一種具有協(xié)同抑制病毒誘導(dǎo)細(xì)胞轉(zhuǎn)化與白血病的藥物組合及其應(yīng)用制造技術(shù)

本發(fā)明專利技術(shù)公開了一種具有協(xié)同抑制病毒誘導(dǎo)細(xì)胞轉(zhuǎn)化與白血病的藥物組合及其應(yīng)用。本發(fā)明專利技術(shù)的藥物組合由JAK/STAT/Pim信號(hào)通路抑制劑和PI3K/AKT/mTOR信號(hào)通路抑制劑組成；所述JAK/STAT/Pim信號(hào)通路抑制劑為SMI-4a；所述PI3K/AKT/mTOR信號(hào)通路抑制劑為Rapamyicn或LY294002。通過實(shí)驗(yàn)證明：本發(fā)明專利技術(shù)的藥物組合的應(yīng)用能夠有效的在細(xì)胞水平上協(xié)同誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞發(fā)生凋亡，同時(shí)在小鼠活體實(shí)驗(yàn)上能夠更顯著的抑制腫瘤生長(zhǎng)，為慢性髓性白血病的治療提供了新的思路。

【技術(shù)實(shí)現(xiàn)步驟摘要】

本專利技術(shù)涉及，屬于生物醫(yī)藥領(lǐng)域。
技術(shù)介紹
癌癥的發(fā)生常常伴隨著機(jī)體細(xì)胞內(nèi)信號(hào)通路的異?；罨煌愋偷哪[瘤發(fā)生改變的信號(hào)通路也不盡相同。針對(duì)發(fā)生異常的通路，有選擇性的使用相應(yīng)的分子抑制劑能夠有效的達(dá)到特異性治療的目的。比如臨床上用于治療乳腺癌的藥物一Herceptin(赫賽汀)，可以有針對(duì)性并且有效地治療Her2蛋白過表達(dá)導(dǎo)致的乳腺癌。然而絕大部分類型的腫瘤往往有多條具有相似功能的信號(hào)通路發(fā)生異常，這種功能冗余使得單獨(dú)抑制一條通路無法達(dá)到有效治療癌癥的目的。v-Abl基因是鼠白血病病毒攜帶一類癌基因，其編碼的v-Abl癌蛋白能夠誘導(dǎo)小鼠淋巴細(xì)胞發(fā)生惡性轉(zhuǎn)化，進(jìn)而發(fā)展為小鼠白血病。而人類中存在一種與v-Abl極為類似的Bcr-Abl基因，該基因能夠誘使人發(fā)生慢性髓性白血病。無論是v-Abl蛋白還是Bcr-Abl蛋白，在誘導(dǎo)淋巴細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化的過程中都會(huì)導(dǎo)致JAK/STAT/Pim以及PI3K/AKT/mTOR通路的活化。目前抑制Pim通路的分子抑制劑是SM1-4a，抑制PI3K/AKT/mTOR通路的分子抑制劑有針對(duì)mTOR的Rapamyicn (雷帕霉素)，以及針對(duì)PI3K的LY294002。SM1-4a是一種ATP競(jìng)爭(zhēng)性抑制劑，主要針對(duì)的靶分子是Pim分子家族中的Piml及Pim2激酶，對(duì)其它絲/蘇氨酸激酶、酪氨酸激酶沒有明顯的抑制效果。在體外細(xì)胞水平上的研宄表明，SM1-4a能夠抑制膀胱癌細(xì)胞和白血病細(xì)胞的增殖，同時(shí)也能阻滯細(xì)胞周期，促進(jìn)細(xì)胞啟動(dòng)凋亡程序。在分子水平上SM1-4a通過抑制Pim激酶的活性來降低Pim下游底物(如4EBP1，Bad等)的磷酸化水平。在體外活體動(dòng)物水平上的實(shí)驗(yàn)顯示，裸鼠口服SMI_4a能夠顯著抑制腫瘤細(xì)胞的成瘤能力，并且對(duì)藥物無不良反應(yīng)。小鼠口服藥物I小時(shí)后取腫瘤進(jìn)行生化分析發(fā)現(xiàn)，Pim激酶下游分子的磷酸化水平明顯下調(diào)，證明該藥物在小鼠體內(nèi)能夠有效抑制Pim激酶的活性。然而在很多類型的腫瘤中，SM1-4a的使用并不能達(dá)到理想的治療效果。