhuǎn)基因的蛋白質(zhì)是比較可靠且可信的結(jié)果之一。申請?zhí)枺?01510005351.6的中國專利文件公開的裝置，雖然能夠用于食品中蛋白質(zhì)的快速檢測，但是存在一個(gè)樣品的多個(gè)平行實(shí)驗(yàn)之間結(jié)果差異較大，個(gè)別樣品結(jié)果不可靠的情況。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路
本專利技術(shù)的目的之一是提供一種輔助檢測食品中是否存在轉(zhuǎn)基因蛋白質(zhì)的方法，在蛋白質(zhì)水平上快速檢測食品中的轉(zhuǎn)基因成分；本專利技術(shù)的另一目的是提供一種輔助檢測食品中是否存在轉(zhuǎn)基因蛋白質(zhì)的方法的檢測裝置，該裝置能夠快速方便地結(jié)合特異性地蛋白，并且使用簡單，效率高。本專利技術(shù)提供的技術(shù)方案為：一種輔助檢測食品中是否存在轉(zhuǎn)基因蛋白質(zhì)的方法，包括：步驟一、提取原材料的總蛋白；步驟二、將步驟一得到的總蛋白質(zhì)注射到檢測裝置的加樣孔，使總蛋白質(zhì)通過所述檢測裝置，該檢測裝置包括：第一多孔板體，其水平設(shè)置；加樣裝置，其包括第二多孔板體、設(shè)置于所述第二多孔板體上并與其形成一容置空間的圓錐體和多條加樣通道，所述第二多孔板體與所述第一多孔板體平行設(shè)置，且位于所述第一多孔板體的下方，所述圓錐體的直徑由下到上逐漸減小且其自由端形成加樣孔，所述多條加樣通道與所述第二多孔板體上的孔洞一一對應(yīng)設(shè)置，且所述多條加樣通道的一端均與所述加樣孔連通，而所述多條加樣通道的另一端均與所述第二多孔板體上的孔洞一一對應(yīng)連通；中空纖維聚丙烯膜管，其設(shè)置于所述第一多孔板體和所述第二多孔板體之間，所述中空纖維聚丙烯膜管的內(nèi)壁上附著有與待檢測轉(zhuǎn)基因蛋白質(zhì)特異性結(jié)合的第一抗體，所述中空纖維聚丙烯膜管的上端固定在所述第二多孔板體的孔洞中，而其下端固定在所述第一多孔板體上的孔洞中；其中，所述中空纖維聚丙烯膜管的內(nèi)壁上設(shè)置有多處凸起和凹陷當(dāng)所述總蛋白通過所述檢測裝置時(shí)，封閉所述第一多孔板體上的孔洞，以使總蛋白的流動(dòng)僅發(fā)生在所述多根中空纖維聚丙烯膜的上端和所述中空纖維聚丙烯膜的膜孔之間，使該轉(zhuǎn)基因蛋白質(zhì)與所述第一抗體結(jié)合進(jìn)而附著到所述中空纖維聚丙烯膜上；之后進(jìn)行步驟三；步驟三，打開所述第一多孔板體上的孔洞，洗滌所述中空纖維聚丙烯膜的腔中的殘?jiān)恢筮M(jìn)行步驟四；步驟四，再次封閉所述第一多孔板體上的孔洞，將與所述轉(zhuǎn)基因蛋白質(zhì)特異性結(jié)合的且?guī)в袠?biāo)記的第二抗體注射到所述檢測裝置的加樣孔，使第二抗體通過所述檢測裝置；之后進(jìn)行步驟五；步驟五，再次打開所述第一多孔板體上的孔洞，洗滌所述中空纖維聚丙烯膜的腔中的殘?jiān)恢筮M(jìn)行步驟六；和步驟六，檢測所述中空纖維聚丙烯膜上是否存在所述第二抗體的標(biāo)記，若存在所述標(biāo)記，則認(rèn)為該總蛋白中存在該轉(zhuǎn)基因蛋白，并判斷該原材料中存在轉(zhuǎn)基因成分。優(yōu)選的是，所述的輔助檢測食品中是否存在轉(zhuǎn)基因蛋白質(zhì)的方法中，通過使用密封膜封閉和打開所述第一多孔板體上的孔洞。