本發(fā)明專利技術(shù)公開了PIGK基因可以作為骨質(zhì)疏松癥早期診斷的分子標(biāo)志物。本發(fā)明專利技術(shù)利用基因芯片和QPCR的方法發(fā)現(xiàn)PIGK基因在正常人和骨質(zhì)疏松癥患者的血液中的表達(dá)存在顯著差異，即可以通過檢測(cè)血液中PIGK基因表達(dá)情況來判斷受試者是否患有骨質(zhì)疏松癥。根據(jù)兩者的相關(guān)性，本發(fā)明專利技術(shù)開發(fā)了一種診斷骨質(zhì)疏松的試劑盒，該試劑盒通過檢測(cè)PIGK基因的表達(dá)從而進(jìn)行骨質(zhì)疏松的診斷。本發(fā)明專利技術(shù)的診斷試劑盒可用于疾病的早期診斷，在臨床上具有廣泛的應(yīng)用前景。
【技術(shù)實(shí)現(xiàn)步驟摘要】
本專利技術(shù)屬于分子診斷領(lǐng)域，設(shè)及一種用于骨質(zhì)疏松癥診斷的分子標(biāo)志物，具體設(shè) 及血液中的分子標(biāo)志物-PIGK基因在制備診斷骨質(zhì)疏松癥的產(chǎn)品中的應(yīng)用。
技術(shù)介紹
骨質(zhì)疏松癥（osteoporosis, 0巧是多種原因引起的一組骨病，骨組織有正常的巧 化，巧鹽與基質(zhì)呈正常比例，W單位體積內(nèi)骨組織量減少為特點(diǎn)的代謝性骨病變。在多數(shù)骨 質(zhì)疏松中，骨組織的減少主要由于骨質(zhì)吸收增多所致。W骨骼疼痛、易于骨折為特征。 世界衛(wèi)生組織已將骨質(zhì)疏松列為僅次于屯、血管疾病的第二大危害人類健康的疾 病。據(jù)中國健康促進(jìn)基金會(huì)最新發(fā)布的《2013中國骨質(zhì)疏松骨折防治藍(lán)皮書》顯示，骨質(zhì) 疏松骨折是一種脆性骨折，即在受到輕微創(chuàng)傷或日常活動(dòng)中遭受低能量外傷即可發(fā)生的骨 折。骨質(zhì)疏松骨折的常見部位是脊椎、髓骨和前臂遠(yuǎn)端。我國50歲W上人群約6944萬人 患有骨質(zhì)疏松癥，約2. 1億人骨量偏低。北京等地區(qū)流行病學(xué)調(diào)查顯示，50歲W上女性脊椎 骨折的患病率為15%，相當(dāng)于每7個(gè)50歲W上的女性中就有一個(gè)發(fā)生過脊椎骨折。 骨質(zhì)疏松癥的檢測(cè)包括實(shí)驗(yàn)室檢查指標(biāo)的檢測(cè)和輔助檢測(cè)。 實(shí)驗(yàn)室檢查指標(biāo)： 骨質(zhì)疏松癥患者部分血清學(xué)生化指標(biāo)可W反應(yīng)骨轉(zhuǎn)換（包括骨形成和骨吸收） 狀態(tài)，在骨的高轉(zhuǎn)換狀態(tài)（例如I型骨質(zhì)疏松癥）下，運(yùn)些指標(biāo)可W升高，也可用于監(jiān)測(cè) 治療的早期反應(yīng)。但其在骨質(zhì)疏松癥中的臨床意義仍有待于進(jìn)一步研究。運(yùn)些生化測(cè)量 指標(biāo)包括：骨特異的堿性憐酸酶度one-specific a化aline地OS地atase，反應(yīng)骨形成）、 抗酒石酸酸性憐酸酶（tartrated resistant acid phosphatse，反應(yīng)骨吸收）、骨巧素 (Osteocalcin,反應(yīng)骨形成）、1型原膠原膚（Type I procollage噸eptidase，反應(yīng)骨形 成）、尿化晚嘟（Urinary pyridinoline)和脫氧R比晚嘟（Urinary deoxypyridinoline，反 應(yīng)骨吸收）、I型膠原的N-C-末端交聯(lián)膚（cross-linked N-and C-telopeptide of type I collagen,反應(yīng)骨吸收）。