Rapamycin的作用革E點(diǎn)為mTOR分子，通過抑制該分子的下游信號(hào)傳遞，Rapamycin目前發(fā)現(xiàn)能夠用于治療癌癥、糖尿病、肥胖癥、神經(jīng)系統(tǒng)疾病如阿茲海默癥等多種人類重大疾病。FDA于1999年批準(zhǔn)該藥上市，可作為抗腫瘤藥物使用。在小鼠體內(nèi)實(shí)驗(yàn)表明，Rapamycin治療能夠有效抑制小鼠移植瘤的生長(zhǎng)，促進(jìn)腫瘤壞死。LY294002是第一個(gè)人工合成的PI3K的抑制劑，被廣泛用于PI3K/AKT/mT0R通路的特性研宄中。通過抑制PI3K的活性進(jìn)而誘導(dǎo)AKT失活，LY294002能夠抑制多種腫瘤細(xì)胞系的增殖并且誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡(如結(jié)腸癌、卵巢癌、黑色素瘤、骨肉瘤等)。體內(nèi)研宄也表明，LY294002也能夠抑制腫瘤的生長(zhǎng)，作用于鼠癌性腹膜炎模型具有明顯藥效。LY294002的使用能明顯抑制卵巢癌生長(zhǎng)和腹水形成。但是在某些類型的腫瘤模型上(如v-Abl癌蛋白或Bcr-Abl蛋白誘導(dǎo)淋巴細(xì)胞發(fā)生的惡性轉(zhuǎn)化模型)，無論是LY294002還是Rapamycin，其治療效果都大打折扣。這與腫瘤細(xì)胞的異質(zhì)性以及細(xì)胞內(nèi)存在功能類似的其它活化信號(hào)通路有關(guān)。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)思路
本專利技術(shù)的一個(gè)目的是提供JAK/STAT/Pim信號(hào)通路抑制劑和PI3K/AKT/mTOR信號(hào)通路抑制劑的用途。本專利技術(shù)提供了 JAK/STAT/Pim信號(hào)通路抑制劑和PI3K/AKT/mTOR信號(hào)通路抑制劑在制備具有如下(1)-(4)中至少一種功能的產(chǎn)品中的應(yīng)用:(I)預(yù)防和/或治療慢性髓性白血??；(2)抑制JAK/STAT/Pim信號(hào)通路和PI3K/AKT/mTOR信號(hào)通路下游的共同底物磷酸化；(3)促進(jìn)腫瘤細(xì)胞凋亡；(4)抑制腫瘤細(xì)胞成瘤能力。上述應(yīng)用中，所述JAK/STAT/P im信號(hào)通路抑制劑和所述P13K/AKT/mTOR信號(hào)通路抑制劑的物質(zhì)的量比為(0.3125-10):lo上述應(yīng)用中，所述JAK/STAT/Pim信號(hào)通路抑制劑為SMI_4a ;所述PI3K/AKT/mT0R信號(hào)通路抑制劑為Rapamyicn或LY294002 ；所述SMI_4a和所述Rapamyicn的物質(zhì)的量比為(0.625-10):1 ；所述SM1-4a和所述LY294002的物質(zhì)的量比為(0.3125-2.5):1。上述應(yīng)用中，所述共同底物為eIF4B ;所述腫瘤細(xì)胞為白血病細(xì)胞；所述白血病細(xì)胞具體為NS2細(xì)胞或K562細(xì)胞。本專利技術(shù)的另一個(gè)目的是提供一種產(chǎn)品。本專利技術(shù)提供的產(chǎn)品的活性成分為JAK/STAT/Pim信號(hào)通路抑制劑和PI3K/AKT/mTOR信號(hào)通路抑制劑；所述產(chǎn)品的用途為如下(1)-(4)中的至少一種:(I)預(yù)防和/或治療慢性髓性白血病；(2)抑制JAK/STAT/Pim信號(hào)通路和PI3K/AKT/mT0R信號(hào)通路下游的共同底物磷酸化水平；(3)促進(jìn)腫瘤細(xì)胞凋亡；(4)抑制腫瘤細(xì)胞成瘤能力。