優(yōu)選的是，所述的輔助檢測食品中是否存在轉(zhuǎn)基因蛋白質(zhì)的方法中，所述標(biāo)記為辣根過氧化物酶，所述步驟六中，利用DAB檢測所述中空纖維聚丙烯膜上是否存在所述第二抗體的標(biāo)記，若將DAB加入到所述中空纖維聚丙烯膜上時(shí)產(chǎn)生棕色沉淀，則判斷所述中空纖維聚丙烯膜上存在所述標(biāo)記。優(yōu)選的是，所述的輔助檢測食品中是否存在轉(zhuǎn)基因蛋白質(zhì)的方法中，所述步驟二中，將步驟一得到的總蛋白質(zhì)吸取到一注射器中，之后通過將所述注射器插入到所述加樣孔中從而將該總蛋白注射到該檢測裝置中。優(yōu)選的是，所述的輔助檢測食品中是否存在轉(zhuǎn)基因蛋白質(zhì)的方法中，所述原材料包括玉米、水稻、大豆和小麥。優(yōu)選的是，所述的輔助檢測食品中是否存在轉(zhuǎn)基因蛋白質(zhì)的方法中，所述中空纖維聚丙烯膜管與所述第一多孔板體之間具有一夾角α，其中，70°≤α＜90°。優(yōu)選的是，所述的輔助檢測食品中是否存在轉(zhuǎn)基因蛋白質(zhì)的方法中，所述中空纖維聚丙烯膜管與所述第一多孔板體之間具有一夾角β，其中，70°≤β＜90°。優(yōu)選的是，所述的輔助檢測食品中是否存在轉(zhuǎn)基因蛋白質(zhì)的方法中，所述中空纖維聚丙烯膜管呈曲線形固定于所述第一多孔板體和所述第二多孔板體之間。優(yōu)選的是，所述的輔助檢測食品中是否存在轉(zhuǎn)基因蛋白質(zhì)的方法中，所述第一多孔板體和所述第二多孔板體均呈長方形，所述第一多孔板體和所述第二多孔板體的孔均各自排列在一條直線上。優(yōu)選的是，所述的輔助檢測食品中是否存在轉(zhuǎn)基因蛋白質(zhì)的方法中，所述第一多孔板體和所述第二多孔板體均呈圓形，所述第一多孔板體和所述第二多孔板體的孔均各自沿其圓周方向排列。本專利技術(shù)的有益效果：本專利技術(shù)提供的檢測裝置中，將轉(zhuǎn)基因蛋白質(zhì)的第一抗體附著在中空纖維聚丙烯膜上，從而通過使待檢測原材料的總蛋白流過該檢測裝置來檢測原材料中是否存在轉(zhuǎn)基因蛋白質(zhì)，并且通過注射器將蛋白質(zhì)液體加入到本專利技術(shù)的檢測裝置中，易于操作，本專利技術(shù)的裝置能夠有效快速地檢測是否存在轉(zhuǎn)基因蛋白。同時(shí)，本專利技術(shù)的加樣孔中設(shè)置有多條加樣通道，可加一次樣即可對一個(gè)樣品作出幾個(gè)平行實(shí)驗(yàn)，每個(gè)加樣孔的直徑均是相同的，且均與加樣孔連通，這樣流入每條中空纖維聚丙烯膜管中的樣品的量是一樣的，避免了一個(gè)樣品只進(jìn)行一個(gè)實(shí)驗(yàn)帶來的操作誤差。同時(shí)，也能夠一次加樣即可進(jìn)行一個(gè)樣品的多個(gè)平行實(shí)驗(yàn)，不需要多次操作，操作簡便，提高工作效率。使得檢測結(jié)果更加可靠可信。中空纖維聚丙烯膜的表面有凸起和凹陷，以增加其表面積，及其與總蛋白的接觸面積，同時(shí)，其在第一多孔板體和第二多孔板體之間的設(shè)置為傾斜的，且其呈曲線形，在有限的空間內(nèi)增加了長度，使其可能結(jié)合蛋白更多，這樣，需要的樣品蛋白質(zhì)的量能夠減少，即使少量總蛋白質(zhì)也能夠檢測。降低了對總蛋白質(zhì)量的需求。同時(shí)，本專利技術(shù)的裝置還使得廢液易于收集，不會(huì)對環(huán)境造成傷害。