新穎的佐劑組合物制造技術

本發明專利技術涉及新穎的佐劑組合物。本發明專利技術涉及包含三萜、固醇、免疫調節劑、聚合物及Th2刺激劑的多種組合的佐劑配制物；用于制備該佐劑組合物的方法；及該佐劑配制物在含有不同抗原的免疫原性組合物和疫苗組合物中的用途。本發明專利技術還涉及該配制物在動物治療中的用途。

【技術實現步驟摘要】
【專利說明】新穎的佐劑組合物 本申請是申請日為2009年6月24日、申請號為200980124560. 5 (PCT/ IB2009/052724)的專利技術專利申請"新穎的佐劑組合物"的分案申請。 專利技術背景 專利
本專利技術一般涉及用于增強對抗原的免疫應答的新穎的佐劑配制物，該新穎的佐劑 配制物用于免疫原性和疫苗組合物中，但不在受試者中產生毒性或不想要的副作用。本發 明還涉及所述佐劑、免疫原性組合物及疫苗組合物的制備方法和用途。 相關技術的歷史和描述 細菌、病毒及寄生蟲感染廣泛分布于人和動物。由這些感染劑引起的疾病通常對 抗微生物藥學療法具有抗性，使得無有效的治療方法。因此，愈來愈多人使用疫苗學方法以 控制傳染病。完整的傳染性病原體可在經化學滅活或合適的遺傳工程處理后變得適用于疫 苗配制物?；蛘?，可將病原體的蛋白質亞基在重組表達系統中表達并純化，以用于疫苗配制 物中。疫苗可通過在組合物中包含合適的佐劑而變得更有效。 使用疫苗學方法以治療動物和人的癌癥的興趣亦持續增加。用于治療癌癥的所述 治療途徑涉及以包含腫瘤特異性抗原及佐劑的疫苗為癌癥患者接種疫苗。然而，研發中的 許多具有此性質的疫苗無一被主管機關批準。疫苗并未顯示出可縮小腫瘤一一此為癌癥藥 物效力的標準度量。 術語"佐劑"一般是指增加對抗原的體液或細胞性免疫應答的任何物質。佐劑被 用于達成二個目的：其減緩抗原從注射部位釋出，且其刺激免疫系統。傳統疫苗通常由滅活 或被殺死或經修飾的活致病微生物的粗制備物組成。與這些致病微生物的培養物相關的雜 質可作為增強免疫應答的佐劑。然而，以利用致病微生物或純化的蛋白質亞基的同質制備 物作為抗原而制成的疫苗所激發出的免疫力通常不夠。因此，加入某些外源物質（諸如佐 劑）變得必要。再者，制造合成及亞基疫苗很昂貴。加入佐劑可容許使用較小劑量的抗原 來刺激類似的免疫應答，從而減少疫苗的制造成本。因此，當將藥劑與佐劑組合時可顯著增 加某些可注射藥劑的效力。 在選擇佐劑時必須考慮許多因素。佐劑應該以有效方式使抗原的釋出和吸收速率 緩慢，且對宿主的毒性、變應原性、刺激及其它不想要的作用最小。為了使人滿意，佐劑應為 非殺病毒性、可生物降解、可持續產生高水平的免疫力、能刺激交叉保護作用、可與多種抗 原兼容、在多種物種中有效、對宿主無毒且安全（如：無注射部位反應）。其它期望的佐劑 特征為可微量給藥、劑量節省、具有優良的貨架穩定性、可承受干燥、可制成不含油、可作為 固體或液體存在、為等張性、容易制造且其制造并不昂貴。最后，高度期望能夠根據疫苗接 種方案的需要而將佐劑配置成誘導體液或細胞免疫應答或二者兼有。然而，可符合上述條 件的佐劑的數量有限。 佐劑的選擇系取決于疫苗的需要，無論所述需要是增加抗體應答的幅度或功能、 增加由細胞介導的免疫應答、誘導黏膜免疫力或降低抗原劑量。已提出大量佐劑，然而，其 無一顯示出理想適用于所有疫苗。第一種在文獻中報導的佐劑為弗氏完全佐劑（Freund's Complete Adjuvant) (FCA)，其含有油包水乳液及分枝桿菌（mycobacterium)的提取物。不 幸地，FCA的可耐受性差且可能引起無法控制的發炎。自從在超過80年前發現FCA起，人 們一直努力減少不想要的佐劑副作用。 一些已作為佐劑使用的其它物質包括金屬氧化物（如：氫氧化鋁）、明礬、鹽的無 機螯合物、明膠、不同的石蠟型油、合成樹脂、藻酸鹽、類粘蛋白及多糖化合物、酪蛋白酸鹽 及從血液衍生的物質諸如纖維蛋白凝塊。雖然這些物質通?？捎行Т碳っ庖呦到y，但由于 宿主中的不利作用（如：產生無菌膿腫、損傷、致癌性或變應原性應答）或令人不滿的藥學 性質（例如物質從注射部位快速分散或分散控制不良，或膨脹），因此無一令人完全滿意。 