伏康樹中化合物的制備方法和用途技術

本發明專利技術公開了伏康樹中化合物的制備方法，包括以下步驟：取伏康樹樹皮，乙酸乙酯滲漉提取，減壓干燥滲漉液得浸膏，柱層析，用石油醚?乙酸乙酯洗脫，收集各段液體，繼續分離純化即得。該方法可以有效從伏康樹中提取制備出多種化合物。本發明專利技術還公開了這些化合物的抗腫瘤用途，具有廣闊的市場前景。

Preparation method and use of compound in Fu Kang tree

The invention discloses a preparation method of compound V Kang in the tree, which comprises the following steps: Torifushi Yasugi bark, ethyl acetate extract, vacuum drying percolate extract, column chromatography, eluted with petroleum ether ethyl acetate, collect each liquid, separation and purification is to continue. This method can be used to extract a variety of compounds from the tree. The present invention also discloses the anti-tumor use of these compounds and has broad market prospect.

【技術實現步驟摘要】

本專利技術涉及伏康樹中化合物的制備方法和用途。
技術介紹
伏康樹(Voacanga africana Staph.)為夾竹桃科(Apocynaceae)馬鈴果屬(Voacanga)植物，廣泛分布在西非、剛果、坦桑尼亞等地，主要分布于次生林和過渡區。在非洲傳統用于治療麻風病、腹瀉、全身水腫、小兒驚風和癲狂癥，也用作利尿劑和嬰兒補劑?，F代持續的科學研究發現，伏康樹中含有生物堿、黃酮類、單寧、類固醇、萜類和香豆素類等類型的化學成分，其中生物堿是其主要化學成分和主要活性成分。有報道稱伏康樹是單萜吲哚類生物堿的重要來源，這些生物堿具有奇妙的碳骨架結構和良好的生物活性。因此，有必要對伏康樹中的化學成分進行提取并對其進行進一步研究。
技術實現思路
本專利技術提供了一種制備化合物的方法，所述化合物如為下述化合物中的任一種或多種：其中，Me表示甲基；包括以下步驟：取伏康樹樹皮，乙酸乙酯滲漉提取，減壓干燥滲漉液得浸膏，柱層析，用石油醚-乙酸乙酯洗脫，收集各段液體，繼續分離純化即得。進一步地，所述化合物為12、13、14、15，制備方法的步驟如下：A、取伏康樹樹皮，干燥，打粉，用14倍量乙酸乙酯滲漉提取，減壓干燥滲漉液得浸膏；B、運用硅膠柱層析石油醚：乙酸乙酯＝5:1,4:1,3:1,2:1,1:1,1:2,0:1，甲醇洗脫，并運用TLC點板合并為8段，分別為Fr.1-8；C1：化合物12的制備：第1段Fr.1采用0.3mol/L HCl溶解和NaOH沉淀，再通過甲醇重結晶得到化合物12；C2：化合物13的制備：第2段Fr.2運用硅膠柱層析石油醚：丙酮＝6:1,5:1,4:1,3:1,2:1,1:1洗脫，劃分為6段，即Fr.2-1到Fr.2-6，Fr.2-6重結晶得到化合物13；C3：化合物14和化合物15的制備：第3段Fr.3運用凝膠Sephadex LH-20,柱直徑1cm，柱高160cm，流動相為氯仿：甲醇體積比為1:1，4個柱體積；等度洗脫，流速為7S/滴，每5mL收集一個流份，結合點板合并第35-50個流份為化合物14，合并第60-75個流份為化合物15，氯仿：甲醇＝1:1純化得到化合物14和化合物15。