本專利技術(shù)的方法對于轉(zhuǎn)基因蛋白的檢測快速、準(zhǔn)確，效率高。附圖說明圖1為本專利技術(shù)所述的檢測裝置的第一多孔板體的孔洞封閉時(shí)的結(jié)構(gòu)示意圖；圖2為本專利技術(shù)所述的檢測裝置的第一多孔板體的孔洞打開時(shí)的結(jié)構(gòu)示意圖。具體實(shí)施方式下面結(jié)合附圖對本專利技術(shù)做進(jìn)一步的詳細(xì)說明，以令本領(lǐng)域技術(shù)人員參照說明書文字能夠據(jù)以實(shí)施。細(xì)胞核分離緩沖液：0.25M蔗糖，18mMPIPES(pH6.8)，5mMMgCl2，60mMKCl，15mMNaCl，1mMCaCl2，1.0％的TritonX-100，1mMPMSF(蛋白酶抑制劑現(xiàn)用現(xiàn)加)。新鮮配置并于4℃保存。細(xì)胞核裂解緩沖液：50m本文檔來自技高網(wǎng)...

【技術(shù)保護(hù)點(diǎn)】
一種輔助檢測食品中是否存在轉(zhuǎn)基因蛋白質(zhì)的方法，其特征在于，包括：步驟一、提取原材料的總蛋白；步驟二、將步驟一得到的總蛋白質(zhì)注射到檢測裝置的加樣孔，使總蛋白質(zhì)通過所述檢測裝置，該檢測裝置包括：第一多孔板體，其水平設(shè)置；加樣裝置，其包括第二多孔板體、設(shè)置于所述第二多孔板體上并與其形成一容置空間的圓錐體和多條加樣通道，所述第二多孔板體與所述第一多孔板體平行設(shè)置，且位于所述第一多孔板體的下方，所述圓錐體的直徑由下到上逐漸減小且其自由端形成加樣孔，所述多條加樣通道與所述第二多孔板體上的孔洞一一對應(yīng)設(shè)置，且所述多條加樣通道的一端均與所述加樣孔連通，而所述多條加樣通道的另一端均與所述第二多孔板體上的孔洞一一對應(yīng)連通；中空纖維聚丙烯膜管，其設(shè)置于所述第一多孔板體和所述第二多孔板體之間，所述中空纖維聚丙烯膜管的內(nèi)壁上附著有與待檢測轉(zhuǎn)基因蛋白質(zhì)特異性結(jié)合的第一抗體，所述中空纖維聚丙烯膜管的上端固定在所述第二多孔板體的孔洞中，而其下端固定在所述第一多孔板體上的孔洞中；其中，所述中空纖維聚丙烯膜管的內(nèi)壁上設(shè)置有多處凸起和凹陷當(dāng)所述總蛋白通過所述檢測裝置時(shí)，封閉所述第一多孔板體上的孔洞，以使總蛋白的流動(dòng)僅發(fā)生在所述多根中空纖維聚丙烯膜的上端和所述中空纖維聚丙烯膜的膜孔之間，使該轉(zhuǎn)基因蛋白質(zhì)與所述第一抗體結(jié)合進(jìn)而附著到所述中空纖維聚丙烯膜上；之后進(jìn)行步驟三；步驟三，打開所述第一多孔板體上的孔洞，洗滌所述中空纖維聚丙烯膜的腔中的殘?jiān)恢筮M(jìn)行步驟四；步驟四，再次封閉所述第一多孔板體上的孔洞，將與所述轉(zhuǎn)基因蛋白質(zhì)特異性結(jié)合的且?guī)в袠?biāo)記的第二抗體注射到所述檢測裝置的加樣孔，使第二抗體通過所述檢測裝置；之后進(jìn)行步驟五；步驟五，再次打開所述第一多孔板體上的孔洞，洗滌所述中空纖維聚丙烯膜的腔中的殘?jiān)恢筮M(jìn)行步驟六；和步驟六，檢測所述中空纖維聚丙烯膜上是否存在所述第二抗體的標(biāo)記，若存在所述標(biāo)記，則認(rèn)為該總蛋白中存在該轉(zhuǎn)基因蛋白，并判斷該原材料中存在轉(zhuǎn)基因成分。...

