一種源于黃柏炮制品的藥根紅堿及其分離制備方法和用途技術

一種源于黃柏炮制品的藥根紅堿及其分離制備方法和用途，該方法包括：（1）精密稱取鹽酸藥根堿對照品，置蒸發皿中烘制，取出放涼，加入色譜級甲醇，微孔濾膜過濾，得烘制后的藥根堿對照品溶液。（2）將烘制后的藥根堿對照品溶液用制備液相進行分離，收集目標色譜峰的洗脫液并經葡聚糖凝膠柱純化；將純化過的洗脫液進行氮吹，冷凍干燥，待得到粉紅色粉末，即為所分離制備的藥根紅堿結晶。本發明專利技術所制備的藥根紅堿為在黃柏炮制飲片中發現的新化合物，該制備分離方法具有效率高、工藝穩定、操作簡便、成本低廉的特點，可實現大量藥根紅堿單體的高純度分離制備，且該藥根紅堿化合物具有很好的巨噬細胞的吞噬作用，有較強的免疫作用。

【技術實現步驟摘要】
一種源于黃柏炮制品的藥根紅堿及其分離制備方法和用途
本專利技術涉及中醫藥
，尤其涉及一種源于黃柏炮制品的藥根紅堿及其分離制備方法和用途。
技術介紹
黃柏始載于《神農本草經》，為蕓香科植物黃皮樹PhellodendronchinenseSchneid.或黃檗PhellodendronamurenseRupr.的干燥樹皮，已有兩千多年的藥用歷史，為中醫傳統清熱瀉火藥。歷代醫家在臨床應用中十分重視對黃柏的炮制，其炮制品最早見于晉代，葛洪的《肘后備急方》。黃柏的傳統的炮制方法有凈制、切制、蜜制、酒制、鹽制、炭制、乳汁制、童便制等16種炮制方法，而今多以酒制、鹽制及制炭為主。黃柏中主要含有小檗堿、巴馬汀、藥根堿、黃柏堿等生物堿類成分。現代藥理作用研究表明黃柏具有降血糖、降壓、抗癌、抗氧化等作用。黃柏在炮制過程中由于溫度的影響其化學成分會發生一定的變化，并因加入不同的輔料后，其藥性也會有所變化，最終導致藥理作用的差異。通過比較黃柏生品、酒炙品、鹽炙品的高效液相色譜圖發現，黃柏經炮制后有新的色譜峰生成。本實驗室前期研究結果表明，黃柏在炮制過程中有兩個化學成分發生了變化，其中一個是由小檗堿轉化而來的小檗紅堿，另一個是由巴馬汀轉化而來的巴馬紅汀，同時觀察到藥根堿的含量在炮制后有所降低，故對藥根堿單體進行了加熱處理，發現有一個新生成色譜峰且該峰與黃柏炮制后的高效液相色譜圖上的一個新生成色譜峰具有相同的保留時間。由此，推測黃柏炮制品中該新生成的化學成分是黃柏中藥根堿在炮制過程中轉化而來。結合實驗室前期研究結果，為整體觀察黃柏炮制前后的生物堿變化以及原小檗堿型生物堿在炮制過程中的變化規律，故對藥根堿（C20H20NO4）的炮制前后的化學轉化的新成分進行制備分離。
技術實現思路
針對上述問題，本專利技術提供一種源于黃柏炮制品的藥根紅堿及其分離制備方法和用途，該方法從黃柏炮制品中分離制備藥根紅堿，具有分離效率高、工藝穩定、操作簡便、成本低廉，可實現大量藥根紅堿單體的高含量高純度（98%以上）分離制備。為實現本專利技術的上述目的，本專利技術提供一種源于黃柏炮制品的藥根紅堿，分子式為C19H17NO4，命名為藥根紅堿，化學結構式如下。本專利技術還提供一種源于黃柏炮制品的藥根紅堿的分離制備方法，包括以下步驟。步驟1、藥根堿的模擬炮制：精密稱取鹽酸藥根堿對照品，置蒸發皿中，在160～216℃下烘制15～25min，取出放涼，加入色譜級甲醇，然后微孔濾膜（0.45μm）過濾，得烘制后的藥根堿對照品溶液。步驟2、藥根堿單體烘制品新成分的分離和制備。制備液相色譜條件：流動相A為水（其中100ml水含0.4ml二乙胺），B為甲醇；流動相流速：A與B的流動相比例為（70～90:30～10，體積比）；以反相C18硅膠鍵合固定相為色譜柱填料；柱溫25℃；紫外檢測波長為220～345nm；進樣量為100μL。將烘制后的藥根堿對照品溶液用制備液相進行分離，收集目標色譜峰的洗脫液并經葡聚糖凝膠柱純化；將純化過的洗脫液進行氮吹15min，置-80℃下冷凍干燥，待得到粉紅色粉末，即為所分離制備的藥根紅堿結晶。所述藥根紅堿用于制備免疫調節的藥物。與現有技術相比本專利技術的有益效果。本專利技術提供的源于黃柏炮制品的藥根紅堿及其分離制備方法和用途，所制備的藥根紅堿為在黃柏炮制飲片中發現的新化合物，該制備分離方法具有效率高、工藝穩定、操作簡便、成本低廉的特點，可實現大量藥根紅堿單體的高純度（98%以上）分離制備，且該藥根紅堿化合物具有很好的巨噬細胞的吞噬作用，有較強的免疫作用，相對于黃柏中原有的生物堿具有更強的免疫效果。附圖說明圖1為藥根紅堿的制備液相色譜圖，其中A為藥根紅堿。圖2為藥根紅堿的1H-NMR譜。圖3為藥根紅堿的13C-NMR譜。圖4為不同濃度藥根堿和藥根紅堿對細胞的相對吞噬率。具體實施方式下面結合具體實施例進一步詳細說明本專利技術，但不應將此理解為本專利技術上述主題的范圍僅限于下述的實施例，凡基于本專利技術上述內容實現的技術均屬于本專利技術的范圍。實施例1。1、儀器和材料。1.1儀器：半制備液相色譜儀（島津LC-10AT）；METTLERAE240型十萬分之一分析天平（瑞士METTLER）；FA1004B型電子天平（上海精密科學儀器有限公司）；YP5102型電子天平（上海光正醫療儀器有限公司）；KQ-250DB型數控超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）；氮吹儀（天津市恒奧科技發展有限公司）；101型電熱鼓風干燥箱（北京市永光明醫療儀器廠）；CHRIST真空冷凍干燥機（德國）；CAMAGLinomat-5型半自動點樣儀（瑞士）。1.2試藥：黃柏藥材購于四川省藥材公司；鹽酸藥根堿對照品購自四川省維克奇生物科技有限公司(批號130218)；藥根紅堿為實驗室自制，經高效液相色譜法測定，純度＞98%；薄層色譜硅膠板（青島海洋化工廠）；SephadexLH-20(Pharmacia)；甲醇分析純（天津市大茂化學試劑廠）；乙腈、甲醇色譜純；二乙胺分析純（天津市大茂化學試劑廠）；水為純凈水。2、本實施例提供一種源于黃柏炮制品的藥根紅堿的分離制備方法，包括以下步驟。步驟1、將黃柏中的指標性成分藥根堿對照品進行模擬炮制：精密稱取鹽酸藥根堿對照品5mg，置蒸發皿中，在216℃下烘制20min，取出放涼，加入色譜級甲醇5mL，然后微孔濾膜（0.45μm）過濾，得烘制后的藥根堿對照品溶液，進行新成分的制備。步驟2、藥根堿單體烘制品新成分的分離和制備，請參閱圖1。制備液相色譜條件：流動相A為水，其中100ml水含0.4ml二乙胺，B為甲醇；流動相流速：A與B的流動相比例為（80:20）；以反相C18硅膠鍵合固定相為色譜柱填料；柱溫25℃；紫外檢測波長為345nm；進樣量為100μL。將烘制后的藥根堿對照品溶液用制備液相進行分離，收集目標色譜峰的洗脫液并經葡聚糖凝膠柱純化；將純化過的洗脫液進行氮吹15min，置-80℃下冷凍干燥，待得到粉紅色粉末，即為所分離制備的藥根紅堿結晶。3、所述分離制備的藥根紅堿化合物的鑒定，請參閱圖2與圖3。分離得到的成分，經1H-NMR、13C-NMR分析鑒定。1H-NMR(MeOD，300MHz)δ:δH:7.53(1H，s，H-1)，6.80(1H，s，H-4)，3.12(2H，t，H-5)，4.65(2H，t，H-6)，9.34(1H，s，H-8)，7.62(1H，d，H-11)，7.01(1H，d，H-12)，8.22(1H，s，H-13)，3.93(3H，s，2-OCH3)，3.99(3H，s，2-OCH3)；13C-NMR(MeOD，75MHz)δ:δC:109.5(C-1)，149.4(C-2)，150.6(C-3)，115.9(C-4)，28.4(C-5)，56.0(C-6)，147.3(C-8)，124.9(C-8a)，169.3(C-9)，57.0(10-OCH3)，129.9(C-11)，129.5(C-12)，134.3(C-12a)，120.6(C-13)，136.6(C-14)，119.3(C-14a)，根據以上數據和文獻確定新成分的結構并由藥根堿轉化所得且外觀呈粉紅色，故將該新成分命名為藥根紅堿，分子式為C19H17NO4。所述藥根堿轉化途徑如下。4、本文檔來自技高網...