進一步地，所述化合物為化合物1-11，制備方法的步驟如下：(1)伏康樹樹皮干燥得藥材，粉碎，14倍藥材量乙酸乙酯滲濾提取，提取液濃縮得浸膏；(2)分離：采用硅膠柱層析，流動相為：石油醚-乙酸乙酯＝5:1，4:1，3:1，2:1，1:1，1:2，0:1，甲醇，梯度洗脫，按流動相合并為幾個部位；運用TLC根據斑點顯色情況將剩余樣品合并為Ⅰ、Ⅱ和甲醇部位；(3-1)Ⅰ部位經MCI柱洗脫，柱體積314mL，流動相為甲醇：水體積比為40:60，3倍柱體積；50:50，3倍柱體積；60：40，3倍柱體積；80:20，3倍柱體積；100:0，3倍柱體積；梯度洗脫，每50mL收集一個流份，結合TLC點板劃段；(3-1-1)化合物1的制備：合并第1-10個流份經Rp-8反相硅膠柱，柱體積56mL，流動相為甲醇：水體積比為15:85，3倍柱體積；20:80，3倍柱體積；25:75，3倍柱體積；30:70，3倍柱體積；35:65，3倍柱體積；梯度洗脫，每10mL收集一個流份，結合TLC點板劃段；合并第50-67個流份經Sephadex LH-20柱洗脫，柱體積125mL，流動相為甲醇：水體積比為100:0，8個柱體積；等度洗脫，流速為7S/滴，每5mL收集一個流份，結合點板合并第150-154個流份硫酸乙醇顯紫色單一斑點，油狀物化合物為化合物1；(3-1-2)化合物10的制備：合并第24-26個流份經Sephadex LH-20柱洗脫，柱體積125mL，流動相為甲醇：水體積比為90:10，4個柱體積；等度洗脫，流速為7S/滴，每5mL收集一個流份，結合點板合并第51-56個流份硫酸乙醇顯紫色單一斑點，白色粉末狀物為化合物10；(3-2)Ⅱ部位用甲醇溶解，抽濾，濾液直接上MCI柱，經90％甲醇等度洗脫液作為樣品；90％甲醇洗脫的樣品運用硅膠柱層析，柱直徑4cm，柱高20cm，流動相為石油醚：乙酸乙酯體積比為10:1，4倍柱體積；8:1，4倍柱體積；5:1，4倍柱體積；3:1，4倍柱體積；1:1，4倍柱體積；1:2，4倍柱體積；乙酸乙酯，4倍柱體積；甲醇，4倍柱體積；梯度洗脫；運用TLC點板分別合并每個梯度劃分為8段FrⅡ.1-8；(3-2-1)化合物2和化合物3的制備：FrⅡ.1在50℃水浴溫度下滴加甲醇，邊滴加邊振蕩直至不再溶解，趁熱過濾，濾液放置常溫下有白色沉淀物析出，析出沉淀經凝膠Sephadex LH-20柱，柱體積125mL，流動相為氯仿：甲醇體積比為3:2，5個柱體積；等度洗脫，流速為7S/滴，每5mL收集一個流份，結合點板合并第84-107個流份，再經Rp-8反相硅膠柱，柱直徑2cm，柱高18cm，流動相為甲醇：水體積比為40:60，8倍柱體積；50:50，8倍柱體積；55:45，8倍柱體積；100:0，8倍柱體積；梯度洗脫，每10mL收集一個流份，結合TLC點板劃段；合并第35-43個流份為化合物2；合并第49-161個流份為化合物3；(3-2-2)化合物4的制備：FrⅡ.5運用半制備HPLC，YMC-Pack ODS-A半制備高效液相色譜柱，250mm×10mm,S-5μm,12nm；流動相：65％甲醇/氨水；流速：4ml/min；檢測波長：205nm；tR＝15min；純化得化合物4；(3-2-3)化合物11的制備：FrⅡ.3-4經Rp-8反相硅膠柱，柱直徑1cm，柱高15cm，流動相為甲醇：水體積比為50:50，3倍柱體積；60:40，3倍柱體積；70:30，3倍柱體積；80:20，3倍柱體積；90:10，3倍柱體積；梯度洗脫，每5mL收集一個流份，結合TLC點板合并第4-23個流份，再經Rp-8反相硅膠柱，柱直徑1cm，柱高15cm，流動相為甲醇：水體積比為40:60，3倍柱體積；45:55，3倍柱體積；50:50，3倍柱體積；55:45，3倍柱體積；100:0，3倍柱體積；梯度洗脫，每5mL收集一個流份，結合TLC點板合并55％，100％甲醇洗脫液，再經Sephadex LH-20，柱直徑1cm，柱高160cm，流動相為甲醇：水體積比為100:0，4個柱體積；等度洗脫，流速為7S/滴，每5mL收集一個流份，結合點板合并第57-80個流份得到化合物11；(3-3)甲醇部位樣品，采用硅膠柱層析，柱直徑6cm，柱高20cm，流動相為氯仿：甲醇體積比為30:1，6倍柱體積；25:1，6倍柱體積；20:1，6倍柱體積；15:1，6倍柱體積；梯度洗脫，結合點板合并得到4個與流動相相應部位，30:1部位經Rp-8反相硅膠柱，柱直徑3cm，柱高18cm，流動相為甲醇：水體積比為30:70，5倍柱體積；60:40，6倍柱體積；90:10，5倍柱體積；梯度洗脫，分別合并各梯度項下洗脫液，得到30％部位，60％部位，90％部位；60％部位運用制備HPLC[LC-10ATVP系統，紫外-可見檢測器，流動相甲醇/水：0-8min 60％，8-20min 60-100％，20-25min 100％，25-28min 本文檔來自技高網...

