本發明專利技術公開一種用于誘導沉香結香的內生菌液體種的培養方法。本發明專利技術涉及一種植物內生菌的培養方法，其特征在于：它包括如下步驟：培養液的制作、滅菌處理、移入接種室、接種、氣調處理、內生菌的生長。本發明專利技術具有如下優點：本發明專利技術的植物內生菌的培養整套設備投資額度少，步驟簡單、容易操作，所培養的內生菌存活率高、生菌生長速度快、培養成本低，本發明專利技術中的液體培養基采用的是純天然、無污染的材料，使內生菌培養出來對后續的使用具有更好的效果。
【技術實現步驟摘要】
本專利技術涉及生菌的培養
，具體是指。
技術介紹
植物內生菌是一定階段或全部階段生活于健康植物的組織和器官內部的真菌或細菌，普遍存在于高等植物中，木本、草本植物、單子葉植物和雙子葉植物內均有內生細菌，目前已成為生物防治中有潛力的微生物農藥、增產菌或作為潛在的生防載體菌而加以利用。植物內生菌是一類次生代謝產物豐富、應用前景廣闊的資源微生物。近年來，植物內生菌由于能夠產生豐富多樣的具有農藥活性的次生代謝產物，在自然界中具有重要的生態學作用，引起了人們廣泛的關注并取得很大進展，從微生物中尋找發現新型先導化合物，是新農藥研制的重要途徑。內生菌作為微生物中的重要類群，其物種豐富，數量龐大，這為新農藥的研究和開發提供了巨大的資源庫。現有技術中開始利用植物內生菌誘導白木香樹結香，眾所周知，沉香樹在自然界中因遭受雷擊、風折、蟲害感染或人畜為害等各種傷害，自身會分泌樹脂以修補受傷部位，但某些由于真菌感染受傷的部位很難完成真正意義上的愈合，因此開啟了為治愈創傷持久的奇妙的沉香制造與累積過程，甚至要經過數百年漫長歲月的洗禮，才能誕生珍稀優質的沉香，沉香的稀有也促使了人工生產沉香的發展，利用植物內生菌誘導白木香樹結香，結香的速度快、所產沉香的質量好，所以對植物內生菌的培養顯的尤為重要，但是現有的植物內生菌的液體種在培養時針對性差，存在培養成本高、培養時間長和培養出來的生菌存活率低等缺陷，而且一般培養植物內生菌的培養基的組分也不是純天然的，會添加一些化學物質，由于在利用生菌誘導白木香樹產香時是要將生菌寄生到白木香樹內，這樣利用含有化學物質的培養基培養出來的生菌對白木香樹結香具有一定的影響。
技術實現思路
本專利技術要解決的技術問題是克服以上技術缺陷，提供一種生菌存活率高、生菌生長速度快、培養成本低、純天然的。為解決上述技術問題，本專利技術提供的技術方案為:，它包括如下步驟:(1)培養液的制作液體種培養基配方:馬鈴薯70 %，木肩17 %、麩皮5 %、玉米粉4 %、黃豆粉1 %、蛋白胨0.5%、葡萄糖1 %、磷酸二輕鉀0.2%、硫酸鎂0.2%、維生素0.1% ;按上述配方把原材料稱好后，先把馬鈴薯切薄片置于干凈的不銹鋼鍋中，加木肩，麩皮，玉米粉，黃豆粉加水煮沸，煮至馬鈴薯熟透而不爛為宜，用400目以上濾網過濾，濾出原液加入蛋白胨、葡萄糖、磷酸二輕鉀、硫酸鎂、維生素，再加入原培養基配方總重量的12-15倍的潔凈水調勻，再把培養液裝入培養瓶中；(2)滅菌處理把液體種培養中需要應用到的工具，如需要更換的膠頭、氣管、氣接頭、氣源活性碳濾芯，把需要滅菌的工具裝入專用聚丙稀袋中，與液體種培養瓶一并放入滅菌鍋中高壓滅菌；(3)移入接