一種西羅莫司的高效液相色譜檢測方法技術

本發明專利技術提供了一種西羅莫司的高效液相色譜檢測方法，以無水乙腈為溶劑，并以乙腈和緩沖鹽溶液為流動相，可選地加入改性劑，可有效改善脯氨酰西羅莫司、西羅莫司互變異構體A、去甲基西羅莫司及西羅莫司主峰之間的分離。所述西羅莫司的高效液相色譜檢測方法操作簡便、專屬性好，樣品溶液穩定性好，可有效分離西羅莫司、互變異構體、同系物及其工藝副產物(如脯氨酰西羅莫司、去甲基西羅莫司)、開環降解產物(如斷雷帕霉素)等，檢出的雜質個數較多，各相關色譜峰(工藝副產物及降解產物等)之間分離良好，準確度高且重復性好，可有效克服現有技術中存在的缺陷，從而有效控制西羅莫司原料藥及其制劑的產品質量，亦可用于評估西羅莫司的生產工藝。

【技術實現步驟摘要】

本專利技術屬于藥物分析
，具體涉及一種西羅莫司的高效液相色譜檢測方法。
技術介紹
西羅莫司(sirolimus)又稱雷帕霉素(rapamycin)，是一種親脂性含氮36元大環內酯類免疫抑制劑。1975年，加拿大Ayerst實驗室的Vezina等人從太平洋Easler島土壤樣品中分離的吸水鏈霉菌(Streptomyeeshygroscopicus)發酵液中首次得到。1977年西羅莫司被發現具有免疫抑制作用，1989年開始把西羅莫司作為治療器官移植排斥反應的新藥進行使用。1999年10月惠氏制藥研制的西羅莫司口服溶液在美國首次上市，此后，1mg片劑也已在美上市。國內西羅莫司產品主要有西羅莫司原料藥、西羅莫司膠囊及西羅莫司口服溶液。目前，西羅莫司原料藥及其制劑的有關物質與含量測定的現有檢測技術主要是國家食品藥品監督管理局標準(企業注冊標準)，具體包括原料藥標準YBH09982005、YBH15302005、YBH02322008、YBH00972011和YBH01872012，膠囊標準YBH02472010，口服溶液標準YBH09992005、YBH14502005和YBH15312005。然而，各現有技術在重要參數質量控制上均存在顯著缺陷，例如：(1)流動相系統上，多項現有技術使用了甲醇，而西羅莫司在甲醇中存在結構轉化現象，不適合作為溶解樣品的溶劑或作為流動相的一部分。凡采用甲醇作為流動相組成的色譜系統，其供試品溶液西羅莫司主峰均存在和其前洗脫的雜質峰分離較差的現象，該現象也從側面證實了以甲醇作為溶解樣品的溶劑及作為流動相的一部分在有關物質控制上的局限性；(2)流動相組成均為有機溶劑-水混合物，流動相系統不調節pH，不利于開環降解產物如斷雷帕霉素等的控制，在此前提下采用等度洗脫方式，十分不利于弱極性強保留雜質的檢測；(3)在有關物質雜質的控制上，有2項現有技術提到已知雜質去甲基西羅莫司，1項現有技術提到去甲基西羅莫司和開環降解轉化物，然而，其結論存在明顯的錯誤，這是因為：在西羅莫司的檢測過程中，所述開環降解轉化物已被證實為斷雷帕霉素與西羅莫司同系物及西羅莫司同分異構體的混合物，所述已知雜質去甲基西羅莫司已被證實為脯氨酰西羅莫司。例如，中國專利申請CN105301159A披露了一種西羅莫司的高效液相色譜分析方法，其所采用的流動相為體積配比18：82～22：78的流動相A與流動相B的混合溶液，并且實施等度洗脫；其中，所述流動相A中的磷酸、庚烷磺酸鈉、水的質量配比為0.1:0.01:1，所述流動相B中甲醇與乙腈的體積配比為15：85；由此可見，該專利申請未能避免甲醇的使用，且沒有規避等度洗脫所帶來的技術問題。綜上所述，現有技術在針對西羅莫司原料藥及其制劑的有效可控的質量控制方面存在諸多缺陷與不足。因此，亟需提供一種全新的西羅莫司的分析方法或檢測方法，在保證各相關雜質與有效成分高效分離的基礎上，使其具有良好的專屬性、重復性與準確度，從而更好地實現對西羅莫司的質量控制。
技術實現思路
