本發(fā)明專利技術公開了一種一步薄層層析快速檢測生物胺的方法，屬于食品分析和安全技術領域。本發(fā)明專利技術包括以下步驟：(1)活化硅膠的制備；(2)活化薄層層析板的制備；(3)食品樣品中生物胺的薄層層析分析。本發(fā)明專利技術所提供一步薄層層析快速檢測生物胺的方法，可用于水產(chǎn)品、肉類、奶制品、泡菜、酒類和醋類等產(chǎn)品中生物胺含量的快速測定。與其它分析方法相比，本方法將衍生劑在活化時直接固定于介質(zhì)之上，樣品提取凈化后無需做衍生處理，稀釋至標定范圍內(nèi)可直接點樣展開，進行測定，且無需昂貴的分析儀器，費用低，操作簡便、快捷，能有效降低食品生產(chǎn)流通中的監(jiān)控成本。
【技術實現(xiàn)步驟摘要】
本專利技術涉及一種一步薄層層析快速檢測生物胺的方法，屬于食品分析和安全
技術介紹
生物胺是一類具有生物活性含氮的低分子量有機化合物的總稱；含有蛋白質(zhì)和氨基酸的食品，在一定條件下通過氨基酸的脫羧反應或醛的胺化作用便可產(chǎn)生生物胺。目前已發(fā)現(xiàn)水產(chǎn)品、肉制品、干酪及乳制品、酒及各類發(fā)酵食品、蔬菜、水果、干果和巧克力等食品中均含有多種生物胺。過量的生物胺被證明對人體會產(chǎn)生一些不良的生理反應，在食品保藏學中，生物胺往往是在食品腐爛或發(fā)酵過程中產(chǎn)生；組胺和酪胺是存在于食品中含量最多、也是對人類健康影響最大的兩種生物胺。歐洲食品安全局(EFSA)將歐盟范圍內(nèi)含大量組氨酸魚制品中組胺的含量制定為≤100mg/kg或100～200mg/kg；將用含大量組氨酸魚類制作、在鹽水中經(jīng)酶熟化處理的制品組胺含量制定為≤200mg/kg或200～400mg/kg。EFSA對食品中的組胺含量沒有加以限定，建議上限為100mg/kg(食品)或2mg/L(含酒精飲料)；美國食品藥品管理局(FDA)基于組胺500mg/kg的毒性，制定美國國內(nèi)金槍魚、鬼頭刀及相關魚類中組胺的干預水平為50mg/kg。同時認為，500～1000mg/kg以上的組胺對人體健康有潛在危險。而對酪胺和苯乙胺的安全閾值，所給出的建議參考上限分別為100～800mg/kg和30mg/kg；我國GB2733—2005《鮮(凍)動物性水產(chǎn)品衛(wèi)生標準》規(guī)定鮐魚中組胺含量應低于1000mg/kg，其他魚類中組胺含量應低于300mg/kg。目前食品中生物胺的檢測一般采用高效液相色譜(HPLC)，生物傳感器等方法。這些方法均有一定的應用，也各有優(yōu)缺點；如最常用的RP—HPLC法，一般認為其具有檢測靈敏度高、定量分析準確和柱效高等優(yōu)點，且有多個標準方法基于該技術實施；但是該方法需要高效液相色譜，且儀器預熱平衡和分析等過程時間較長，速度較慢，靈活性較差。生物傳感器由于其具有在線監(jiān)測的能力被推崇，但是現(xiàn)有技術仍不是非常成熟，市場較少有可靠的成套裝備，且價格較昂貴。薄層色譜是一種無需昂貴的分析儀器，費用低，操作簡便、快捷，檢測限能夠達到ng級別的方法?，F(xiàn)已有效地應用于臨床和生化檢驗、毒物分析、藥材及其制劑真?zhèn)蔚蔫b定、質(zhì)量控制、含量測定和資源調(diào)查等方面。但是薄層色譜需先對樣品進行衍生再進行薄層層析檢測，其中對樣品的衍生化處理最為關鍵，一般需要考慮到衍生劑的選擇、衍生劑與樣品液的體積比、衍生反應的時間和溫度。因此在食品加工和流通等環(huán)節(jié)迫切需要一種無需對樣品進行衍生處理，將樣品點在薄層層析板就能夠檢測的一步薄層層析檢測生物胺的方法，從而滿足現(xiàn)場快速檢測的需要，切實保障食品安全。
