一種測定人血清中胃蛋白酶原I/II含量的試劑盒，包含試劑R1，R2以及校準液；所述試劑R1為PH值為7.2-8.6的緩沖液，所述試劑R2為抗人PGI抗體膠乳試劑或抗人PGII抗體膠乳試劑；所述標準品為含有定量的PGI或PGII的重組蛋白或者是從人血清中提取出來的天然PGI或PGII;其特征在于，所述試劑盒還包括用于消除乳糜的試劑R3，所述試劑R3的由辛基甲氧基肉桂酸酯、聚氧丙烯聚氧乙烯丙二醇醚和聚乙二醇-硫酸菊聚糖鎂組成。本發(fā)明專利技術試劑盒具有較高的檢測靈敏度，抗乳糜干擾能力極強，可適用于含有重度乳糜的檢測。
【技術實現(xiàn)步驟摘要】
本專利技術涉及一種采用乳膠增強免疫比濁法測定人血清中胃蛋白酶原I和胃蛋白 酶原II含量的試劑盒。
技術介紹
胃蛋白酶原（Pepsinogen，PG)是胃液中胃蛋白酶的無活性前體，是胃粘膜分泌的一種 門冬氨酸蛋白酶前體，是分子量42000Da的單鏈多肽，在胃內(nèi)轉(zhuǎn)變?yōu)榫哂谢钚缘奈傅鞍酌浮?根據(jù)生化性質(zhì)、免疫原性、細胞來源及組織內(nèi)分布，胃蛋白酶原可分成胃蛋白 酶原I(PGI)、胃蛋白酶原II(PGII)兩個亞群：其中1~5組分免疫原性近似，稱為 PGI(PGA)，主要由胃底腺的主細胞和頸粘液細胞分泌；6~7組分被稱為PGII(PGC)，除 由上述兩種細胞分泌外，幽門腺的黏液細胞、賁門腺以及十二指腸上段的Brunner腺也能 產(chǎn)生PGII，胃粘膜合成的PGII約為總量的25%。目前檢測血清胃蛋白酶原含量的方法主要有酶聯(lián)免疫吸附測定（ELISA)、放射免 疫分析（RIA)、化學發(fā)光法和膠乳免疫比濁法等。ELISA方法精確、定量，具有很高的敏感性，但操作程序繁瑣，耗時長，不能適應大 規(guī)模體檢篩查或急診的需要；RIA方法靈敏度高，特異性強，但放射免疫反應是競爭性的反 應，測得的值是相對量而非絕對量，且存在輻射和放射性污染；化學發(fā)光法精確度高，檢測 速度快，但成本高昂，對配套設施要求高，無法應用于廣大中、基層的醫(yī)院和醫(yī)療衛(wèi)生機構(gòu)； 膠乳免疫比濁法具有操作簡便快速、自動化、定量準確、敏感度高等優(yōu)點，可滿足門、急診和 大規(guī)模體檢篩查等需要。 現(xiàn)有膠乳免疫比濁試劑，由于其檢測原理是測定反應形成的免疫復合物的濁度， 因此極易受到乳糜干擾的影響。目前應對這個問題的方法，主要是使用專門的乳糜消除劑 對樣本進行預處理。而在大規(guī)模的人群普查、健康體檢篩查和臨床病人檢驗時，經(jīng)常會遇到 大量的乳糜、溶血等渾濁樣本，此時通過購置樣本處理劑，對這些樣本進行單獨處理，將會 極大地增加操作人員的工作量，提高運營成本，也為臨床檢驗的組織安排帶來難題。中國專 利文獻CN103698525A公開了一種試劑盒，利用脂肪酶或聚乙二醇-硫酸菊聚糖鎂來消除乳 糜干擾，這種方法提高了試劑盒的抗乳糜干擾能力，但是對于重型乳糜檢測效果不夠理想； 其次，僅公開了適用胃蛋白酶原I的方法，沒有提及胃蛋白酶原II。因此，研制一種能夠更好地消除乳糜干擾的膠乳免疫比濁法的胃蛋白酶原I/II檢測試劑盒，顯得十分必要。
技術實現(xiàn)思路
為了解決上述的技術問題，本專利技術實現(xiàn)了以下技術： 一種測定人血清中胃蛋白酶原I和胃蛋白酶原II含量的試劑盒，包含試劑Rl，R2以及 校準液；所述試劑Rl為PH值為7. 2-8. 6的緩沖液，所述試劑R2為抗人PGI抗體膠乳試劑 或抗人PGII抗體膠乳試劑；所述標準品為含有定量的PGI或PGII的重組蛋白或者是從人 血清中提取出來的天然PGI或PGII;其特征在于，所述試劑盒還包括用于消除乳糜的試劑 R3,所述試劑R3的由辛基甲氧基肉桂酸酯、聚氧丙烯聚氧乙烯丙二醇醚和聚乙二醇-硫酸 菊聚糖鎂組成。 所述試劑R3組分的重量份組成為： 辛基甲氧基肉桂酸酯20-50 聚氧丙烯聚氧乙烯丙二醇醚20-100 聚乙二醇-硫酸菊聚糖鎂100-200。 所述的PGI/PGII檢測試劑盒中的Rl試劑主要包含緩沖液，無機鹽，加速劑和防 腐劑。 所述的PGI/PGII檢測試劑盒中R2試劑主要包含穩(wěn)定劑，抗人單（多）克隆抗 體膠乳顆粒，緩沖液，穩(wěn)定劑和防腐劑。其中乳膠微球直徑為80-200nm。 試劑Rl所述的無機鹽選自氯化鈉，氯化鉀，硫酸鉀一種或幾種。緩沖液為：Tris緩 沖液，MES緩沖液，磷酸鹽緩沖液，碳酸鹽緩沖液，甘氨酸-氫氧化鈉緩沖液中一種或幾種。 加速劑為聚乙二醇4000,聚乙二醇6000,聚乙二醇8000中一種或幾種。 