種室液體種培養瓶滅菌冷卻后，移入無菌室或接種箱，準備好一系列工具，利用巴斯消毒或紫外線燈照射半小時后，工作人員更換工作服進入接種室接種；(4)接種在接種箱或接種室的無菌環境下，把原種瓶瓶口與培養瓶瓶口，用75度酒精擦拭，在過酒精燈火焰燒過，打開培養瓶瓶口，把內生菌液體種原種倒入培養瓶當中，更換培養瓶培養專用膠頭，連接好培養瓶相關氣接頭，接種完成；(5)氣調處理培養瓶接好種后移入培養室，打開空氣壓縮機，使其空轉排氣5-10分鐘，再連接培養瓶之前，培養氣體經過滅過菌的活性碳濾芯，把氣體調壓到適當壓力，把無菌氣體送到培養瓶當中，同時打開膠頭上用棉花塞住的排氣閥，使其形成正壓，來防止雜菌進入瓶中污染，在外圍需要連接氣接頭時，必須用75度酒精擦拭，在酒精燈火焰上方完成連接；(6)內生菌的生長在常溫20度左右，經過3-5天的氣調培養，內生菌液體種完成培養。本專利技術具有如下優點:本專利技術的植物內生菌的培養整套設備投資額度少，步驟簡單、容易操作，所培養的內生菌存活率高、生菌生長速度快、培養成本低，本專利技術中的液體培養基采用的是純天然、無污染的材料，使內生菌培養出來對后續的使用具有更好的效果。【附圖說明】圖1是本專利技術的培養瓶的結構示意圖。圖2是本專利技術的內生菌菌種在培養狀態下的結構示意圖。圖3是本專利技術的內生菌菌種在導出狀態下的結構示意圖。圖4是本專利技術的多瓶一起培養的結構示意圖。如圖所示:1、培養瓶，2、空氣輸入口，3、膠頭，4、排氣口，5、菌種壓力輸入口，6、導氣管，7、培養液，8、氣泡，9、1號培養瓶，10、2號培養瓶，11、3號培養瓶，12、4號培養瓶，13、5號培養瓶，14、6號培養瓶，15、連通器，16、管道滅菌輸入端口，17、培養氣體輸入端口，18、壓力氣體輸入端口，19、液體菌種輸入端口，20、閥門。【具體實施方式】現有技術中用植物內生菌誘導白木香樹結香的菌種主要包括以下菌種:假單胞菌屬、腸桿菌屬、芽孢桿菌屬、土壤桿菌屬、泛菌屬、甲基桿菌屬、鏈霉菌屬、鏈輪絲菌屬、游動放線菌屬、諾氏卡菌屬、小單胞菌等，利用植物內生菌誘導白木香樹結香，結香的速度快、所產沉香的質量好，便于推廣，在具體實施時，利用本專利技術的培養方法將液體種培養好之后，然后用接種機將液體種導入白木香樹內。實施例一—種用于誘導沉香結香的內生菌液體種的培養方法，其特征在于:它包括如下步驟:(1)培養液的制作液體種培養基配方:馬鈴薯70%，木肩17%、麩皮5%、玉米粉4%、黃豆粉1%、蛋白胨0.5%、葡萄糖1 %、磷酸二輕鉀0.2%、硫酸鎂0.2%、維生素0.1% ;按上述配方把原材料稱好后，先把馬鈴薯切薄片置于干凈的不銹鋼鍋中，加木肩，麩皮，玉米粉，黃豆粉加水煮沸，煮至馬鈴薯熟透而不爛為宜，用500目的濾網過濾，濾出原液加入蛋白胨、葡萄糖、磷酸二輕鉀、硫酸鎂、維生素，再加入原培養基配方總重量的12倍的潔凈水調勻，再把培養液裝入培養瓶中；(2)滅菌處理把液體種培養中需要應用到的工具，如需要更換的膠頭、氣管、氣接頭、氣源活性碳濾芯，把需要滅菌的工具裝入專用聚丙稀袋中，與液體種培養瓶一并放入滅菌鍋中高壓滅菌；(3)移入接種室液體種培養瓶滅菌冷卻后，移入無菌室，準備好一系列工具，利用紫外線燈照射半小時