針對上述現有技術中存在的缺陷與不足，專利技術人旨在提供一種既具有高的分離度，又具有良好的專屬性、重復性與準確度的分析方法或檢測方法，用于西羅莫司原料藥及其各種制劑的質量控制。因此，本專利技術提供了一種西羅莫司的高效液相色譜檢測方法，包括以下步驟：將西羅莫司溶解于無水乙腈，制得西羅莫司樣品溶液；取5～50μL進樣至HPLC系統，該進樣量與色譜柱載樣量或檢測器響應相適應；流速為1.0～2.5mL·min-1，具體操作時，采用與所選擇的色譜柱尺寸相適應的流速；梯度洗脫，以277±2nm的檢測波長進行HPLC分析；其中，采用C18反相色譜柱，流動相由乙腈和緩沖鹽溶液組成；所述緩沖鹽溶液的pH為2.0～7.5，且所述緩沖鹽溶液中鹽的濃度為5～100mmol/L；其中，乙腈占流動相總體積的體積百分比濃度為50～100％。優選地，在上述西羅莫司的高效液相色譜檢測方法中，所述西羅莫司包括西羅莫司原料藥、西羅莫司片劑、西羅莫司膠囊或西羅莫司口服溶液。優選地，在上述西羅莫司的高效液相色譜檢測方法中，所述緩沖鹽溶液的pH為3.5～4.0。優選地，在上述西羅莫司的高效液相色譜檢測方法中，所述緩沖鹽溶液選自以下任一種體系：磷酸鹽緩沖體系、甲酸銨緩沖體系、乙酸銨緩沖體系、三氟乙酸緩沖體系。所述緩沖鹽溶液和質譜系統兼容，利于后續可實施的西羅莫司及其制劑中的雜質分析。進一步優選地，在上述西羅莫司的高效液相色譜檢測方法中，所述緩沖鹽溶液為甲酸銨緩沖體系。優選地，在上述西羅莫司的高效液相色譜檢測方法中，所述緩沖鹽溶液中鹽的濃度為20～50mmol/L。進一步優選地，在上述西羅莫司的高效液相色譜檢測方法中，所述流動相由緩沖鹽溶液、乙腈和改性劑組成。更進一步優選地，在上述西羅莫司的高效液相色譜檢測方法中，所述改性劑包括：甲基叔丁基醚和/或四氫呋喃。更進一步優選地，在上述西羅莫司的高效液相色譜檢測方法中，所述乙腈占流動相總體積的體積百分比濃度為50～99％，所述改性劑占流動相總體積的體積百分比濃度為1～5％。其中，所述改性劑的百分比濃度可根據西羅莫司的保留行為而做適當的調整。綜上所述，本專利技術所提供的西羅莫司的高效液相色譜檢測方法，以無水乙腈為西羅莫司原料藥及其制劑的溶劑，并以乙腈和緩沖鹽溶液為流動相，可選地加入改性劑，意外地改善了脯氨酰西羅莫司、西羅莫司互變異構體A、去甲基西羅莫司及西羅莫司主峰之間的分離；其中，加入改性劑的主要目的和作用是調節西羅莫司及其雜質與固定相之間的相互作用力，最終目的是提高西羅莫司及其雜質之間的分離度，增加定量測定的準確度；從而避免了甲醇作為溶解樣品的溶劑或作為流動相的一部分時，在有關物質控制上的局限性。本專利技術涉及的西羅莫司原料藥及其制劑有關物質及含量測定的檢測方法操作簡便、專屬性好，樣品溶液穩定性好，可有效分離西羅莫司、互變異構體A、同系物及其工藝副產物(如脯氨酰西羅莫司、去甲基西羅莫司)、開環降解產物(如斷雷帕霉素)等，檢出的雜質個數較多，各相關色譜峰(工藝副產物及開環降解產物等)之間分離良好，準確度高且重復性好，可有效克服現有技術中存在的缺陷，從而有效控制西羅莫司原料藥及其制劑的產品質量，亦可用于評估西羅莫司的生產工藝。附圖說明圖1～4依次為依據本專利技術實施例1所述的方法檢測企業A、企業B、企業C和企業D的西羅莫司原料藥所得到的典型液相色譜圖；圖5為依據本專利技術實施例2所述的方法檢測企業B的西羅莫司膠囊所得到的典型液相色譜圖；圖6為依據現有國家食品藥品監督管理局標準在甲醇-乙腈-水流動相體系中檢測企業A的西羅莫司原料藥所得到的典型液相色譜圖；圖7為依據現有技術在甲醇-水流動相體系中檢測企業A的西羅莫司原料藥所得到的典型液相色譜圖；圖8為依據現有技術在乙腈-水流動相體系中檢測斷雷帕霉素所得到的典型液相色譜圖；圖9為依據本專利技術實施例3所述的方法檢測企業A的西羅莫司原料藥所得到的典型液相色譜圖；圖10為依據本專利技術實施例4所述的方法檢測企業A的西羅莫司膠囊所得到的典型液相色譜圖；圖11為依據本專利技術實施例6所述的方法在磷酸鹽緩沖體系中檢測企業A的西羅莫司原料藥所得到的典型液相色譜圖；圖12為依據本專利技術實施例6所述的方法在乙酸銨緩沖體系中檢測企業A本文檔來自技高網...

