一種重組質(zhì)粒及重組酵母菌株及其構(gòu)建方法和應(yīng)用技術(shù)

本發(fā)明專利技術(shù)涉及基因工程技術(shù)領(lǐng)域，公開了一種重組質(zhì)粒及重組酵母菌株及其構(gòu)建方法和應(yīng)用。本發(fā)明專利技術(shù)所述重組質(zhì)粒包含如下基因片段：終止子ADH1t、β?胡蘿卜素羥化酶基因crtZ、啟動子FBA1p或TEF1p、啟動子TDH3p、β?胡蘿卜素酮化酶基因crtW、終止子TDH2t順次拼接而成的基因片段。本發(fā)明專利技術(shù)通過選擇特定的終止子、啟動子以及外源crtZ和crtW，組成了可生產(chǎn)蝦青素產(chǎn)量的基因片段，由此獲得了重組質(zhì)粒，將其轉(zhuǎn)化至特定的釀酒酵母菌株中，保證了蝦青素的較高產(chǎn)量，為蝦青素的異源微生物生產(chǎn)提供更加經(jīng)濟(jì)、效率、簡便的方式。

【技術(shù)實現(xiàn)步驟摘要】
201610355056

【技術(shù)保護(hù)點(diǎn)】
一種重組質(zhì)粒，其特征在于，包含如下基因片段：終止子ADH1t、β?胡蘿卜素羥化酶基因crtZ、啟動子FBA1p、啟動子TDH3p、β?胡蘿卜素酮化酶基因crtW、終止子TDH2t順次拼接而成的基因片段1，或終止子ADH1t、β?胡蘿卜素羥化酶基因crtZ、啟動子TEF1p、啟動子TDH3p、β?胡蘿卜素酮化酶基因crtW、終止子TDH2t順次拼接而成的基因片段2；所述β?胡蘿卜素羥化酶基因crtZ來源于：水生副球菌(Agrobacterium?aurantiacum)、產(chǎn)堿桿菌(Alcaligenes?sp.strain?PC?1)，歐文氏菌(Erwinia?uredovora)、成團(tuán)泛菌(Pantoea?agglomerans)、玉米細(xì)菌性枯萎病菌(Pantoea?stewartii)、硫化葉菌(Sulfolobus?solfataricus?P2)、短波單胞菌(Brevundimonas?sp.SD212)、短波單胞菌(Brevundimonas?vesicularis?DC263)或雨生紅球藻(Haematococcus?pluvialis)；所述β?胡蘿卜素酮化酶基因crtW來源于：將175位的亮氨酸突變?yōu)榧琢虬彼岬乃鼻蚓?Agrobacterium?aurantiacum)、產(chǎn)堿桿菌(Alcaligenes?sp.strain?PC?1)，萊茵衣藻(Chlamydomonas?reinhardtii)、無類囊體藍(lán)藻(Gloeobacter?violaceus?PCC?7421)、點(diǎn)狀念珠藻(Nostoc?punctiforme?PCC?73102crtW148)、魚腥藻(Nostoc?sp.PCC?7120)、短波單胞菌(Brevundimonas?sp.SD212)、短波單胞菌(Brevundimonas?vesicularis?DC263)、紅平紅球菌(Rhodococcus?erythropolis?crtO320SHU019)、鞘氨醇單胞菌(Sphingomonas?sp.DC18MM1)。...

