LC?MS/MS聯(lián)用測定拉帕替尼中雜質(zhì)含量的方法技術(shù)

本發(fā)明專利技術(shù)提供了LC?MS/MS聯(lián)用檢測拉帕替尼中4?(3?氟苯甲氧基)3?氯苯胺和2?(甲砜基)乙胺鹽酸鹽雜質(zhì)含量的方法。通過本發(fā)明專利技術(shù)所述的方法，能夠快速有效地檢測拉帕替尼原料藥中的4?(3?氟苯甲氧基)3?氯苯胺和2?(甲砜基)乙胺鹽酸鹽雜質(zhì)，且可同時定量檢測分析這2種雜質(zhì)的含量。應(yīng)用本發(fā)明專利技術(shù)所述的方法，檢測結(jié)果準(zhǔn)確可靠，操作簡便，快速，專屬性強(qiáng)，重復(fù)性好，且無殘留效應(yīng)，可用于拉帕替尼藥物生產(chǎn)的質(zhì)量控制。

【技術(shù)實(shí)現(xiàn)步驟摘要】


本專利技術(shù)涉及藥物分析
，具體地，涉及LC-MS/MS聯(lián)用檢測抗腫瘤藥拉帕替尼中雜質(zhì)含量的方法。

技術(shù)介紹

拉帕替尼是一種能夠同時靶向人表皮生長因子受體(EGFR)和人表皮生長因子受體-2(HER2)的小分子激酶抑制劑，由GSK公司開發(fā)，于2007年3月獲得美國FDA批準(zhǔn)，用于聯(lián)合用藥：合用卡培他濱治療過度表達(dá)HER2的晚期或轉(zhuǎn)移性乳腺癌，合用來曲唑治療過度表達(dá)HER2、激素受體陽性的轉(zhuǎn)移性乳腺癌絕經(jīng)期婦女。
4-(3-氟苯甲氧基)3-氯苯胺(化合物4)和2-(甲砜基)乙胺鹽酸鹽(化合物9)分別是制備拉帕替尼原料藥的兩種生產(chǎn)用中間體原料(兩者的結(jié)構(gòu)見下式)，通常最終的拉帕替尼成品原料藥中會含有少量的化合物4以及化合物9雜質(zhì)，為了提高拉帕替尼的質(zhì)量和穩(wěn)定性、以及降低供臨床用拉帕替尼的藥物毒副作用，故在生產(chǎn)中需要對化合物4和化合物9進(jìn)行含量分析測定，并在拉帕替尼原料藥中對化合物4和化合物9雜質(zhì)的含量進(jìn)行限量。
現(xiàn)有技術(shù)中，只有針對化合物4進(jìn)行雜質(zhì)限量的方法，但是目前沒有針對化合物4和化合物9同時進(jìn)行含量測定的方法見諸報道，因而，關(guān)于拉帕替尼的雜質(zhì)含量分析測定方法仍有待改進(jìn)。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路

