精氨基琥珀酸合成酶缺乏癥的MRNA療法制造技術

本發明專利技術除了其它方面以外提供了治療精氨基琥珀酸合成酶缺乏癥(ASD)的方法，所述方法包括以有效劑量和施用間隔給需要治療的受試者施用包含編碼精氨基琥珀酸合成酶(ASS1)的mRNA的組合物，使得ASD的至少一種癥狀或特征在強度、嚴重程度或頻率上降低或延緩發作。在一些實施例中，所述mRNA包封在脂質體內，所述脂質體包含一種或多種陽離子脂質、一種或多種非陽離子脂質、一種或多種基于膽固醇的脂質以及一種或多種PEG改性脂質。

【技術實現步驟摘要】
【國外來華專利技術】相關申請案本專利申請要求2013年10月22日提交的美國臨時申請No.61/894,294的優先權，其公開內容據此以引用方式并入。
技術介紹
精氨基琥珀酸合成酶缺乏癥(ASD)是一種常染色體隱性代謝遺傳性障礙，其特征在于精氨基琥珀酸合成酶(ASS1)的基因中發生突變，從而影響其結合到瓜氨酸、天冬氨酸鹽和其它分子的能力。ASS蛋白中的缺陷破壞尿素循環并阻止肝臟將多余的氮適當地處理成尿素。尿素循環中累積的氨和其它副產物(諸如瓜氨酸)是毒性的，并且當出現在生命的早期時，可導致諸如精神不振(嗜睡)、食欲不振、嘔吐、痙攣和意識喪失的癥狀。目前，對于這種疾病沒有治愈方法，并且護理標準是通過飲食管理，將含大量蛋白質的食物降至最小程度，以及精氨酸和乙酸苯酯的膳食補充劑。
技術實現思路
本專利技術除了其它方面以外提供了基于mRNA療法治療精氨基琥珀酸合成酶缺乏癥(ASD)的改進的方法和組合物。本專利技術涵蓋以下觀察結果：施用包封在脂質體內的編碼人ASS1蛋白的mRNA導致高效持久的體內蛋白生成以及臨床相關的疾病標志物血漿氨水平成功降低。在一個方面，本專利技術提供了治療ASD的方法，包括以有效劑量和施用間隔給需要治療的受試者施用包含編碼精氨基琥珀酸合成酶(ASS1)的mRNA的組合物，使得ASD的至少一種癥狀或特征在強度、嚴重程度或頻率上降低或延緩發作。在一些實施例中，mRNA包封在脂質體內。在另一方面，本專利技術提供了用于治療ASD的組合物，其包含以有效劑量包封在脂質體內的編碼ASS1的mRNA。在一些實施例中，合適的脂質體包含一種或多種陽離子脂質、一種或多種非陽離子脂質、一種或多種基于膽固醇的脂質以及一種或多種PEG改性脂質。在一些實施例中，一種或多種陽離子脂質選自C12-200、MC3、DLinDMA、DLinkC2DMA、cKK-E12、ICE(基于咪唑的)、HGT5000、HGT5001、DODAC、DDAB、DMRIE、DOSPA、DOGS、DODAP、DODMA和DMDMA、DODAC、DLenDMA、DMRIE、CLinDMA、CpLinDMA、DMOBA、DOcarbDAP、DLinDAP、DLincarbDAP、DLinCDAP、KLin-K-DMA、DLin-K-XTC2-DMA、HGT4003以及它們的組合。在一些實施例中，一種或多種陽離子脂質包括式I-c1-a的化合物：或其藥學上可接受的鹽，其中：每個R2獨立地為氫或C1-3烷基；每個q獨立地為2至6；每個R'獨立地為氫或C1-3烷基；并且每個RL獨立地為C8-12烷基。在一些實施例中，一種或多種陽離子脂質包括cKK-E12：在一些實施例中，適用于本專利技術的一種或多種非陽離子脂質選自DSPC(1,2-二硬脂酰基-sn-甘油-3-磷酰膽堿)、DPPC(1,2-二棕櫚酰基-sn-甘油-3-磷酰膽堿)、DOPE(1,2-二油烯基-sn-甘油-3-磷酰乙醇胺)、DOPC(1,2-二油烯基-sn-甘油-3-磷脂酰膽堿)、DPPE(1,2-二棕櫚酰基-sn-甘油-3-磷酰乙醇胺)、DMPE(1,2-二肉豆蔻酰基-sn-甘油-3-磷酰乙醇胺)、DOPG(,2-二油酰基-sn-甘油-3-磷酰-(1'-rac-甘油))以及它們的組合。