上述產(chǎn)品中，所述JAK/STAT/Pim信號(hào)通路抑制劑和所述PI3K/AKT/mT0R信號(hào)通路抑制劑的物質(zhì)的量比為(0.3125-10):lo上述產(chǎn)品中，所述JAK/STAT/Pim信號(hào)通路抑制劑為SMI_4a ;所述PI3K/AKT/mT0R信號(hào)通路抑制劑Rapamyicn或LY294002 ；所述SMI_4a和所述Rapamyicn的物質(zhì)的量比為(0.625-10):1 ；所述SM1-4a和所述LY294002的物質(zhì)的量比為(0.3125-2.5):1。上述產(chǎn)品中，所述共同底物為eIF4B ;所述腫瘤細(xì)胞為白血病細(xì)胞；所述白血病細(xì)胞具體為NS2細(xì)胞或K562細(xì)胞。上述應(yīng)用或上述產(chǎn)品中，所述產(chǎn)品為藥物。本專利技術(shù)提供了一種能夠明顯協(xié)同抑制v-Abl癌蛋白誘導(dǎo)小鼠淋巴細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化以及Bcr-Abl癌蛋白誘導(dǎo)人慢性髓性白血病的藥物組合。通過實(shí)驗(yàn)證明:該藥物組合的應(yīng)用能夠有效的在細(xì)胞水平上協(xié)同誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞發(fā)生凋亡，同時(shí)在小鼠活體實(shí)驗(yàn)上能夠更顯著的抑制腫瘤生長(zhǎng)，為慢性髓性白血病的治療提供了新的思路?！靖綀D說明】圖1為SMI_4a與Rapamycin處理K562細(xì)胞后eIF4B磷酸化水平變化情況。圖中4h和8h指藥物處理K562細(xì)胞的時(shí)間。圖2為SMI_4a與Rapamycin不同濃度組合處理NS2細(xì)胞后的細(xì)胞凋亡檢測(cè)結(jié)果。圖3為SMI_4a與Rapamycin不同濃度組合處理K562細(xì)胞后的細(xì)胞凋亡檢測(cè)結(jié)果。圖4為SM1-4a與LY294002不同濃度組合處理K562細(xì)胞后的細(xì)胞凋亡檢測(cè)結(jié)果。圖5為compusyn軟件分析SMI_4a與Rapamycin對(duì)K562細(xì)胞的協(xié)同作用。圖6為米用SMI_4a與Rapamycin處理裸鼠后K562細(xì)胞的腫瘤生長(zhǎng)曲線?！揪唧w實(shí)施方式】下述實(shí)施例中所使用的實(shí)驗(yàn)方法如無特殊說明，均為常規(guī)方法。下述實(shí)施例中所用的材料、試劑等，如無特殊說明，均可從商業(yè)途徑得到。SMI_4a是Merck公司的產(chǎn)品，產(chǎn)品目錄號(hào)為526523 ；Rapamycin 是 Santa Cruz B1technology 公司的產(chǎn)品，產(chǎn)品目錄號(hào)為 sc_3504oDMSO是AMRESC0公司的產(chǎn)品，產(chǎn)品目錄號(hào)為0231-500ML。RPMI Medium 1640粉末培養(yǎng)基是life tech本文檔來自技高網(wǎng)...

【技術(shù)保護(hù)點(diǎn)】
JAK/STAT/Pim信號(hào)通路抑制劑和PI3K/AKT/mTOR信號(hào)通路抑制劑在制備具有如下(1)?(4)中至少一種功能的產(chǎn)品中的應(yīng)用：(1)預(yù)防和/或治療慢性髓性白血病；(2)抑制JAK/STAT/Pim信號(hào)通路和PI3K/AKT/mTOR信號(hào)通路下游的共同底物磷酸化；(3)促進(jìn)腫瘤細(xì)胞凋亡；(4)抑制腫瘤細(xì)胞成瘤能力。

【技術(shù)特征摘要】

【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：陳吉龍，陳科，
申請(qǐng)(專利權(quán))人：中國(guó)科學(xué)院微生物研究所，
類型：發(fā)明
國(guó)別省市：北京;11