正如前面所提到的，使用生化指標(biāo)檢測(cè)骨質(zhì)疏松癥的精確度不 夠。 輔助檢查：包括骨影像學(xué)檢查和骨密度檢測(cè)。輔助檢查的對(duì)象一般都是骨質(zhì)疏松 癥的晚期患者，不能用于早期骨質(zhì)疏松癥患者的篩查。 基于現(xiàn)有技術(shù)中檢測(cè)骨質(zhì)疏松癥的手段的局限性，尋找一種有效的能夠在早期即 可診斷骨質(zhì)疏松癥發(fā)生的方法是亟待解決的問題。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路
為了彌補(bǔ)現(xiàn)有技術(shù)的不足，本專利技術(shù)的目的在于提供一種可用于骨質(zhì)疏松癥 (Osterart虹itis，0A)早期診斷的分子標(biāo)志物。相比傳統(tǒng)的骨質(zhì)疏松癥的診斷方法，使用 基因標(biāo)志物來診斷骨質(zhì)疏松癥的具有及時(shí)性、特異性和靈敏性，從而使患者在疾病早期就 能知曉疾病風(fēng)險(xiǎn)，針對(duì)風(fēng)險(xiǎn)高低，采取相應(yīng)的預(yù)防和治療措施。 為了實(shí)現(xiàn)上述目的，本專利技術(shù)采用如下技術(shù)方案： 本專利技術(shù)提供了檢測(cè)PIGK基因表達(dá)的產(chǎn)品在制備診斷骨質(zhì)疏松癥的工具中的應(yīng) 用。 進(jìn)一步，上面所提到的檢測(cè)PIGK基因表達(dá)的產(chǎn)品包括：通過RT-PCR、實(shí)時(shí)定量 PCR、免疫檢測(cè)、原位雜交、忍片或高通量測(cè)序平臺(tái)檢測(cè)PIGK基因表達(dá)水平W診斷骨質(zhì)疏松 癥的產(chǎn)品。 進(jìn)一步，所述用RT-PCR診斷骨質(zhì)疏松癥的產(chǎn)品至少包括一對(duì)特異擴(kuò)增PIGK基因 的引物；所述用實(shí)時(shí)定量PCR診斷骨質(zhì)疏松癥的產(chǎn)品至少包括一對(duì)特異擴(kuò)增PIGK基因的引 物；所述用免疫檢測(cè)診斷骨質(zhì)疏松癥的產(chǎn)品包括：與PIGK蛋白特異性結(jié)合的抗體；所述用 原位雜交診斷骨質(zhì)疏松癥的產(chǎn)品包括：與PIGK基因的核酸序列雜交的探針；所述用忍片診 斷骨質(zhì)疏松癥的產(chǎn)品包括：蛋白忍片和基因忍片；其中，蛋白忍片包括與PIGK蛋白特異性 結(jié)合的抗體，基因忍片包括與PIGK基因的核酸序列雜交的探針。 在本專利技術(shù)的具體實(shí)施方案中，所述用實(shí)時(shí)定量PCR診斷骨質(zhì)疏松癥的產(chǎn)品至少包 括一對(duì)特異擴(kuò)增PIGK基因的引物的序列如SEQIDNO. 3和SEQIDNO. 4所示。 優(yōu)選地，所述診斷工具包括忍片、試劑盒、試紙或高通量測(cè)序平臺(tái)。其中，高通量測(cè) 序平臺(tái)是一種特殊的診斷工具，檢測(cè)PIGK基因表達(dá)的產(chǎn)品可W應(yīng)用于該平臺(tái)實(shí)現(xiàn)對(duì)PIGK 基因的表達(dá)情況的檢測(cè)。隨著高通量測(cè)序技術(shù)的發(fā)展，對(duì)一個(gè)人的基因表達(dá)譜的構(gòu)建將成 為十分便捷的工作。通過對(duì)比疾病患者和正常人群的基因表達(dá)譜，容易分析出哪個(gè)基因的 異常與疾病相關(guān)。因此，在高通量測(cè)序中獲知PIGK基因的異常與骨質(zhì)疏松癥相關(guān)也屬于 PIGK基因的用途，同樣在本專利技術(shù)的保護(hù)范圍之內(nèi)。 本專利技術(shù)還提供了一種診斷骨質(zhì)疏松癥的工具，所述診斷工具包括忍片、試劑盒、試 紙、或高通量測(cè)序平臺(tái)。 