在一些實施例中，一種或多種基于膽固醇的脂質選自膽固醇、PEG化膽固醇和DC-Chol(N,N-二甲基-N-乙基酰胺基膽固醇)、1,4-二(3-N-油烯基氨基-丙基)哌嗪。在一些實施例中，脂質體還包含一種或多種PEG改性脂質。在一些實施例中，一種或多種PEG改性脂質包含長度為至多5kDa的聚乙二醇鏈，該聚乙二醇鏈共價附接到具有C6-C20長度烷基鏈的脂質。在一些實施例中，PEG改性脂質是衍生化神經酰胺，諸如N-辛酰基-鞘氨醇-1-[琥珀酰基(甲氧基聚乙二醇)-2000]。在一些實施例中，PEG改性或PEG化脂質為PEG化膽固醇或二肉豆蔻酰基甘油(DMG)-PEG-2K。在一些實施例中，合適的脂質體包含選自以下的組合：cKK-E12、DOPE、膽固醇和DMG-PEG2K；C12-200、DOPE、膽固醇和DMG-PEG2K；HGT4003、DOPE、膽固醇和DMG-PEG2K；或ICE、DOPE、膽固醇和DMG-PEG2K。在一些實施例中，陽離子脂質(例如，cKK-E12、C12-200、ICE和/或HGT4003)占脂質體的約30-60摩爾％(例如，約30-55摩爾％、約30-50摩爾％、約30-45摩爾％、約30-40摩爾％、約35-50摩爾％、約35-45摩爾％或約35-40摩爾％)。在一些實施例中，陽離子脂質(例如，cKK-E12、C12-200、ICE和/或HGT4003)占脂質體的約30摩爾％、約35摩爾％、約40摩爾％、約45摩爾％、約50摩爾％、約55摩爾％或約60摩爾％)。在一些實施例中，陽離子脂質(例如，cKK-E12、C12-200、ICE和/或HGT4003)比非陽離子脂質(例如，DOPE)比基于膽固醇的脂質(例如，膽固醇)比PEG化脂質(例如，DMG-PEG2K)的比率可分別在約30-60:25-35:20-30:1-15之間。在一些實施例中，陽離子脂質(例如，cKK-E12、C12-200、ICE和/或HGT4003)比非陽離子脂質(例如，DOPE)比基于膽固醇的脂質(例如，膽固醇)比PEG化脂質(例如，DMG-PEG2K)的比率分別為大約40:30:20:10。在一些實施例中，陽離子脂質(例如，cKK-E12、C12-200、ICE和/或HGT4003)比非陽離子脂質(例如，DOPE)比基于膽固醇的脂質(例如，膽固醇)比PEG化脂質(例如，DMG-PEG2K)的比率分別為大約40:30:25:5。在一些實施例中，陽離子脂質(例如，cKK-E12、C12-200、ICE和/或HGT4003)比非陽離子脂質(例如，DOPE)比基于膽固醇的脂質(例如，膽固醇)比PEG化脂質(例如，DMG-PEG2K)的比率分別為大約40:32:25:3。在一些實施例中，陽離子脂質(例如，cKK-E12、C12-200、ICE和/或HGT4003)比非陽離子脂質(例如，DOPE)比基于膽固醇的脂質(例如，膽固醇)比PEG化脂質(例如，DMG-PEG2K)的比率分別為大約50:25:20:5。在一些實施例中，通過脂質體顆粒的最大直徑的長度確定脂質體的尺寸。在一些實施例中，合適的脂質體的尺寸小于約500nm、400nm、300nm、250nm、200nm、150nm、100nm、75nm或50nm。在一些實施例中，合適的脂質體的尺寸小于約100nm、90nm、80nm、70nm或60nm。在一些實施例中，以約0.1–5.0mg/kg體重范圍內的劑量施用mRNA，例如約0.1–4.5、0.1–4.0、0.1–3.5、0.1–3.0、0.1–2.5、0.1–2.0、0.1–1.5、0.1–1.0、0.1-0.5、0.1-0.3、0.3–5.0、0.3-4.5、0.3–4.0、0.3–3.5、0.3–3.0、0.3–2.5、0.3–2.0、0.3–1.5、0.3–1.0、0.3-0.5、0.5–5.0、0.5-4.5、0.5–4.0、0.本文檔來自技高網...

