一種利用印度梨形孢和中生菌素聯(lián)合防治煙草青枯病的方法技術(shù)

本發(fā)明專利技術(shù)公開了一種利用印度梨形孢和中生菌素聯(lián)合防治煙草青枯病的方法，包括以下步驟：(1)將煙草種子播種于混有印度梨形孢(Piriformospora?india)菌絲的育苗基質(zhì)中，成苗后移栽至大田；(2)移栽前，用中生菌素藥液澆灌煙草苗移栽用洞穴；移栽后10～15天，再用中生菌素藥液對(duì)每株煙草植株進(jìn)行灌根處理。本發(fā)明專利技術(shù)使用的印度梨形孢不受中生菌素的抑制，可與殺菌劑中生菌素聯(lián)合使用，應(yīng)用于煙草青枯病的防治；與單獨(dú)使用印度梨形孢或中生菌素的防治效果相比，本發(fā)明專利技術(shù)印度梨形孢和中生菌素聯(lián)合使用能夠起到增效作用，顯著提高對(duì)煙草青枯病的防控。

Method for preventing and controlling tobacco bacterial wilt by using India pear shaped spore and intermediate fungus

The invention discloses a method for India pear shaped spore and Zhongshengmycin joint prevention and control of tobacco bacterial wilt in use, which comprises the following steps: (1) the tobacco seeds were sown in mixed with India pear shaped spore (Piriformospora India) seedling substrate mycelium, seedling after transplanting to the field; (2) before transplanting Zhongshengmycin, transplanting tobacco seedlings watered with liquid cave; 10 ~ 15 days after transplanting, and Zhongshengmycin solution on each plant tobacco root irrigation treatment. The invention uses the India pear shaped spore not inhibited by Zhongshengmycin, and fungicides Zhongshengmycin combined, applied to prevent tobacco bacterial wilt; compared with the control effect of single India pear shaped spore or Zhongshengmycin, the invention of India pear shaped spore and Zhongshengmycin joint can play a synergistic effect, significantly improve the prevention and control of tobacco bacterial wilt.

【技術(shù)實(shí)現(xiàn)步驟摘要】


本專利技術(shù)涉及植物病害防治領(lǐng)域，具體涉及一種利用印度梨形孢和中生菌素聯(lián)合防治煙草青枯病的方法。

技術(shù)介紹

煙草青枯病是煙草上一種重要土傳細(xì)菌病害，目前防治的方法大多數(shù)集中在化學(xué)防治方面，然而大量的使用農(nóng)藥，不僅容易造成農(nóng)藥殘留，污染水資源，污染環(huán)境，而且長(zhǎng)時(shí)間的使用還容易使細(xì)菌產(chǎn)生抗藥性，為病害的持續(xù)防治帶來(lái)困難。
近年來(lái)，植物病害的生物防治越來(lái)越受到人們的重視，生物防治是利用有益微生物對(duì)病原菌產(chǎn)生各種不利作用(抗菌，溶菌、競(jìng)爭(zhēng)、重寄生)從而減少病原物的數(shù)量來(lái)消弱其致病性；同時(shí)，用于生物防治的有益微生物還能誘導(dǎo)或增強(qiáng)植物抗病性，通過改變植物與病原菌的相互關(guān)系，延緩或者抑制病害的發(fā)生。生物防治可以減少農(nóng)藥對(duì)環(huán)境的污染，具有良好的生態(tài)效益和社會(huì)效益。
在煙草青枯病生物防治方面，枯草芽孢桿菌Y1336、熒光假單胞桿菌、多粘類假單胞桿菌都能夠很好的抑制青枯病原菌，但是僅用這些有益細(xì)菌，不能達(dá)到生產(chǎn)上所要求的防治效果。這些細(xì)菌不能與防治青枯病菌的農(nóng)藥共同使用，因?yàn)閷?duì)煙草青枯病菌有控制作用的農(nóng)藥，往往也對(duì)具有生防作用的有益細(xì)菌具有抑制作用。
公告號(hào)為CN103270915B的專利文獻(xiàn)公開了一種防治煙草青枯病的方法，包括：(1)在煙苗移栽時(shí)，將立枯凈和水按照重量比1∶800～1200的比例稀釋配制成立枯凈藥液對(duì)煙苗進(jìn)行灌根，每株煙苗灌根40～60ml藥液；(2)在煙株發(fā)病初期，將百抗和水按照重量比1∶500～1000的比例配制成百抗藥液淋施發(fā)病煙株的根莖部，每株煙株淋施75～150ml藥液。其中立枯凈的有效成分為：4％稻瘟凈、32％福美雙、14％甲霜靈；百抗的有效成分為：枯草芽孢桿菌B908。該專利技術(shù)采用移栽時(shí)用立枯凈灌根(化學(xué)防治)、發(fā)病初期用百抗淋施根莖部(生物防治)聯(lián)合處理的方式，有效控制煙草青枯病的發(fā)生和蔓延。但是該方法依然無(wú)法克服上述的生防菌與農(nóng)藥不能共同使用的缺陷。
印度梨形孢菌是一種重要的有益內(nèi)生真菌，能夠定殖在多種植物根的表皮和皮層細(xì)胞內(nèi)和細(xì)胞間隙，提高植物對(duì)生物和非生物逆境的抗性。印度梨形孢幫助植物抗逆的機(jī)制涉及提高植物抗氧化能力，誘導(dǎo)抗逆基因表達(dá)，誘導(dǎo)植物產(chǎn)生系統(tǒng)抗病性。印度梨形孢不同于叢枝菌根真菌，它可在培養(yǎng)基上生長(zhǎng)，這就為該菌在農(nóng)業(yè)和園藝業(yè)的大面積應(yīng)用提供可能。
中國(guó)專利技術(shù)專利申請(qǐng)(申請(qǐng)?zhí)枮?01410092267、201410092269、201410093085)公開了通過用過濾后的印度梨形孢菌絲懸浮液澆灌4葉期的煙苗，待印度梨形孢定殖后移栽煙苗，從而降低煙葉中鉻、鎘、鉛含量的方法。上述專利申請(qǐng)為印度梨形孢應(yīng)用到煙草培育中提供了技術(shù)依據(jù)。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