【技術保護點】
一種西羅莫司的高效液相色譜檢測方法，其特征在于，包括以下步驟：將西羅莫司溶解于無水乙腈，制得西羅莫司樣品溶液；取5～50μL進樣至HPLC系統，流速為1.0～2.5mL·min?1，梯度洗脫，以277±2nm的檢測波長進行HPLC分析；其中，采用C18反相色譜柱，流動相由乙腈和緩沖鹽溶液組成；所述緩沖鹽溶液的pH為2.0～7.5，且所述緩沖鹽溶液中鹽的濃度為5～100mmol/L；其中，乙腈占流動相總體積的體積百分比濃度為50～100％。

【技術特征摘要】
1.一種西羅莫司的高效液相色譜檢測方法，其特征在于，包括以下步驟：將西羅莫司溶解于無水乙腈，制得西羅莫司樣品溶液；取5～50μL進樣至HPLC系統，流速為1.0～2.5mL·min-1，梯度洗脫，以277±2nm的檢測波長進行HPLC分析；其中，采用C18反相色譜柱，流動相由乙腈和緩沖鹽溶液組成；所述緩沖鹽溶液的pH為2.0～7.5，且所述緩沖鹽溶液中鹽的濃度為5～100mmol/L；其中，乙腈占流動相總體積的體積百分比濃度為50～100％。2.根據權利要求1所述的西羅莫司的高效液相色譜檢測方法，其特征在于，所述西羅莫司包括西羅莫司原料藥、西羅莫司片劑、西羅莫司膠囊或西羅莫司口服溶液。3.根據權利要求1所述的西羅莫司的高效液相色譜檢測方法，其特征在于，所述緩沖鹽溶液的pH為3.5～4.0。4.根據權利要求1所述的西羅莫司的高效液相色譜檢...

【專利技術屬性】
技術研發人員：趙敬丹，繆天瑤，秦峰，劉浩，
申請(專利權)人：上海市食品藥品檢驗所，
類型：發明
國別省市：上海;31