一種用于包被核酸引物的緩沖液及包被核酸引物的制備方法技術

本發明專利技術提供了一種用于包被核酸引物的緩沖液，按質量體積濃度包括，5.3～5.6g/L的磷酸氫二鈉、2.5～3.0g/L的磷酸二氫鈉、0.5～0.8g/L的氯化鈉、25～32g/L的多聚賴氨酸、0.03～0.09g/L的防腐劑和水。采用本發明專利技術的包被緩沖液，能夠有效的減少核酸引物包被的整體時間，又能夠減少復雜的工藝步驟，一步法工藝大大降低的成本效益，而且本發明專利技術的包被緩沖液，大大降低了原料成本，使最終產品的價格更低廉。

【技術實現步驟摘要】

本專利技術涉及生物
，尤其涉及一種用于包被核酸引物的緩沖液及包被核酸引物的制備方法。
技術介紹
隨著分子生物學的飛速發展以及生物物理技術的大量應用，利用核酸雜交來進行腫瘤或癌的診斷、病毒、細菌等感染、以及各種基因疾病的檢測領域中。現有技術中將核酸引物包被在微孔板上，如聚苯乙烯塑料板，進行腫瘤或癌的診斷、病毒、細菌等感染、以及各種基因疾病的檢測。核酸引物，又名引子，是一小段單鏈DNA或RNA，作為DNA復制的起始點，在核酸合成反應時，作為每個多核苷酸鏈進行延伸的出發點而起作用的多核苷酸鏈。包被(Coating)，是將某種化學基團的分子通過化學偶聯方式均勻涂布在目標材料表面，結合到固相載體表面的過程。如蛋白質與聚苯乙烯固相載體是通過物理吸附結合的，靠的是蛋白質分子結構上的疏水基因與固相載體表面的疏水基因間的作用。這種物理吸附是非特異性的，受蛋白質的分子量、等電點、濃度等的影響。載體對不同蛋白質的吸附能力是不相同的，大分子蛋白質較小分子蛋白質通常含有更多的疏水基團，故更易吸附到固相載體表面。由于近些年生物學發展迅速，以及生物物理技術的大量應用，對包被核酸引物的需求量也在快速提高，同時，對包被核酸引物的價格也日趨降低。然而，現有工藝技術耗時太長，平均耗時在4～5天左右，并且工藝技術太過于復雜，反復洗板步驟，平均工藝下來每塊板需要洗板15次左右，而且現有的工藝技術材料消耗成本太高，包被所用的試劑成本太高，需要進口，并且價格昂貴。因此，如何找到一種包被核酸引物的制備方法，能夠減少核酸引物包被的整體時間，降低時間成本，又能夠減少復雜的工藝步驟，已成為行業內具有前瞻意識的生產廠家亟待解決的問題。
技術實現思路
有鑒于此，本專利技術要解決的技術問題在于提供一種用于包被核酸引物的緩沖液及包被核酸引物的制備方法，本專利技術提供的核酸引物的包被方法，能夠有效的減少核酸引物包被的整體時間，又能夠減少復雜的工藝步驟。本專利技術提供了一種用于包被核酸引物的緩沖液，按質量體積濃度包括：優選的，所述緩沖液還包括16～18g/L的硫酸鈉。優選的，所述緩沖液還包括2-巰基乙醇；所述2-巰基乙醇的質量體積濃度為0.35～0.46g/L。優選的，所述防腐劑為疊氮鈉和/或ProClin300。本專利技術還提供了一種包被核酸引物的制備方法，包括以下步驟：A)將核酸引物溶于TE緩沖溶液中，得到混合液；將磷酸氫二鈉、磷酸二氫鈉、多聚賴氨酸、氯化鈉、防腐劑和水混合后，得到緩沖液；B)將上述步驟得到的混合液和緩沖液再次混合后，得到包被混合液；C)將上述步驟得到的包被混合液放入包被板后進行包被，得到包被后的核酸引物。優選的，所述混合液中，所述核酸引物的濃度為3～5μg/mL。優選的，所述包被混合液中，所述核酸引物的濃度為1.5～2.5μg/mL。優選的，所述包被的時間為18～25h；所述包被的溫度為0～37℃；所述包被板為多孔微孔聚苯乙烯板。優選的，所述步驟A)具體為：將核酸引物溶于TE緩沖溶液中，得到混合液；將磷酸氫二鈉、磷酸二氫鈉與水攪拌混合，再加入多聚賴氨酸，再加入硫酸鈉、氯化鈉和防腐劑后，得到緩沖液。優選的，所述包被后還包括處理步驟：用PBS緩沖液清洗所述包被板，洗滌1～3遍后干燥；所述干燥的時間為4～9h；所述干燥的濕度為10％～35％RH。本專利技術提供了一種用于包被核酸引物的緩沖液，按質量體積濃度包括，5.3～5.6g/L的磷酸氫二鈉、2.5～3.0g/L的磷酸二氫鈉、0.5～0.8g/L的氯化鈉、25～32g/L的多聚賴氨酸、0.03～0.09g/L的防腐劑和水。與現有技術相比，本專利技術有效的減少核酸引物包被的整體時間，將現有的核酸引物包被工藝，從平均耗時在4～5天，提升到平均耗時在1天左右，大大提高了生產的通量；而且能夠減少復雜的工藝步驟，現有工藝需要反復洗板，平均整個工藝每塊包被板需要洗板15次左右，而本專利技術的平均洗板步驟需要6次左右，大大降低了工藝復雜性，更適合作為標準工藝推廣；此外，現有的包被緩沖液價格昂貴，而本專利技術的包被緩沖液，大大降低了原料成本，使最終產品的價格更低廉。附圖說明圖1為本專利技術實施例1中驗證實驗信噪比數據圖。具體實施方式為了進一步了解本專利技術，下面結合實施例對本專利技術的優選實施方案進行描述，但是應當理解，這些描述只是為進一步說明本專利技術的特征和優點而不是對本專利技術專利要求的限制。本專利技術所有原料，對其來源沒有特別限制，在市場上購買的或按照本領域技術人員熟知的常規方法制備的即可。本專利技術所有原料，對其純度沒有特別限制，本專利技術優選采用分析純。本專利技術所有原料，其牌號和簡稱均屬于本領域常規牌號和簡稱，每個牌號和簡稱在其相關用途的領域內均是清楚明確的，本領域技術人員根據牌號、簡稱以及相應的用途，能夠從市售中購買得到或常規方法制備得到。本專利技術提供了一種用于包被核酸引物的緩沖液，按質量體積濃度包括：本專利技術所述磷酸氫二鈉的加入量優選為5.3～5.6g/L，更優選為5.35～5.55g/L，最優選為5.4～5.5g/L；本專利技術對所述磷酸氫二鈉沒有特別限制，以本領域技術人員熟知的磷酸氫二鈉即可。本專利技術所述磷酸二氫鈉的加入量優選為2.5～3.0g/L，更優選為2.6～2.9g/L，最優選為2.7～2.8g/L；本專利技術對所述磷酸二氫鈉沒有特別限制，以本領域技術人員熟知的磷酸二氫鈉即可。本專利技術所述氯化鈉的加入量優選為0.5～0.8g/L，更優選為0.55～0.75g/L，最優選為0.6～0.7g/L；本專利技術對所述氯化鈉沒有特別限制，以本領域技術人員熟知的氯化鈉即可。本專利技術所述多聚賴氨酸的加入量優選為25～32g/L，更優選為26～31g/L，更優選為27～30g/L，最優選為28～29g/L；本專利技術對所述多聚賴氨酸沒有特別限制，以本領域技術人員熟知的多聚賴氨酸即可。本專利技術所述多防腐劑的加入量優選為0.03～0.09g/L，更優選為0.04～0.08g/L，最優選為0.05～0.07g/L；本專利技術對所述防腐劑沒有特別限制，以本領域技術人員熟知的防腐劑即可，本專利技術優選為疊氮鈉和/或ProClin300。本專利技術為提高緩沖液在包被核酸引物過程中的使用效果，優選還包括硫酸鈉，所述硫酸鈉的加入量優選為16～18g/L，更優選為16.2～17.8g/L，最優選為16.5～17.5g/L；優選還包括2-巰基乙醇，所述2-巰基乙醇的加入量優選為0.35～0.46g/L，更優選為0.37～0.43g/L，最優選為0.39～0.41g/L。本專利技術還提供了一種包被核酸引物的制備方法，包括以下步驟：A)將核酸引物溶于TE緩沖溶液中，得到混合液；將磷酸氫二鈉、磷酸二氫鈉、多聚賴氨酸、氯化鈉、防腐劑和水混合后，得到緩沖液；B)將上述步驟得到的混合液和緩沖液再次混合后，得到包被混合液；C)將上述步驟得到的包被混合液放入包被板后進行包被，得到包被后的核酸引物。本專利技術所述制備方法中，所述原料的具體優選方案，以及加入份數的優選數值與前述緩沖液中組分的具體優選方案，以及加入份數的優選數值均一致，在此不再一一贅述。本專利技術首先將核酸引物溶于TE緩沖溶液中，得到混合液；將磷酸氫二鈉、
磷酸二氫鈉、多聚賴氨酸、氯化鈉、防腐劑和水混合后本文檔來自技高網...

