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    魯克斯楊與青楊雜種F1代優良單株葉片再生植株的生產方法技術

    技術編號:13888903 閱讀:97 留言:0更新日期:2016-10-24 03:05
    本發明專利技術屬于植物組織培養技術領域,具體涉及一種魯克斯楊與青楊雜種F1代優良單株葉片再生根的生產方法。本發明專利技術所述魯克斯楊與青楊雜種F1代優良單株葉片再生植株的生產方法由外植體的選擇與消毒,愈傷組織的誘導,不定芽的誘導和根的誘導組成。本發明專利技術培養周期短,變異少,培養條件可以人為控制,操作方法簡單,為魯克斯楊與青楊雜種F1代優良單株作為優良的科研材料進行遺傳轉化和品種改良等研究奠定基礎,從而為楊樹人工林大面積生產提供耐鹽堿地的優良品種。

    【技術實現步驟摘要】

    本專利技術屬于植物組織培養
    ,具體涉及一種魯克斯楊與青楊雜種F1代優良單株葉片再生植株的生產方法。二技術背景楊樹因其生長速度快、世界分布廣、人工林栽植面積大,已經成為21世紀改善人類生存環境,滿足人類生活需求最有潛力的樹種之一。目前已經成為世界木本植物育種、栽培等模式樹種。近年來,楊樹人工林面積持續擴大,出現了可用土地資源不足的問題,而我國存在大面積的鹽堿灘涂地,面積達到0.27億hm2,如何加強對鹽堿灘涂地的利用,成為楊樹育種中關注的焦點。三
    技術實現思路
    本專利技術需要解決的問題是針對楊樹優良種質資源耐鹽堿育種中的需求,專利技術了一種魯克斯楊與青楊雜種F1代優良單株葉片再生植株的生產方法,為楊樹優良種質資源的遺傳轉化和品種改良快速提供研究材料。本專利技術所述魯克斯楊與青楊雜種F1代優良單株葉片再生植株的生產方法由以下步驟構成:(1)外植體的選擇與消毒:選擇生長健壯無病害的魯克斯楊與青楊雜種F1代優良單株的幼嫩葉片作為外植體,將材料經流水沖洗1h,去除表面雜物,在無菌操作工作臺上,先用滅菌的無菌水沖洗3遍,再用75%無水乙醇消毒30s,接著用無菌水沖洗3遍,然后用0.1%氯化汞消毒處理5-7min,最后用滅菌的無菌水沖洗4遍;(2)愈傷組織的誘導:在超凈工作臺上,將消毒好的葉片切成6mm大小的方塊,接種于誘導愈傷培養基上(配方為:MS+0.5mg/L 6-BA+0.15mg/L NAA+30g/L蔗糖+7g/L瓊脂;Ph調為5.8),葉的背面緊貼培養基,每瓶接種3-4塊,誘導光照條件12h/d,2000lux,溫度23-28℃;(3)不定芽的誘導:將經過繼代培養1次后的黃綠色愈傷組織轉接到誘導不定芽分化培養基上(配方為:
    MS+0.5mg/L 6-BA+0.05mg/L NAA+30g/L蔗糖+7g/L瓊脂;Ph調為5.8),誘導光照條件12h/d,光照強度約2000lux,溫度23-28℃;(4)根的誘導:經過不定芽誘導得到再生芽,待再生芽長到4-5片葉子,長度0.8-1.2cm高時可轉入生根培養基誘導生根(配方為:1/2MS+0.6mg/LIBA+0.2mg/L NAA+30g/L蔗糖+7g/L瓊脂;Ph調為5.8),誘導光照條件12h/d,光照強度2000lux,溫度23-28℃;。本專利技術所述魯克斯楊與青楊雜種F1代優良單株葉片再生植株培養周期為45-55天。本專利技術與現有技術相比,其有益效果是:本專利技術使用魯克斯楊與青楊雜種F1代優良單株葉片作為材料,取材方便,數量充足,接種后在較短時間內形成愈傷組織直至生根形成幼苗植株,所得植株生長健壯,平均根長均明顯增大。繁殖系數約為8.6,培養條件可人為控制。利用本方法,可以提高魯克斯楊與青楊雜種F1代優良單株的幼苗繁殖系數和成活率,培養周期短,變異少,培養條件可人為控制,操作方法簡單,為魯克斯楊與青楊雜種F1代優良單株作為優良的科研材料進行遺傳轉化和品種改良等研究奠定基礎,從而為楊樹人工林大面積生產提供耐鹽堿地的優良品種。四附圖說明圖1魯克斯楊與青楊雜種F1代優良單株再生植株的葉片外植體圖2魯克斯楊與青楊雜種F1代優良單株葉片再生植株的愈傷組織圖3魯克斯楊與青楊雜種F1代優良單株葉片再生植株的叢生芽圖4魯克斯楊與青楊雜種F1代優良單株葉片再生植株的生根幼苗五具體實施方式1,繁殖材料的選擇試驗材料取自金陵科技學院楊樹基地上的魯克斯楊與雜交青楊雜種F1代優良單株。2,繁殖材料的消毒將材料經流水沖洗1h去除表面雜物,在無菌操作工作臺上,先用無菌水沖洗3遍,再用75%無水乙醇消毒30s,接著無菌水沖洗3遍,然后用0.1%氯化汞消毒處理5-7min,最后用滅菌的無菌水沖洗4遍;見附圖1。3,愈傷組織的誘導在超凈工作臺上,將消毒好的葉片切成6mm大小的方塊,接種于愈傷誘導培養基上,葉
    的背面緊貼培養基,每瓶接種3-4塊,誘導光照條件12h/d,光照強度2000lux,溫度23-28℃;見附圖24,不定芽的誘導將經過連續繼代培養2-3次后的黃綠色愈傷組織轉接到誘導不定芽分化培養基上,誘導光照條件12h/d,光照強度2000lux,溫度23-28℃;見附圖35,根的誘導經過不定芽誘導得到再生芽,待再生芽長到4-5片葉子,長度1cm高時可轉入生根培養基誘導生根,誘導光照條件12h/d,光照強度2000lux,溫度23-28℃。幼苗生根情況,見附圖4。本文檔來自技高網
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    【技術保護點】
    一種魯克斯楊與青楊雜種F1代優良單株葉片再生植株的生產方法,其特征是由以下步驟構成:(1)外植體的選擇與消毒選擇生長健壯無病害的魯克斯楊與青楊雜種F1代優良單株的幼嫩葉片作為外植體,將材料經流水沖洗1h,去除表面雜物,在無菌操作工作臺上,先用滅菌的無菌水沖洗3遍,再用75%無水乙醇消毒30s,接著用無菌水沖洗3遍,然后用0.1%氯化汞消毒處理5?7min,最后用無菌水震蕩沖洗4遍;2)愈傷組織的誘導在超凈工作臺上,將消毒好的葉片切成6mm大小的方塊,接種于誘導愈傷培養基上,培養基的配方為:MS+0.5mg/L的6?BA+0.15mg/L的NAA+30g/L蔗糖+7g/L瓊脂;Ph調為5.8,葉的背面緊貼培養基,每瓶接種3?4塊,誘導光照條件12h/d,光照強度2000lux,溫度23?28℃;3)不定芽的誘導將經過繼代培養1次后的黃綠色愈傷組織轉接到誘導不定芽分化培養基上,培養基的配方為:MS+0.5mg/L的6?BA+0.05mg/L的NAA+30g/L蔗糖+7g/L瓊脂;Ph調為5.8,誘導光照條件12h/d,光照強度2000lux,溫度23?28℃;4)根的誘導經過不定芽誘導得到再生芽,待再生芽長到4?5片葉子,長度0.8?1.2cm高時轉入生根培養基誘導生根,培養基的配方為:1/2MS+0.6mg/L的IBA+0.2mg/L的NAA+30g/L蔗糖+7g/L瓊脂;Ph調為5.8,誘導光照條件12h/d,光照強度2000lux,溫度23?28℃。...