本專利技術(shù)提供了一種利用印度梨形孢和中生菌素聯(lián)合防治煙草青枯病的方法，結(jié)合印度梨形孢生物防治和殺菌劑中生菌素的化學(xué)防治，克服了現(xiàn)有技術(shù)中生防菌與農(nóng)藥不能共同使用的缺陷。
一種利用印度梨形孢和中生菌素聯(lián)合防治煙草青枯病的方法，包括以下步驟：
(1)將煙草種子播種于混有印度梨形孢(Piriformosporaindia)菌絲的育苗基質(zhì)中，成苗后移栽至大田；
(2)移栽前，用中生菌素藥液澆灌煙草苗移栽用洞穴；移栽后10～15天，再用中生菌素藥液對(duì)每株煙草植株進(jìn)行灌根處理。
本專利技術(shù)將印度梨形孢定殖在煙草根部，建立煙草青枯病-印度梨形孢-中生菌素的煙草防治體系，研究證明該體系能夠有效提高煙草對(duì)青枯病的防控。
本專利技術(shù)所述印度梨形孢(P.indica)菌株，是公眾可以從生物材料樣品國(guó)際保藏單位購(gòu)買到的生物材料，在美國(guó)Americantypeculturecollection保藏庫(kù)，保藏編號(hào)是204458TM。
印度梨形孢和中生菌素的聯(lián)合處理，具有增效作用，顯著降低了煙草青枯病的田間株發(fā)病率與病情指數(shù)，防治效果達(dá)到76.49％，病情指數(shù)下降了42.3，其防治效果顯著優(yōu)于單獨(dú)使用印度梨形孢或中生菌素。
本專利技術(shù)將煙草種子接種于混有印度梨形孢(Piriformosporaindia)菌絲的育苗基質(zhì)中，進(jìn)行育苗。育苗條件為：每天光照培養(yǎng)16小時(shí)，光照強(qiáng)度為80μMm-2sec-1，培養(yǎng)溫度為25℃；暗培養(yǎng)8小時(shí)，培養(yǎng)溫度為22℃。一般在種子發(fā)芽的2～3周之后，印度梨形孢即可定殖在煙草幼苗的根部。
本專利技術(shù)煙草育苗基質(zhì)的配方和配制方法是公知技術(shù)，可以自行配制基質(zhì)，也可以購(gòu)買廠家生產(chǎn)的基質(zhì)。作為優(yōu)選，所述育苗基質(zhì)包括營(yíng)養(yǎng)土、蛭石和珍珠巖，三者按照4:2:1的體積比混合。
育苗基質(zhì)中印度梨形孢菌絲量太少不利于誘導(dǎo)提高煙草的抗病性，菌絲量太多容易導(dǎo)致印度梨形孢與煙草爭(zhēng)奪養(yǎng)分。作為優(yōu)選，所述育苗基質(zhì)中印度梨形孢菌絲所占重量百分比為0.5～1％。更為優(yōu)選的，所述育苗基質(zhì)中印度梨形孢菌絲所占重量百分比為1％。
作為優(yōu)選，步驟(1)中，煙草種子經(jīng)消毒后再進(jìn)行播種。種子消毒后再播種有利于提高煙草的成活率。
作為優(yōu)選，步驟(1)中，煙草苗長(zhǎng)至8～9片真葉后移栽至大田。
本專利技術(shù)選擇移栽前施藥和移栽后10-15天再次施藥，主要原因有兩點(diǎn)：(1)移栽前用中生菌素藥液，對(duì)土壤消毒，降低病原菌基數(shù)，目的在于病害預(yù)防；(2)中生菌素的藥效期為10-15天，因此在煙草苗移栽10-15天后，再施藥，進(jìn)一步殺死根際周圍病原菌，有益于鞏固病害的預(yù)防，顯著減輕青枯病的發(fā)生。
在施藥過程中，中生菌素藥液施用濃度過高易造成殘留，產(chǎn)生藥害，增加成本；施藥濃度過低，降低殺菌效果。當(dāng)中生菌素藥液有效濃度在20～30ppm時(shí)，既能有效殺菌又不造成藥害。
作為優(yōu)選，所述中生菌素藥液為3％中生菌素用水按照1:1000～1:1500比例進(jìn)行稀釋得到，每個(gè)洞穴或每株煙草植株的施藥量為200～500mL。
更為優(yōu)選，所述中生菌素藥液為3％中生菌素用水按照1:1000比例進(jìn)行稀釋得到，每個(gè)洞穴或每株煙草植株的施藥量為300mL。
本專利技術(shù)具備的有益效果：(1)本專利技術(shù)使用的印度梨形孢不受中生菌素的抑制，可與殺菌劑中生菌素聯(lián)合使用，應(yīng)用于煙草青枯病的防治；(2)與單獨(dú)使用印度梨形孢或中生菌素的防治效果相比，本專利技術(shù)印度梨形孢和中生菌素聯(lián)合使用能夠起到增效作用，顯著提高對(duì)煙草青枯病的防控。
附圖說明
圖1為中生菌素對(duì)茄科勞爾氏菌RS-TB3的抑菌圈試驗(yàn)初篩結(jié)果。
圖2為不同濃度的中生菌素對(duì)茄科勞爾氏菌株RS-TB3抑菌效果(NA，48h)。
圖3為盆栽煙苗接種茄科勞爾氏菌RS-TB3第8d天發(fā)病程度的差異，
其中，A代表中生菌素：根部未定殖印度梨形孢煙草苗澆灌50mL農(nóng)藥中生菌素；
B代表PI+中生菌素：根部定殖印度梨形孢煙草苗澆灌50mL農(nóng)藥中生菌素；
C代表CK：根部未定殖印度梨形孢煙草苗澆灌50mL無(wú)菌水；
D代表PI：根部定殖印度梨形孢煙草苗澆灌50mL無(wú)菌水，箭頭所示煙草青枯病典型癥狀。
圖4為接種茄科勞爾氏菌RS-TB3后不同時(shí)期煙草葉片中PPO酶活性的變化。
圖5為接種茄科勞爾氏菌RS-TB3后不同時(shí)期煙草葉片中POD酶活性的變化。
圖6為接種茄科勞爾氏菌RS-TB3后不同時(shí)期煙草葉片中PAL酶活性的變化。
圖7為接種茄科勞爾氏菌RS-TB3后12h后各處理煙葉葉片總RNA電泳圖。
圖8為接種茄科勞爾氏菌RS-TB3后不同時(shí)期煙草葉片中P本文檔來(lái)自技高網(wǎng)...

