乳制品中氯霉素類殘留的檢測方法技術

本發明專利技術公開了一種檢測乳制品中氯霉素類殘留的方法，所稱氯霉素類包括氯霉素、甲砜霉素和氟苯尼考，該方法包括：對待測樣品進行前處理，其中包括：稱取m1克待測樣品，加入v1毫升乙酸乙酯提取，以獲得第一提取物，利用v2毫升甲醇溶解第一提取物，加入v3毫升正己烷混勻，離心棄去上層，以獲得第二提取物，利用固相萃取柱凈化第二提取物，以獲得凈化物；利用液相-串聯質譜儀分析凈化物，以檢測該待測樣品中的氯霉素類殘留；其中，m1小于等于5，v1小于20，v2小于1，v3小于8。該方法不需使用內標，能避免檢測過程中的乳化現象，降低基質對檢測的干擾，同時檢測氯霉素類藥物，靈敏度高、回收率高、節約成本且易操作。

【技術實現步驟摘要】

本專利技術涉及食品檢測領域，具體的，本專利技術涉及一種乳制品中的氯霉素類殘留的檢測方法。
技術介紹
氯霉素、甲砜霉素、氟苯尼考(氟甲砜霉素)一般對革蘭氏陰性菌的作用較革蘭氏陽性菌強。氯霉素、甲砜霉素、氟苯尼考(氟甲砜霉素)在動物中具有較高的治療指數，曾是獸醫臨床常用的抗生素。氯霉素、甲砜霉素、氟苯尼考(氟甲砜霉素)類的主要毒副作用是抑制造血機能，發生不可逆轉的再生障礙性貧血。人和幼齡動物對氯霉素、甲砜霉素、氟苯尼考(氟甲砜霉素)均非常敏感。歐盟、中國以及許多國家將氯霉素、甲砜霉素、氟苯尼考(氟甲砜霉素)列為食品動物禁用獸藥，在動物性食品中規定氯霉素、甲砜霉素、氟苯尼考(氟甲砜霉素)是不得檢出的。但是，一些違法使用氯霉素、甲砜霉素、氟苯尼考(氟甲砜霉素)的現象非常嚴重，已經造成嚴重國際影響。氯霉素易溶于乙酸乙酯、甲醇，微溶于水，不溶于正已烷。目前氯霉素殘留的檢測方法大致可分為3大類：微生物測定法、免疫分析法和化學方法。確證主要采用液相色譜-質譜聯用(LC-MS/MS)和氣相色譜質譜聯用(GC-MS)。在儀器測定中，往往需要復雜的樣品中氯霉素的提取和凈化，稱為前處理。氯霉素殘留測定的前處理一般利用萃取法，提取試劑有乙酸乙酯、正乙烷等，如國家標準GB29688-2013《食品安全國家標準牛奶中氯霉素殘留量的測定液相色譜-串聯質譜法》，一般包括：以乙酸乙酯為提取溶劑，利用正己烷脫脂，同位素內標法測定產品中氯霉素藥物殘留。目前這些方法都不能避免乙酸乙酯提取過程中產生的乳化現象，會使得氯霉素的提取不完全，而目前一般采用內標法來避免這一問題帶來的檢測不準確，但由于內標物質價格昂貴，檢測單個樣品成本會較高。
技術實現思路
本專利技術旨在解決現有技術中的問題的至少之一或者至少提供一種商業選擇。為此，本專利技術的一個目的是提供一種不需內標的乳制品中的氯霉素類殘留的檢測方法。依據本專利技術的一方面，本專利技術提供一種乳制品中氯霉素類殘留的檢測方法，所述氯霉素類包括氯霉素、甲砜霉素和氟苯尼考，該方法包括：對待測樣品進行前處理，其中包括：稱取m1克待測樣品，加入v1毫升乙酸乙酯提取，以獲得第一提取物，利用v2毫升甲醇溶解所述第一提取物，加入v3毫升正己烷混勻，離心棄去上層，以獲得第二提取物，利用固相萃取柱凈化所述第二提取物，以獲得凈化物；利用液相-串聯質譜儀分析所述凈化物，以檢測所述待測樣品中的氯霉素類殘留；其中，m1小于等于5，v1小于20，v2小于1，v3小于8。所稱乳制品指，使用牛乳或羊乳及其加工制品為主要原料，加入或不加入適量的維生素、礦物質和其他輔料，使用法律法規及標準規定所要求的條件，加工制作的產品。乳制品包括液體乳，例如巴氏殺菌乳、滅菌乳、調制乳、發酵乳等；乳粉，例如全脂乳粉、脫脂乳粉、部分脫脂乳粉、調制乳粉、牛初乳粉；以及其他乳制品，例如奶油、奶酪等。