后，工作人員更換工作服進入接種室接種；(4)接種在接種箱或接種室的無菌環境下，把原種瓶瓶口與培養瓶瓶口，用75度酒精擦拭，在過酒精燈火焰燒過，打開培養瓶瓶口，把內生菌液體種原種倒入培養瓶當中，更換培養瓶培養專用膠頭，連接好培養瓶相關氣接頭，接種完成；(5)氣調處理培養瓶接好種后移入培養室，打開空氣壓縮機，使其空轉排氣5分鐘，再連接培養瓶之前，培養氣體經過滅過菌的活性碳濾芯，把氣體調壓到適當壓力，把無菌氣體送到培養瓶當中，同時打開膠頭上用棉花塞住的排氣閥，使其形成正壓，來防止雜菌進入瓶中污染，在外圍需要連接氣接頭時，必須用75度酒精擦拭，在酒精燈火焰上方完成連接；(6)內生菌的生長在常溫20度左右，經過3天的氣調培養，內生菌液體種完成培養。實施例二—種用于誘導沉香結香的內生菌液體種的培養方法，其特征在于:它包括如下步驟:(1)培養液的制作液體種培養基配方:馬鈴薯70 %，木肩17 %、麩皮5 %、玉米粉4 %、黃豆粉1 %、蛋白胨0.5%、葡萄糖1 %、磷酸二輕鉀0.2%、硫酸鎂0.2%、維生素0.1% ;按上述配方把原材料稱好后，先當前第1頁1 2 本文檔來自技高網...
【技術保護點】
一種用于誘導沉香結香的內生菌液體種的培養方法，其特征在于：它包括如下步驟：(1)培養液的制作液體種培養基配方：馬鈴薯70％，木屑17％、麩皮5％、玉米粉4％、黃豆粉1％、蛋白胨0.5％、葡萄糖1％、磷酸二輕鉀0.2％、硫酸鎂0.2％、維生素0.1％；按上述配方把原材料稱好后，先把馬鈴薯切薄片置于干凈的不銹鋼鍋中，加木屑，麩皮，玉米粉，黃豆粉加水煮沸，煮至馬鈴薯熟透而不爛為宜，用400目以上濾網過濾，濾出原液加入蛋白胨、葡萄糖、磷酸二輕鉀、硫酸鎂、維生素，再加入原培養基配方總重量的12?15倍的潔凈水調勻，再把培養液裝入培養瓶中；(2)滅菌處理把液體種培養中需要應用到的工具，如需要更換的膠頭、氣管、氣接頭、氣源活性碳濾芯，把需要滅菌的工具裝入專用聚丙稀袋中，與液體種培養瓶一并放入滅菌鍋中高壓滅菌；(3)移入接種室液體種培養瓶滅菌冷卻后，移入無菌室或接種箱，準備好一系列工具，利用巴斯消毒或紫外線燈照射半小時后，工作人員更換工作服進入接種室接種；(4)接種在接種箱或接種室的無菌環境下，把原種瓶瓶口與培養瓶瓶口，用75度酒精擦拭，在過酒精燈火焰燒過，打開培養瓶瓶口，把內生菌液體種原種倒入培養瓶當中，更換培養瓶培養專用膠頭，連接好培養瓶相關氣接頭，接種完成；(5)氣調處理培養瓶接好種后移入培養室，打開空氣壓縮機，使其空轉排氣5?10分鐘，再連接培養瓶之前，培養氣體經過滅過菌的活性碳濾芯，把氣體調壓到適當壓力，把無菌氣體送到培養瓶當中，同時打開膠頭上用棉花塞住的排氣閥，使其形成正壓，來防止雜菌進入瓶中污染，在外圍需要連接氣接頭時，必須用75度酒精擦拭，在酒精燈火焰上方完成連接；(6)內生菌的生長在常溫20度左右，經過3?5天的氣調培養，內生菌液體種完成培養。...
【技術特征摘要】
【專利技術屬性】
技術研發人員：張傳金，
申請(專利權)人：張傳金，
類型：發明
國別省市：廣東;44
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