    【技術特征摘要】
    1.一種魯克斯楊與青楊雜種F1代優良單株葉片再生植株的生產方法,其特征是由以下步驟構成:(1)外植體的選擇與消毒選擇生長健壯無病害的魯克斯楊與青楊雜種F1代優良單株的幼嫩葉片作為外植體,將材料經流水沖洗1h,去除表面雜物,在無菌操作工作臺上,先用滅菌的無菌水沖洗3遍,再用75%無水乙醇消毒30s,接著用無菌水沖洗3遍,然后用0.1%氯化汞消毒處理5-7min,最后用無菌水震蕩沖洗4遍;2)愈傷組織的誘導在超凈工作臺上,將消毒好的葉片切成6mm大小的方塊,接種于誘導愈傷培養基上,培養基的配方為:MS+0.5mg/L的6-BA+0.15mg/L的NAA+30g/L蔗糖+7g/L瓊脂;Ph調為5.8,葉的背面緊貼培養基,每瓶接種3-4塊,誘導光照條件12h/d,光照強度2000lux,溫度23-28℃;3)...

    【專利技術屬性】
    技術研發人員:馬艷,金鳳,朱云華田野,宋紫玲章麗梅
    申請(專利權)人:金陵科技學院,
    類型:發明
    國別省市:江蘇;32

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