本專利技術的這一方面的方法不需加入內標例如氘代氯霉素，能避免檢測過程中的乳化現象，降低基質對檢測的干擾，同時檢測氯霉素類藥物，靈敏度高、回收率高、節約成本且易操作。根據本專利技術的實施例，上述本專利技術這一方面的檢測乳制品中的氯霉素殘留的方法還可以具有以下附加技術特征至少之一：本專利技術的這一方面的方法中的步驟以及各步驟條件是根據乳制品的特性而多次試驗簡化步驟、優化條件而確定的。例如，相較于國標法中取試料10g，該方法稱取的待測樣品小于或者等于5g，這是由于乳制品富含蛋白質、脂肪、碳水化合物等，專利技術人試驗發現，如果稱樣量過大，乙酸乙酯提取時，乳化現象尤其嚴重，大大影響提取效果及檢測準確性，而稱樣量過小，會影響檢出限，因此多次試驗不同類型的乳制品，專利技術人確定出乳制品氯霉素類殘留檢測的較佳稱樣量為1g-5g。再例如，相較于國標法中兩次乙酸乙酯提取以及利用4％氯化鈉溶液溶解第一提取物，本專利技術的這一方法只需結合一次乙酸乙酯提取以及利用v2毫升的甲醇溶解第一提取物，就能達到很好的提取效果。乳制品的類型大致可分為以下幾類：第一類是液體乳類，主要包括殺菌奶、發酵奶、酸奶、調制乳等；第二類是乳粉類，包括全脂乳粉、脫脂乳粉、全脂加糖乳粉、調味乳粉、嬰幼兒乳粉和其他配方乳粉；第三類是煉乳類；第四類是乳脂肪類，包括稀奶油、奶油、無水奶油等；第五類是干酪類；第六類是乳冰淇淋類；第七類是其他乳制品類，主要包括干酪素、乳糖、奶片等。根據本專利技術的一個較佳實施例，當所述待測樣品為液體乳類時，m1＝5。如此，能夠減輕乳化現象，利于高效提取液體乳類中的氯霉素類殘留，以及利于利用該方法進行準確檢測。根據本專利技術的實施例，當待測樣品為液體乳類時，所述稱取m1克待測樣品，加入v1毫升乙酸乙酯提取，以獲得第一提取物，包括依次進行以下：加入15毫升乙酸乙酯，渦旋混勻，超聲提取20min，10000r/min下離心10min，取7.5毫升的上清液，于40℃±2氮氣吹干所述7.5毫升的上清液，以獲得所述第一提取物。上述具體的試劑的使用量以及操作條件，是專利技術人多次試驗、組合優化的，利于操作簡便、高效的提取5g液體乳類中的包含氯霉素類殘留的第一提取物。根據本專利技術的一個較佳實施例，當所述待測樣品為乳粉類時，m1＝1。如此，能夠減輕乳化現象，利于高效提取液體乳類中的氯霉素類殘留，以及利于利用該方法進行準確檢測。根據本專利技術的實施例，當所述待測樣品為乳粉類時，所述稱取m1克待測樣品，加入v1毫升乙酸乙酯提取，以獲得第一提取物，包括依次進行以下：加入5毫升超純水溶解所述待測樣品，加入15毫升乙酸乙酯，渦旋混勻，超聲提取20min，10000r/min下離心10min，取7.5毫升的上清液，于40℃±2氮氣吹干所述7.5毫升的上清液，以獲得所述第一提取物。上述具體的試劑的使用量以及操作條件，是專利技術人多次試驗、組合優化的，利于操作簡便、高效的獲得1g乳粉類中的包含氯霉素類殘留的第一提取物。根據本專利技術的一個較佳實施例，當所述待測樣品為乳脂肪類和/或干酪類時，m1＝2。根據本專利技術的實施例，當所述待測樣品為乳脂肪類和/或干酪類時，所述稱取m1克待測樣品，加入v1毫升乙酸乙酯提取，以獲得第一提取物，包括依次進行以下：加入5毫升超純水和5毫升正己烷渦旋溶解所述待測樣品，棄上清液后加入15毫升乙酸乙酯，渦旋混勻，超聲提取20min，10000r/min下離心10min，取7.5毫升的上清液，于40℃±2氮氣吹干所述7.5毫升的上清液，以獲得所述第一提取物。對于這類脂肪含量高的乳制品，在乙酸乙酯提取前先利用適量正乙烷除脂，能夠降低乙酸乙酯提取時的乳化本文檔來自技高網...