【技術保護點】
一種制備化合物的方法，其特征在于：所述化合物如為下述化合物中的任一種或多種：其中，Me表示甲基；包括以下步驟：取伏康樹樹皮，乙酸乙酯滲漉提取，減壓干燥滲漉液得浸膏，柱層析，用石油醚?乙酸乙酯洗脫，收集各段液體，繼續分離純化即得。

【技術特征摘要】
2015.06.03 CN 20151029971601.一種制備化合物的方法，其特征在于：所述化合物如為下述化合物中的任一種或多種：其中，Me表示甲基；包括以下步驟：取伏康樹樹皮，乙酸乙酯滲漉提取，減壓干燥滲漉液得浸膏，柱層析，用石油醚-乙酸乙酯洗脫，收集各段液體，繼續分離純化即得。2.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于：所述化合物為12、13、14、15，制備方法的步驟如下：A、取伏康樹樹皮，干燥，打粉，用14倍量乙酸乙酯滲漉提取，減壓干燥滲漉液得浸膏；B、運用硅膠柱層析石油醚：乙酸乙酯＝5:1,4:1,3:1,2:1,1:1,1:2,0:1，甲醇洗脫，并運用TLC點板合并為8段，分別為Fr.1-8；C1：化合物12的制備：第1段Fr.1采用0.3mol/L HCl溶解和NaOH沉淀，再通過甲醇重結晶得到化合物12；C2：化合物13的制備：第2段Fr.2運用硅膠柱層析石油醚：丙酮＝6:1,5:1,4:1,3:1,2:1,1:1洗脫，劃分為6段，即Fr.2-1到Fr.2-6，Fr.2-6重結晶得到化合物13；C3：化合物14和化合物15的制備：第3段Fr.3運用凝膠Sephadex LH-20,柱直徑1cm，柱高160cm，流動相為氯仿：甲醇體積比為1:1，4個柱體積；等度洗脫，流速為7S/滴，每5mL收集一個流份，結合點板合并第35-50個流份為化合物14，合并第60-75個流份為化合物15，氯仿：甲醇＝1:1純化得到化合物14和化合物15。3.根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于：所述化合物為化合物1-11，制備方法的步驟如下：(1)伏康樹樹皮干燥得藥材，粉碎，14倍藥材量乙酸乙酯滲濾提取，提取液濃縮得浸膏；(2)分離：采用硅膠柱層析，流動相為：石油醚-乙酸乙酯＝5:1，4:1，3:1，2:1，1:1，1:2，0:1，甲醇，梯度洗脫，按流動相合并為幾個部位；運用TLC根據斑點顯色情況將剩余樣品合并為Ⅰ、Ⅱ和甲醇部位；(3-1)Ⅰ部位經MCI柱洗脫，柱體積314mL，流動相為甲醇：水體積比為40:60，3倍柱體積；50:50，3倍柱體積；60：40，3倍柱體積；80:20，3倍柱體積；100:0，3倍柱體積；梯度洗脫，每50mL收集一個流份，結合TLC點板劃段；(3-1-1)化合物1的制備：合并第1-10個流份經Rp-8反相硅膠柱，柱體積56mL，流動相為甲醇：水體積比為15:85，3倍柱體積；20:80，3倍柱體積；25:75，3倍柱體積；30:70， 3倍柱體積；35:65，3倍柱體積；梯度洗脫，每10mL收集一個流份，結合TLC點板劃段；合并第50-67個流份經Sephadex LH-20柱洗脫，柱體積125mL，流動相為甲醇：水體積比為100:0，8個柱體積；等度洗脫，流速為7S/滴，每5mL收集一個流份，結合點板合并第150-154個流份硫酸乙醇顯紫色單一斑點，油狀物化合物為化合物1；(3-1-2)化合物10的制備：合并第24-26個流份經Sephadex LH-20柱洗脫，柱體積125mL，流動相為甲醇：水體積比為90:10，4個柱體積；等度洗脫，流速為7S/滴，每5mL收集一個流份，結合點板合并第51-56個流份硫酸乙醇顯紫色單一斑點，白色粉末狀物為化合物10；(3-2)Ⅱ部位用甲醇溶解，抽濾，濾液直接上MCI柱，經90％甲醇等度洗脫液作為樣品；90％甲醇洗脫的樣品運用硅膠柱層析，柱直徑4cm，柱高20cm，流動相為石油醚：乙酸乙酯體積比為10:1，4倍柱體積；8:1，4倍柱體積；5:1，4倍柱體積；3:1，4倍柱體積；1:1，4倍柱體積；1:2，4倍柱體積；乙酸乙酯，4倍柱體積；甲醇，4倍柱體積；梯度洗脫；運用TLC點板分別合并每個梯度劃分為8段FrⅡ.1-8；(3-2-1)化合物2和化合物3的制備：FrⅡ.1在50℃水浴溫度下滴加甲醇，邊滴加邊振蕩直至不再溶解，趁熱過濾，濾液放置常溫下有白色沉淀物析出，析出沉淀經凝膠Sephadex LH-20柱，柱體積125mL，流動相為氯仿：甲醇體積比為3:2，5個柱體積；等度洗脫，流速為7S/滴...

【專利技術屬性】
技術研發人員：鄧赟，陳紅梅，但小梅，李鴻翔，戴宇，宋川霞，郭大樂，
申請(專利權)人：成都中醫藥大學，
類型：發明
國別省市：四川;51