【技術(shù)特征摘要】
1.一種重組質(zhì)粒，其特征在于，包含如下基因片段：終止子ADH1t、β-胡蘿卜素羥化酶基因crtZ、啟動子FBA1p、啟動子TDH3p、β-胡蘿卜素酮化酶基因crtW、終止子TDH2t順次拼接而成的基因片段1，或終止子ADH1t、β-胡蘿卜素羥化酶基因crtZ、啟動子TEF1p、啟動子TDH3p、β-胡蘿卜素酮化酶基因crtW、終止子TDH2t順次拼接而成的基因片段2；所述β-胡蘿卜素羥化酶基因crtZ來源于：水生副球菌(Agrobacterium aurantiacum)、產(chǎn)堿桿菌(Alcaligenes sp.strain PC-1)，歐文氏菌(Erwinia uredovora)、成團(tuán)泛菌(Pantoea agglomerans)、玉米細(xì)菌性枯萎病菌(Pantoea stewartii)、硫化葉菌(Sulfolobus solfataricus P2)、短波單胞菌(Brevundimonas sp.SD212)、短波單胞菌(Brevundimonas vesicularis DC263)或雨生紅球藻(Haematococcus pluvialis)；所述β-胡蘿卜素酮化酶基因crtW來源于：將175位的亮氨酸突變?yōu)榧琢虬彼岬乃鼻蚓?Agrobacterium aurantiacum)、產(chǎn)堿桿菌(Alcaligenes sp.strain PC-1)，萊茵衣藻(Chlamydomonas reinhardtii)、無類囊體藍(lán)藻(Gloeobacter violaceus PCC 7421)、點(diǎn)狀念珠藻(Nostoc punctiforme PCC73102crtW148)、魚腥藻(Nostoc sp.PCC 7120)、短波單胞菌(Brevundimonas sp.SD212)、短波單胞菌(Brevundimonas vesicularis DC263)、紅平紅球菌(Rhodococcuserythropolis crtO320SHU019)、鞘氨醇單胞菌(Sphingomonas sp.DC18MM1)。2.根據(jù)權(quán)利要求1所述重組質(zhì)粒，其特征在于，所述重組質(zhì)粒以pRS425K為基礎(chǔ)質(zhì)粒，所述pRS425K質(zhì)粒在pRS425商品質(zhì)粒基礎(chǔ)上由Kan基因替換掉Amp基因得到。3.根據(jù)權(quán)利要求1所述重組質(zhì)粒，其特征在于，所述水生副球菌來源的crtZ序列如SEQID NO:1所示，產(chǎn)堿桿菌來源的crtZ序列如SEQ ID NO:2所示，歐文氏菌來源的crtZ序列如SEQ ID NO:3所示，成團(tuán)泛菌來源的crtZ序列如SEQ ID NO:4所示，玉米細(xì)菌性枯萎病菌來源的crtZ序列如SEQ ID NO:5所示，硫化葉菌來源的crtZ序列如SEQ ID NO:6所示，短波單胞菌(Brevundimonas sp.SD212)來源的crtZ序列如SEQ ID NO:7所示，短波單胞菌(Brevundimonas vesicularis DC263)來源的crtZ序列如SEQ ID NO:8所示，雨生紅球藻來源的crtZ序列如SEQ ID NO:9所示。4.根據(jù)權(quán)利要求1所述重組質(zhì)粒，其特征在于，所述175位的亮氨酸突變?yōu)榧琢虬彼岬乃鼻蚓鷣碓吹腸rtW序列如SEQ ID NO:10所示，產(chǎn)堿桿菌來源的crtW序列如SEQ ID NO:11所示，萊茵衣藻來源的crtW序列如SEQ ID NO:12所示，無類囊體藍(lán)藻來源的crtW序列如SEQ ID NO:13所示，點(diǎn)狀念珠藻來源的crtW序列如SEQ ID NO:14所示，魚腥藻來源的crtW序列如SEQ ID NO:15所示，短波單胞菌(Brevundimonas sp.SD212)來源的crtW序列如SEQID NO:16所示，短波單胞菌(Brevundimonas vesicularis DC263)來源的crtW序列如SEQID NO:17所示，紅平紅球菌來源的crtW序列如SEQ ID NO:18所示、鞘氨醇單胞菌來源的crtW序列如SEQ ID NO:19所示。5.根據(jù)權(quán)利要求1所述重組質(zhì)粒，其特征在于，所述β-胡蘿卜素羥化酶基因crtZ和β-胡蘿卜素酮化酶基因crtW選擇如下之一：(1)水生副球菌來源的crtW，與水生副球菌、產(chǎn)堿桿菌、短波單胞菌(Brevundimonassp.SD212)、短波單胞菌(Brevundimonas vesicularis DC263)、雨生紅球藻、歐文氏菌、成團(tuán)泛菌、玉米細(xì)菌性枯萎病菌、硫化葉菌中任意一種來源的crtZ；(2)產(chǎn)堿桿菌來源的crtW，與短波單胞菌(Brevundimonas vesicularis DC263)、歐文氏菌、雨生紅球藻、玉米細(xì)菌性枯萎病菌、產(chǎn)堿桿菌中任意一種來源的crtZ；(3)短波單胞菌(Brevundimonas sp.SD212)來源的crtW，與歐文氏菌、玉米細(xì)菌性枯萎病菌、短波單胞菌(Brevundimonas sp.SD2...

【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：肖文海，王瑞釗，王穎，元英進(jìn)，
申請(專利權(quán))人：天津大學(xué)，
類型：發(fā)明
國別省市：天津;12