【技術(shù)保護(hù)點(diǎn)】
一種利用印度梨形孢和中生菌素聯(lián)合防治煙草青枯病的方法，其特征在于，包括以下步驟：(1)將煙草種子播種于混有印度梨形孢(Piriformospora?india)菌絲的育苗基質(zhì)中，成苗后移栽至大田；(2)移栽前，用中生菌素藥液澆灌煙草苗移栽用洞穴；移栽后10～15天，再用中生菌素藥液對(duì)每株煙草植株進(jìn)行灌根處理。

【技術(shù)特征摘要】
1.一種利用印度梨形孢和中生菌素聯(lián)合防治煙草青枯病的方法，其特征在于，包括以下
步驟：
(1)將煙草種子播種于混有印度梨形孢(Piriformosporaindia)菌絲的育苗基質(zhì)中，成苗后
移栽至大田；
(2)移栽前，用中生菌素藥液澆灌煙草苗移栽用洞穴；移栽后10～15天，再用中生菌素
藥液對(duì)每株煙草植株進(jìn)行灌根處理。
2.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述育苗基質(zhì)包括營(yíng)養(yǎng)土、蛭石和珍珠巖，
三者按照4:2:1的體積比混合。
3.如權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述育苗基質(zhì)中印度梨形孢菌絲所占重量百
分比為0.5～1％。
4.如權(quán)利要求3所述的方法，其...

【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：王洪凱，曹以襯，樓兵干，蘇珍珠，林福呈，
申請(qǐng)(專利權(quán))人：浙江大學(xué)，
類型：發(fā)明
國(guó)別省市：浙江;33