試劑R2所選用的抗體為鼠抗人PGI/PGII單克隆抗體，羊抗人PGI/PGII單克 隆抗體，兔抗人PGI/PGII單克隆抗體一種或者幾種混合。也可以選鼠抗人PGI/PGII 多克隆抗體，羊抗人PGI/PGII多克隆抗體，兔抗人PGI/PGII多克隆抗體其中一種。 試劑R2中的穩(wěn)定劑選自小牛白蛋白，明膠，甘氨酸，吐溫20,曲拉通中的一種或者 幾種。 本專利技術所述的試劑R2為抗人PGI/PGII抗體膠乳試劑，采用的是抗人的PGI/ PGII抗體與膠乳顆粒相偶聯(lián)。經(jīng)過離心（過濾）的方法去掉未反應的偶聯(lián)劑以及未反應的 抗體，在含有穩(wěn)定劑和防腐劑的緩沖液中分散而成。 所述抗人PGI抗體和抗人PGII抗體的膠乳試劑的制備包括以下步驟： 步驟1 :將羧化的膠乳在PH7. 0的溶液活化； 步驟2 :洗滌去掉溶液中的碳化二亞胺，加PH7. 5-9. 0的緩沖液，加入PGI或PGII抗體， 在37度反應4小時； 步驟3 :將步驟2所得的液體用PH7. 5-9. 0的固定液固定6小時； 步驟4 :將步驟3所得的液體用PH7. 5-9. 0的封閉液體封閉12小時； 步驟5 :將步驟4所得的液體離心去上清液，取沉淀后用含有穩(wěn)定劑和防腐劑的緩沖液 洗滌分散既得。 步驟1中所用的緩沖液為PBS緩沖液，MES緩沖液，Tris緩沖液中的任何一種緩沖 液，且濃度在20-100mmol/L，PH在6. 5-7. 5之間。 作為優(yōu)選，步驟1中所用的膠乳可以是羧基化的聚苯乙烯膠乳或者是氨基化的聚 苯乙稀膠乳。其孔徑在80nm-200nm均可。 作為優(yōu)選，步驟1中含有1- (3-二甲基氨基丙基）-3-乙基碳二亞胺、1- (3-二甲基 氨基丙基）-3-乙基碳二亞胺鹽或N-羥基硫代琥珀酰亞胺中的一種或者多種。 作為優(yōu)選，在步驟5中，所用的穩(wěn)定劑是小牛血清白蛋白，明膠，甘氨酸，脫脂奶粉 一種或者幾種相混合。 本專利技術檢測的原理是：利用抗原抗體反應，先加入試劑Rl，使血清中的PGI和PGII 的位點暴露，當加入抗人的PGI或PGII膠乳顆粒溶液，使溶液中的抗原抗體反應形成不溶 于溶液的抗原抗體復合物，從而產(chǎn)生一定的濁度，在人血清中PGI或PGII的含量在一定的 范圍內(nèi)PGI或PGII的含量與池度成正比。再通過標準曲線進行計算，從而得到PGI或PGII 的含量。 本專利技術與現(xiàn)有技術相比，具有如下特點： 1)本專利技術試劑盒具有較高的檢測靈敏度，PGI試劑盒最低檢測能夠達到3ng/ml，PGII試劑盒的最低檢測能夠達到2ng/ml。操作簡單、快速，從檢測到出結(jié)果最多只需要5分 鐘，甚至更短。 2)本專利技術的試劑盒R2試劑中的抗體膠乳的制備由于采用的化學偶聯(lián)法，穩(wěn)定性 好，在2-8度至少可以保存12個月。 3)本專利技術試劑盒與進口試劑盒對樣品中的PGI或PGII含量檢測的數(shù)據(jù)經(jīng)統(tǒng)計分 析，無顯著性差異，檢測結(jié)果可靠，在臨床上可以替代進口試劑，大幅降低成本以及檢測時 間。 4)本專利技術試劑盒抗乳糜干擾能力極強，可適用于含有重度乳糜的檢測。【具體實施方式】 下面以具體的實施例對本專利技術做進一步說明。 實施例1 一種測定人血清中胃蛋白酶原I和胃蛋白酶原II含量的試劑盒，包含試劑Rl，R2以及 校準液；所述試劑Rl為PH值為7. 2-8. 6的緩沖液，所述試劑R2為抗人PGI抗體膠乳試劑 或抗人PGII抗體膠乳試劑；所述標準品為含有定量的PGI或PGII的重組蛋白或者是從人 血清中提取出來的天然PGI或P本文檔來自技高網(wǎng)...
【技術保護點】
一種測定人血清中胃蛋白酶原I/II含量的試劑盒，包含試劑R1，R2以及校準液；所述試劑R1為PH值為7.2?8.6的緩沖液，所述試劑R2為抗人PGI抗體膠乳試劑或抗人PGII抗體膠乳試劑；所述標準品為含有定量的PGI或PGII的重組蛋白或者是從人血清中提取出來的天然PGI或PGII;其特征在于，所述試劑盒還包括用于消除乳糜的試劑R3，所述試劑R3的由辛基甲氧基肉桂酸酯、聚氧丙烯聚氧乙烯丙二醇醚和聚乙二醇?硫酸菊聚糖鎂組成。
【技術特征摘要】
【專利技術屬性】
技術研發(fā)人員：梁朝陽，
申請(專利權(quán))人：浙江凱成生物科技有限公司，
類型：發(fā)明
國別省市：浙江;33
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