【技術保護點】
一種治療精氨基琥珀酸合成酶缺乏癥(ASD)的方法，所述方法包括以有效劑量和施用間隔給需要治療的受試者施用包含編碼精氨基琥珀酸合成酶(ASS1)的mRNA的組合物，使得ASD的至少一種癥狀或特征在強度、嚴重程度或頻率上降低或延緩發作。

【技術特征摘要】
【國外來華專利技術】2013.10.22 US 61/894,2941.一種治療精氨基琥珀酸合成酶缺乏癥(ASD)的方法，所述方法包括以有效劑量和施用間隔給需要治療的受試者施用包含編碼精氨基琥珀酸合成酶(ASS1)的mRNA的組合物，使得ASD的至少一種癥狀或特征在強度、嚴重程度或頻率上降低或延緩發作。2.根據權利要求1所述的方法，其中所述mRNA包封在脂質體內。3.根據權利要求2所述的方法，其中所述脂質體包含一種或多種陽離子脂質、一種或多種非陽離子脂質、一種或多種基于膽固醇的脂質以及一種或多種PEG改性脂質。4.根據權利要求3所述的方法，其中所述一種或多種陽離子脂質包括選自C12-200、MC3、DLinDMA、DLinkC2DMA、cKK-E12、ICE(基于咪唑的)、HGT5000、HGT5001、DODAC、DDAB、DMRIE、DOSPA、DOGS、DODAP、DODMA和DMDMA、DODAC、DLenDMA、DMRIE、CLinDMA、CpLinDMA、DMOBA、DOcarbDAP、DLinDAP、DLincarbDAP、DLinCDAP、KLin-K-DMA、DLin-K-XTC2-DMA、HGT4003以及它們的組合的陽離子脂質。5.根據權利要求4所述的方法，其中所述一種或多種陽離子脂質包括cKK-E12：6.根據權利要求3-5中任一項所述的方法，其中所述一種或多種非陽離子脂質選自DSPC(1,2-二硬脂酰基-sn-甘油-3-磷酰膽堿)、DPPC(1,2-二棕櫚酰基-sn-甘油-3-磷酰膽堿)、DOPE(1,2-二油烯基-sn-甘油-3-磷酰乙醇胺)、DOPC(1,2-二油烯基-sn-甘油-3-磷脂酰膽堿)、DPPE(1,2-二棕櫚酰基-sn-甘油-3-磷酰乙醇胺)、DMPE(1,2-二肉豆蔻酰基-sn-甘油-3-磷酰乙醇胺)、DOPG(,2-二油酰基-sn-甘油-3-磷酰-(1'-rac-甘油))。7.根據權利要求3-6中任一項所述的方法，其中所述一種或多種基于膽固醇的脂質為膽固醇和/或PEG化膽固醇。8.根據權利要求3-7中任一項所述的方法，其中所述一種或多種PEG改性脂質包含長度為至多5kDa的聚乙二醇鏈，所述聚乙二醇鏈共價附接到具有C6-C20長度烷基鏈的脂質。9.根據前述權利要求中任一項所述的方法，其中所述陽離子脂質占所述脂質體的約30-50重量％。10.根據權利要求9所述的方法，其中所述陽離子脂質占所述脂質體的約40重量％。11.根據權利要求3-10中任一項所述的方法，其中陽離子脂質:非陽離子脂質:膽固醇:PEG化脂質的摩爾比為大約40:30:20:10。12.根據權利要求3-10中任一項所述的方法，其中陽離子脂質:非陽離子脂質:膽固醇:PEG化脂質的重量比為大約40:30:25:5。13.根據權利要求3-10中任一項所述的方法，其中陽離子脂質:非陽離子脂質:膽固醇:PEG化脂質的重量比為大約40:32:25:3。14.根據權利要求2-13中任一項所述的方法，其中所述脂質體包含選自以下的組合：cKK-E12、DOPE、膽固醇和DMG-PEG2K；C12-200、DOPE、膽固醇和DMG-PEG2K；HGT4003、DOPE、膽固醇和DMG-PEG2K；或ICE、DOPE、膽固醇和DMG-PEG2K。15.根據權利要求2-14中任一項所述的方法，其中所述脂質體的尺寸小于約100nm。16.根據前述權利要求中任一項所述的方法，其中以約0.1–5.0mg/kg體重范圍內的有效劑量施用所述mRNA。17.根據前述權利要求中任一項所述的方法，其中以約0.1–3.0mg/kg體重范圍內的有效劑量施用所述mRNA。18.根據前述權利要求中任一項所述的方法，其中以約0.1–1.0mg/kg體重范圍內的有效劑量施用所述mRNA。19.根據前述權利要求中任一項所述的方法，其中經靜脈內施用所述組合物。20.根據前述權利要求中任一項所述的方法，其中所述組合物每周施用一次。21.根據權利要求1-19中任一項所述的方法，其中所述組合物每周施用兩次。22.根據權利要求1-19中任一項所述的方法，其中所述組合物每月施用兩次。23.根據權利要求1-19中任一項所述的方法，其中所述組合物每月施用一次。24.根據權利要求1-19中任一項所述的方法，其中所述組合物每14天施用一次。25.根據前述權利要求中任一項所述的方法，其中所述ASS1蛋白在肝臟中表達。26.根據前述權利要求中任一項所述的方法，其中施用所述組合物導致ASS1蛋白的表達水平處于或高于約100ng/mg所述肝臟中的總蛋白。27.根據前述權利要求中任一項所述的方法，其中施用所述組合物導致血清ASS1蛋白水平升高。28.根據前述權利要求中任一項所述的方法，其中施用所述組合物導致所述受試者的瓜氨酸水平相比于治療前的基線瓜氨酸水平降低。29.根據前述權利要求中任一項所述的方法，其中施用所述組合物導致所述受試者的氨水平相比于治療前的基線氨水平降低。30.根據前述權利要求中任一項所述的方法，其中施用所述組合物導致所述血漿中的氨水平降低至約50μmol/L或更低。31.根據前述權利要求中任一項所述的方法，其中施用所述組合物導致所述血漿中的...

【專利技術屬性】
技術研發人員：M·哈特萊因，F·德羅莎，L·史密斯，
申請(專利權)人：夏爾人類遺傳性治療公司，
類型：發明
國別省市：美國;US