【技術保護點】
一種乳制品中氯霉素類殘留的檢測方法，所述氯霉素類包括氯霉素、甲砜霉素和氟苯尼考，其特征在于，包括：對待測樣品進行前處理，其中包括：稱取m1克待測樣品，加入v1毫升乙酸乙酯提取，以獲得第一提取物，利用v2毫升甲醇溶解所述第一提取物，加入v3毫升正己烷混勻，離心棄去上層，以獲得第二提取物，利用固相萃取柱凈化所述第二提取物，以獲得凈化物；利用液相?串聯質譜儀分析所述凈化物，以檢測所述待測樣品中的氯霉素類殘留；其中，m1小于等于5，v1小于20，v2小于1，v3小于8。

【技術特征摘要】
1.一種乳制品中氯霉素類殘留的檢測方法，所述氯霉素類包括氯霉素、甲砜霉素和氟
苯尼考，其特征在于，包括：
對待測樣品進行前處理，其中包括：
稱取m1克待測樣品，加入v1毫升乙酸乙酯提取，以獲得第一提取物，
利用v2毫升甲醇溶解所述第一提取物，加入v3毫升正己烷混勻，離心棄去上層，以獲得
第二提取物，
利用固相萃取柱凈化所述第二提取物，以獲得凈化物；
利用液相-串聯質譜儀分析所述凈化物，以檢測所述待測樣品中的氯霉素類殘留；其
中，m1小于等于5，v1小于20，v2小于1，v3小于8。
2.權利要求1的方法，其特征在于，當所述待測樣品為液態乳制品時，m1＝5。
3.權利要求2的方法，其特征在于，所述稱取m1克待測樣品，加入v1毫升乙酸乙酯提取，
以獲得第一提取物，包括依次進行以下：
加入15毫升乙酸乙酯，渦旋混勻，超聲提取20min，10000r/min下離心10min，取7.5毫升
的上清液，于40℃±2氮氣吹干所述7.5毫升的上清液，以獲得所述第一提取物。
4.權利要求1的方法，其特征在于，當所述待測樣品為乳粉類時，m1＝1。
5.權利要求4的方法，其特征在于，所述稱取m1克待測樣品，加入v1毫升乙酸乙酯提取，
以獲得第一提取物，包括依次進行以下：
加入5毫升超純水溶解所述待測樣品，加入15毫升乙酸乙酯，渦旋混勻，超聲提取
20min，10000r/min下離心10min，取7.5毫升的上清液，于40℃±2氮氣吹干所述7.5毫升的
上清液，以獲得所述第一提取物。
6.權利要求1的方法，其特征在于，當所述待測樣品為乳...

【專利技術屬性】
技術研發人員：李照，張雪峰，崔向云，徐向峰，常建軍，宋曉東，
申請(專利權)人：內蒙古蒙牛乳業集團股份有限公司，
類型：發明
國別省市：內蒙古;15