其中，所述忍片包括基因忍片、蛋白質(zhì)忍片；所述基因忍片包括固相載體W及固定 在固相載體的寡核巧酸探針，所述寡核巧酸探針包括用于檢測(cè)PIGK基因轉(zhuǎn)錄水平的針對(duì) PIGK基因的寡核巧酸探針；所述蛋白質(zhì)忍片包括固相載體W及固定在固相載體的PIGK蛋 白的特異性抗體；所述基因忍片可用于檢測(cè)包括PIGK基因在內(nèi)的多個(gè)基因（例如，與骨質(zhì) 疏松癥相關(guān)的多個(gè)基因）的表達(dá)水平。所述蛋白質(zhì)忍片可用于檢測(cè)包括PIGK蛋白在內(nèi)的 多個(gè)蛋白質(zhì)（例如與骨質(zhì)疏松癥相關(guān)的多個(gè)蛋白質(zhì)）的表達(dá)水平。通過將多個(gè)與骨質(zhì)疏松 癥的標(biāo)志物同時(shí)檢測(cè)，可大大提高骨質(zhì)疏松癥診斷的準(zhǔn)確率。[001引其中，所述試劑盒包括基因檢測(cè)試劑盒和蛋白免疫檢測(cè)試劑盒；所述基因檢測(cè)試 劑盒包括用于檢測(cè)PIGK基因轉(zhuǎn)錄水平的試劑；所述蛋白免疫檢測(cè)試劑盒包括PIGK蛋白的 特異性抗體。進(jìn)一步，所述試劑包括使用RT-PCR、實(shí)時(shí)定量PCR、免疫檢測(cè)、原位雜交或忍片 方法檢測(cè)PIGK基因表達(dá)水平過程中所需的試劑。優(yōu)選度，所述試劑包括針對(duì)PIGK基因的 引物和/或探針。根據(jù)PIGK基因的核巧酸序列信息容易設(shè)計(jì)出可W用于檢測(cè)PIGK基因表 達(dá)水平的引物和探針。 與PIGK基因的核酸序列雜交的探針可W是DNA、RNA、DNA-RNA嵌合體、PNA或其它 衍生物。所述探針的長度沒有限制，只要完成特異性雜交、與目的核巧酸序列特異性結(jié)合， 任何長度都可W。所述探針的長度可短至25、20、15、13或10個(gè)堿基長度。同樣，所述探針 的長度可長至60、80、100、150、300個(gè)堿基對(duì)或更長，甚至整個(gè)基因。由于不同的探針長度 對(duì)雜交效率、信號(hào)特異性有不同的影響，所述探針的長度通常至少是14個(gè)堿基對(duì)，最長一 般不超過30個(gè)堿基對(duì)，與目的核巧酸序列互補(bǔ)的長度W15-25個(gè)堿基對(duì)最佳。所述探針自 身互補(bǔ)序列最好少于4個(gè)堿基對(duì)，W免影響雜交效率。 所述高通量測(cè)序平臺(tái)包括檢測(cè)PIGK基因表達(dá)水平的試劑。 所述試紙包括試紙載體和固定在試紙載體上的寡核巧酸，所述寡核巧酸能夠檢測(cè) PIGK基因的轉(zhuǎn)錄水平。 進(jìn)一步，所述PIGK蛋白的特異性抗體包括單克隆抗體、多克隆抗體。所述PIGK 蛋白的特異性抗體包括完整的抗體分子、抗體的任何片段或修飾（例如，，嵌合抗體、scFv、 Fab、F(ab')2、Fv等。只要所述片段能夠保留與PIGK蛋白的結(jié)合能力即可。用于蛋白質(zhì) 水平的抗體的制備時(shí)本領(lǐng)域技術(shù)人員公知的，并且本專利技術(shù)可W使用任何方本文檔來自技高網(wǎng)...
【技術(shù)保護(hù)點(diǎn)】
檢測(cè)PIGK基因表達(dá)的產(chǎn)品在制備診斷骨質(zhì)疏松癥的工具中的應(yīng)用。
【技術(shù)特征摘要】
【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：宋宏濤，任靜，楊承剛，
申請(qǐng)(專利權(quán))人：北京泱深生物信息技術(shù)有限公司，
類型：發(fā)明
國別省市：北京;11
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