【技術(shù)特征摘要】
1.一種輔助檢測食品中是否存在轉(zhuǎn)基因蛋白質(zhì)的方法，其特征在于，包括：步驟一、提取原材料的總蛋白；步驟二、將步驟一得到的總蛋白質(zhì)注射到檢測裝置的加樣孔，使總蛋白質(zhì)通過所述檢測裝置，該檢測裝置包括：第一多孔板體，其水平設(shè)置；加樣裝置，其包括第二多孔板體、設(shè)置于所述第二多孔板體上并與其形成一容置空間的圓錐體和多條加樣通道，所述第二多孔板體與所述第一多孔板體平行設(shè)置，且位于所述第一多孔板體的下方，所述圓錐體的直徑由下到上逐漸減小且其自由端形成加樣孔，所述多條加樣通道與所述第二多孔板體上的孔洞一一對應(yīng)設(shè)置，且所述多條加樣通道的一端均與所述加樣孔連通，而所述多條加樣通道的另一端均與所述第二多孔板體上的孔洞一一對應(yīng)連通；中空纖維聚丙烯膜管，其設(shè)置于所述第一多孔板體和所述第二多孔板體之間，所述中空纖維聚丙烯膜管的內(nèi)壁上附著有與待檢測轉(zhuǎn)基因蛋白質(zhì)特異性結(jié)合的第一抗體，所述中空纖維聚丙烯膜管的上端固定在所述第二多孔板體的孔洞中，而其下端固定在所述第一多孔板體上的孔洞中；其中，所述中空纖維聚丙烯膜管的內(nèi)壁上設(shè)置有多處凸起和凹陷當(dāng)所述總蛋白通過所述檢測裝置時(shí)，封閉所述第一多孔板體上的孔洞，以使總蛋白的流動(dòng)僅發(fā)生在所述多根中空纖維聚丙烯膜的上端和所述中空纖維聚丙烯膜的膜孔之間，使該轉(zhuǎn)基因蛋白質(zhì)與所述第一抗體結(jié)合進(jìn)而附著到所述中空纖維聚丙烯膜上；之后進(jìn)行步驟三；步驟三，打開所述第一多孔板體上的孔洞，洗滌所述中空纖維聚丙烯膜的腔中的殘?jiān)恢筮M(jìn)行步驟四；步驟四，再次封閉所述第一多孔板體上的孔洞，將與所述轉(zhuǎn)基因蛋白質(zhì)特異性結(jié)合的且?guī)в袠?biāo)記的第二抗體注射到所述檢測裝置的加樣孔，使第二抗體通過所述檢測裝置；之后進(jìn)行步驟五；步驟五，再次打開所述第一多孔板體上的孔洞，洗滌所述中空纖維聚丙烯膜的腔中的殘?jiān)恢筮M(jìn)行步驟六；和步驟六，檢測所述中空纖維聚丙烯膜上是否存在所述第二抗體的標(biāo)記，若存在所述標(biāo)記，則認(rèn)為該總蛋白中存...

【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：黎志春，
申請(專利權(quán))人：黎志春，
類型：發(fā)明
國別省市：廣西;45