【技術保護點】
一種用于包被核酸引物的緩沖液，其特征在于，按質量體積濃度包括：

【技術特征摘要】
1.一種用于包被核酸引物的緩沖液，其特征在于，按質量體積濃度包括：2.根據權利要求1所述的緩沖液，其特征在于，所述緩沖液還包括16～18g/L的硫酸鈉。3.根據權利要求1所述的緩沖液，其特征在于，所述緩沖液還包括2-巰基乙醇；所述2-巰基乙醇的質量體積濃度為0.35～0.46g/L。4.根據權利要求1所述的緩沖液，其特征在于，所述防腐劑為疊氮鈉和/或ProClin300。5.一種包被核酸引物的制備方法，其特征在于，包括以下步驟：A)將核酸引物溶于TE緩沖溶液中，得到混合液；將磷酸氫二鈉、磷酸二氫鈉、多聚賴氨酸、氯化鈉、防腐劑和水混合后，得到緩沖液；B)將上述步驟得到的混合液和緩沖液再次混合后，得到包被混合液；C)將上述步驟得到的包被混合液放入包被板后進行包被，得到包被后的核酸引物。6.根據權利要求5所述...

【專利技術屬性】
技術研發人員：張鷺鷺，李先坤，張愛國，
申請(專利權)人：科蒂亞新鄉生物技術有限公司，
類型：發明
國別省市：河南;41