【技術保護點】
一種源于黃柏炮制品的藥根紅堿，其特征在于，分子式為C19H17NO4，命名為藥根紅堿，化學結構式如下。

【技術特征摘要】
1.一種源于黃柏炮制品的藥根紅堿，其特征在于，分子式為C19H17NO4，命名為藥根紅堿，化學結構式如下。2.如權利要求1所述的源于黃柏炮制品的藥根紅堿的分離制備方法，其特征在于，包括以下步驟：步驟1、藥根堿的模擬炮制：精密稱取鹽酸藥根堿對照品，置蒸發皿中烘制，取出放涼，加入色譜級甲醇，微孔濾膜過濾，微孔濾膜過濾，所述濾膜的孔徑為0.45μm，得烘制后的藥根堿對照品溶液；步驟2、藥根堿單體烘制品新成分的分離和制備：制備液相色譜條件：流動相A為水，其中100ml水含0.4ml二乙胺，B為甲醇；流動相流速：A與B的流動相體積比比例為（70-90:30-10）；以反相C18硅膠鍵合固...

【專利技術屬性】
技術研發人員：張凡，劉蓬蓬，賈天柱，徐珊，高慧，史輯，鞠成國，林桂梅，單國順，
申請(專利權)人：遼寧中醫藥大學，
類型：發明
國別省市：遼寧;21