本專利技術(shù)旨在至少在一定程度上解決相關(guān)技術(shù)中的技術(shù)問題之一。為此，本專利技術(shù)的一個目的在于提出一種結(jié)果準(zhǔn)確可靠，簡便，快速，專屬性強(qiáng)，重復(fù)性好，可同時定量分析化合物4和化合物9的含量的LC-MS/MS(液相色譜-質(zhì)譜/質(zhì)譜)聯(lián)用檢測方法，用于拉帕替尼藥物生產(chǎn)的質(zhì)量控制。
本專利技術(shù)是基于專利技術(shù)人的以下發(fā)現(xiàn)而完成的：
專利技術(shù)人在制定拉帕替尼原料藥的藥品標(biāo)準(zhǔn)中，化合物4雜質(zhì)的含量限度為不高于4μg/1g(即4ppm)，化合物9雜質(zhì)的含量限度為不高于0.02％，普通的高效液相色譜法檢測化合物4的檢測限很低，只能測定0.1％及以上的雜質(zhì)。化合物9因無紫外吸收，無法用液相測定。專利技術(shù)人嘗試用蒸發(fā)光散射雖然可以檢測到，但其檢測限很低，只能測定2％及以上的雜質(zhì)。專利技術(shù)人在研究過程中，使用C8(sunfireC850*4.6mm，5μm)色譜柱優(yōu)化分析拉帕替尼原料藥及化合物4、化合物9的色譜條件，用甲醇(B)-水(A)作為流動相，進(jìn)樣體積為10.0μL，在實(shí)驗(yàn)過程中發(fā)現(xiàn)，在如表1所示的梯度條件、以及在這種類型的色譜柱上，化合物4及拉帕替尼原料藥的保留較好，但化合物9并沒有表現(xiàn)出良好的保留行為(化合物9基本在死時間位置出峰，該條件下的死體積約為0.5mL，而化合物9的出峰時間為1.5min)。
表1：sunfireC8的梯度條件
時間(min) 流動相B(％) 流速(ml/min) 0 30 0.3 0.4 30 0.3 2.0 60 —— 6.0 95 0.8 9.0 95 0.8 9.1 30 0.3 11 30 0.3 在LC-MS/MS分析過程中化合物的保留太弱，容易受其他極性大的化合物的干擾，從而影響化合物定量的準(zhǔn)確性。為了能夠同時準(zhǔn)確的定量分析化合物4和化合物9，需增強(qiáng)化合物9的保留。所以為了增強(qiáng)化合物9的保留，本研究在現(xiàn)有的實(shí)驗(yàn)條件下進(jìn)行方法開發(fā)，旨在建立一個簡便，快速，專屬性強(qiáng)，適用于拉帕替尼中化合物4和化合物9的雜質(zhì)限量分析方法。
在研究過程中，經(jīng)過大量反復(fù)試驗(yàn)，專利技術(shù)人發(fā)現(xiàn)采用AquasilC18色譜柱、流動相B(有機(jī)相)使用乙腈時，效果較佳。
進(jìn)一步的，為了使化合物4和化合物9在色譜柱上都有一定的保留，且沒有殘留效應(yīng)(殘留，即在注射高濃度樣品之后的空白樣品(溶劑)中會在相應(yīng)的出峰時間出現(xiàn)色譜峰。在定量分析過程中，如果化合物有殘留會影響定量的準(zhǔn)確性，一般要求殘留不超過定量下限的20％)，本專利技術(shù)的專利技術(shù)人經(jīng)過艱苦卓絕的努力和實(shí)驗(yàn)研究，意外地發(fā)現(xiàn)采用AquasilC18色譜柱，使用表2所示的梯度條件，有機(jī)相(B)為乙腈，水相(A)為水(含5mM甲酸銨)，進(jìn)樣體積為5.00μL時效果較佳，典型的色譜圖如圖1所示，拉帕替尼，化合物4，化合物9以及利多卡因(內(nèi)標(biāo))的出峰時間分別為2.09min，0.54min，0.81min，1.21min。由于原料藥的濃度較高，所以通過六通閥從1.5分鐘將其切換至廢液瓶中，以免影響質(zhì)譜。
表2：AquasilC18的梯度條件
時間(min) 流動相B(％) 流速(ml/min) 0 55 0.6 1.0 55 0.6 1.5 95 0.6 2.5 95 0.6 2.6 55 0.6 3.6 55 0.6 因此，本專利技術(shù)提供了一種檢測拉帕替尼中4-(3-氟苯甲氧基)3-氯苯胺和2-(甲砜基)乙胺鹽酸鹽雜質(zhì)含量的方法。根據(jù)本專利技術(shù)的實(shí)施例，該方法是利用LC-MS/MS聯(lián)用檢測方法進(jìn)行的。
根據(jù)本專利技術(shù)的實(shí)施例，其中色譜條件為：色譜柱以十八烷基鍵合硅膠為填充劑；流動相由流動相A和流動相B組成，其中，所述流動相A為甲酸銨水溶液，所述流動相B為乙腈；洗脫方式為梯度洗脫。由此，可同時對拉帕替尼原料藥中的化合物4和化合物9進(jìn)行定量檢測，化合物4和化合物9均有較好的保留，且操作簡單，方便快捷。
根據(jù)本專利技術(shù)的實(shí)施例，其中色譜條件為：以十八烷基鍵合硅膠為填充劑；流動相由流動相A和流動相B組成，其中，所述流動相A為濃度為5毫摩爾/升的甲酸銨水溶液，所述流動相B為乙腈；流速0.5ml/min～0.7ml/min；柱溫25攝氏度～35攝氏度；進(jìn)樣量5μl，檢測波長261nm，洗脫方式為梯度洗脫。專利技術(shù)人發(fā)現(xiàn)，利用本專利技術(shù)的該方法，能夠快速有效的檢測拉帕替尼原料藥中的雜質(zhì)，且可同時定量分析化合物4和化合物9，檢測結(jié)果準(zhǔn)確可靠，操作簡便，快速，專屬性強(qiáng)，重復(fù)性好。
根據(jù)本專利技術(shù)的實(shí)施例，其中質(zhì)譜條件為：離子源為ESI源，采用正離子方式檢測、多重反應(yīng)監(jiān)測MRM模式；拉帕替尼的檢測離子對為m/z581—365；4-(3-氟苯甲氧基)3-氯苯胺的檢測離子對為m/z252—143；2-(甲砜基)乙胺的檢測離子對為m/z124—79；以及利多卡因的檢測離子對為m/z235—86；離子源參數(shù)為：氣簾氣(CUR)30psi；離子噴射電壓(IS)5500V；溫度(TEM)550℃；離子源GS150psi；離子源GS2260psi。由此，能夠準(zhǔn)確定量檢測拉帕替尼原料藥中的雜質(zhì)化合物4和化合物9的含量，并對其進(jìn)行限量，靈敏度高，準(zhǔn)確性好，重復(fù)性好。
根據(jù)本專利技術(shù)的實(shí)施例，色譜柱的柱溫為25攝氏度～35攝氏度。由此，有利于同時定量分析化合物4和化合物9，溫度過高或過低檢測效果均不理想。
根據(jù)本專利技術(shù)的實(shí)施例，所述流動相的流速為0.5ml/min～0.7ml/min。由此，化合物4、化合物9和拉帕替尼的分離效果理想，檢測時間短，檢測效率高。
根據(jù)本專利技術(shù)的實(shí)施例，在所述流動相A中，所述甲酸銨的濃度為5毫摩爾/升。由此，化合物4、化合物9和拉帕替尼的分離效果好，專屬性強(qiáng)，檢測準(zhǔn)確度高。
根據(jù)本專利技術(shù)的實(shí)施例，所述梯度洗脫的條件為：
時間(分鐘) 流動相A(％) 流動相B(％) 0 40～50 60～50 1.0 40～50 60～50 1.5 2～8 98～92 2.5 2～8 98～92 2.6 40～50 60～50 3.6 40～50 60～50 由此，化合物4、化合物9和拉帕替尼本文檔來自技高網(wǎng)...