合成油及石油衍生物已被用作佐劑，因其顯示出在體內分散得相對緩慢，但其可 能令人不滿意，因其經常分裂成芳香烴，而此物質可能具致癌性。再者，這些物質中有些已 被發現能夠產生無菌膿腫且可能永遠無法從身體完全排出。當正確選擇且調制成正確濃度 時，油可相對安全且無毒性。 自南美洲皂樹（Qui I la ja saponar ia)的樹皮取得的皂苷已作為佐劑一段 時間° 見，Lacaille-Dubois, M and Wagner H. (A review of the biological and pharmacological activities of saponins。許多現今使用的獸醫疫苗包含Quil A，其為 來自南美洲智利阜莢樹（Quillaja saponaria molina)的樹皮的阜苷餾分。將Quil A進 一步分餾則產生次餾分，包括QS-7、QS-17、QS-18及QS-21。（見美國專利No. 5, 057, 540)。 使用皂苷作為佐劑有多種缺點。皂苷為可溶性，因此刺激非特異性免疫應答。然 而，疫苗學的目的是刺激針對一種或多種特異性抗原的靶向應答。皂苷對膽固醇具有強親 和力。其與細胞膜中所發現的膽固醇形成復合物而使細胞溶血。其亦顯示出引起注射位點 壞死且難以配制成微粒構造。當用于含有經修飾的活包膜病毒的疫苗中時，皂苷可破壞病 毒被膜從而將病毒抗原滅活。 為了克服Quil A的溶血及殺病毒性質，現已將其與膽固醇和磷脂組合而形成稱為 免疫刺激性復合物（ISCOM)或ISCOM基質（ISC0MATRIX)的特殊構造。見，Ozel M.，et al.; J. Ultrastruc. and Molec. Struc. Re 102, 240-248 (1989)。當與抗原組合時，ISCOM 通常會 誘導Thl細胞毒性T細胞應答。然而，盡管大幅減弱Quil A的溶血性質，但Quil A與膽固 醇組合并不會完全消除此類性質。ISCOM的另一限制為蛋白質抗原必須具有足夠大的疏水 結構域來與ISCOM交互作用，從而被并入ISCOM中。高度親水的蛋白質無法被并入ISCOM 中。最后，ISCOM可在受試者內刺激不想要的自體免疫應答。 免疫調節劑已被用作佐劑，其例子包括二甲基雙十八烷基溴化銨（以下稱"DDA"） 和拉韋定（avirdine)。DDA為親脂性季按化合物（胺），其帶有結合正電荷季按分子的 二個18碳烷基鏈及二個甲基基團，分子量為631。其作為佐劑的用途由Gall (Immunol. V. 11，p. 369, 1966)發現。據報導，DDA可刺激強烈的經細胞介導的免疫應答，亦顯示出可 誘導體液免疫應答。許多論文已發表，證明DDA作為蛋白質抗原、半抗原（hapten)、腫瘤、 病毒、原生動物及細菌的佐劑的效力。（見，Korsholm, K S.，et al·，Immunology, vol. 121 ，ρρ. 216-226, 2007)。大部分研宄已在實驗室動物中進行，然而僅有少量在較大型的動物諸 如雞（見，Katz, D.，et al. FEMS Immunol Med Microbiol. Vol 7(4) :303-313, 1993)、豬和 牛中進行。DDA可在實驗室動物以及較大型的動物中有效誘導延遲型超敏（DTH)反應。然 而，其在水中不易溶。 聚合物亦已被用作佐劑，其例子包括二乙基-氨乙基（D本文檔來自技高網...

【技術保護點】
疫苗組合物，其包含佐劑配制物及治療有效量的抗原成分，其中a)所述佐劑配制物包含Quil?A或其經純化的餾分、固醇、二甲基雙十八烷基溴化銨(DDA)和聚丙烯酸聚合物；并且b)所述抗原成分FeLV(貓白血病病毒)抗原或禽流感抗原。

【技術特征摘要】
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【專利技術屬性】
技術研發人員：克多·馬丁·巴吉，泰德·艾倫·奇爾德斯，保羅·約瑟夫·多米諾斯基，理查德·李·克萊博斯，拉瑪薩米·曼娜·曼南，瑪麗·凱瑟琳·奧爾森，詹姆斯·理查德·湯普森，里斯尼·達米卡·維拉特納，羅伯特·約翰·小燕西，張樹成，
申請(專利權)人：碩騰有限責任公司，
類型：發明
國別省市：美國;US