【技術(shù)保護(hù)點(diǎn)】
一種檢測拉帕替尼中4?(3?氟苯甲氧基)3?氯苯胺和2?(甲砜基)乙胺鹽酸鹽雜質(zhì)含量的方法，其特征在于，所述方法是利用LC?MS/MS聯(lián)用檢測方法進(jìn)行的。

【技術(shù)特征摘要】
1.一種檢測拉帕替尼中4-(3-氟苯甲氧基)3-氯苯胺和2-(甲砜基)乙胺鹽酸鹽雜質(zhì)
含量的方法，其特征在于，所述方法是利用LC-MS/MS聯(lián)用檢測方法進(jìn)行的。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，其中，
色譜條件為：
色譜柱以十八烷基鍵合硅膠為填充劑；
流動相由流動相A和流動相B組成，其中，所述流動相A為甲酸銨水溶液，所述流動
相B為乙腈；
洗脫方式為梯度洗脫，
質(zhì)譜條件為：
離子源為ESI源，采用正離子方式檢測、多重反應(yīng)監(jiān)測MRM模式；
拉帕替尼的檢測離子對為m/z581—365；4-(3-氟苯甲氧基)3-氯苯胺的檢測離子對為
m/z252—143；2-(甲砜基)乙胺的檢測離子對為m/z124—79；以及利多卡因的檢測離子
對為m/z235—86；
離子源參數(shù)為：
氣簾氣30psi；
離子噴射電壓5500V；
溫度550℃；
離子源GS150psi；
離子源GS260psi。
3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述色譜柱的柱溫為25攝氏度～35攝
氏度。
4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述流動相的流速為0.5ml/min～0.7
ml/min。
5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，在所述流動相A中，所述甲酸銨的濃
度為5毫摩爾/升。
6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述梯度洗脫的條件為：
時間(分鐘)
流動相A(％)
流動相B(％)
0
40～50
60～50
1
40～50
60～50
1.5
2～8
98～92
2.5
2～8
98～92
2.6
40～50
60～50
3.6
40～50
60～50
7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，所述色譜柱為C18色譜柱。
8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的方法，其特征在于，包括：
(1)色譜條件：以十八烷基鍵合硅膠為填充劑；所述流動相A為濃度為5毫摩爾/升
的甲酸銨水溶液，所述流動相B為乙腈；流速0.5ml/min～0.7ml/min；柱溫25攝氏度～35
攝氏度；進(jìn)樣量5μl，檢測波長261nm，按照下表進(jìn)行梯度洗脫：
時間(分鐘)
流動相A(％)
流動相B(％)
0
40～50
60～50
1.0
40～50
60～50
1.5
2～8
98～92
2.5
2～8
98～92
2.6
40～50
60～50
3.6
40～50
60～50
(2)質(zhì)譜條件：離子源為ESI源，采用正離子方式檢測、多重反應(yīng)監(jiān)測MRM模式；
4-(3-氟苯甲氧基)-3-氯苯胺的檢測離子對為m/z:252—143；2-(甲砜基)乙胺的檢測離子對
為m/z:124—79；利多卡因內(nèi)標(biāo)的檢測...

【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：許勇，王學(xué)海，李莉娥，夏亞子，郭滌亮，樂洋，黃璐，楊仲文，余艷平，胡斌，胡虹，田華，馮權(quán)武，朱壘，肖強(qiáng)，黃松，于靜，
申請(專利權(quán))人：人福醫(yī)藥集團(tuán)股份公司，
類型：發(fā)明
國別省市：湖北;42