技術實現(xiàn)思路
本專利技術的目的是克服上述現(xiàn)有技術中的缺點，提供一種一步薄層層析快速檢測生物胺的方法，本專利技術設計巧妙、易操作、成本低、速度快、適于大規(guī)模應用。本專利技術的第一個目的是提供一種快速檢測生物胺的方法，所述方法包括：(1)活化硅膠的制備：對硅膠進行環(huán)氧基、氨基、醛基的活化，使硅膠依次接上環(huán)氧基、氨基和醛基；(2)活化薄層層析板的制備：活化好的硅膠介質(zhì)分別進行調(diào)漿，鋪板和層析板活化制得活化薄層層析板；(3)待測樣品中生物胺的薄層層析分析：從待測樣品中進行生物胺提取、生物胺提取液凈化得到的生物胺凈化液，點在活化的薄層層析板上，展開，檢測目標生物胺的有無或者定量測定生物胺的含量。所述步驟(1)，在本專利技術的一種實施方式中，是使用環(huán)氧氯丙烷、雙環(huán)氧乙烷、苯氧基環(huán)氧丙烷、二—(環(huán)氧丙基)—鄰苯并咪唑酮中的任意一種對硅膠進行環(huán)氧基活化。所述環(huán)氧基活化，在本專利技術的一種實施方式中，環(huán)氧基的活化條件：以體積比1:0.5-1:2的0.4-1.2mol/LNaOH溶液與DMSO的混合液作為混合溶劑，震蕩，活化溫度為30-40℃，活化時間8-14h，環(huán)氧氯丙烷、雙環(huán)氧乙烷、苯氧基環(huán)氧丙烷或二—(環(huán)氧丙基)—鄰苯并咪唑酮的用量為2-10mL/g硅膠。所述環(huán)氧基活化，在本專利技術的一種實施方式中，以環(huán)氧氯丙烷作為環(huán)氧基活化液，NaOH溶液濃度為0.8-1.0mol/L，NaOH溶液與DMSO體積比為1:1-1:1.5，活化溫度為33-36℃，活化時間為10-12h，環(huán)氧氯丙烷的用量為4-7mL/g硅膠。所述步驟(1)，在本專利技術的一種實施方式中，是使用氨水、氯胺、乙二胺、雙氯胺中的任意一種對硅膠進行氨基活化。所述氨基活化，在本專利技術的一種實施方式中，氨基的活化條件：以質(zhì)量分數(shù)為5％-15％的氨水、氯胺、乙二胺或雙氯胺作為活化液系，震蕩，活化溫度為32-38℃，活化時間8-14h，5％-15％的氨水、氯胺、乙二胺或雙氯胺的用量為15-30ml/g硅膠。所述氨基活化，在本專利技術的一種實施方式中，以氨水作為氨基活化液，氨水濃度為8％-12％，活化溫度為34-36℃，活化時間為10-12h，8％-12％的氨水的用量為18-24ml/g硅膠。所述步驟(1)，在本專利技術的一種實施方式中，是使用鄰苯二甲醛、戊二醛、乙二醛、己二醛中的任意一種對硅膠進行醛基活化。所述醛基活化，在本專利技術的一種實施方式中，醛基的活化條件：以6-12g/L的鄰苯二甲醛、戊二醛、乙二醛或己二醛作為活化液系，震蕩，活化溫度為26-32℃，活化時間15-45min，6-12g/L的鄰苯二甲醛、戊二醛、乙二醛或己二醛的用量為5-12ml/g硅膠。所述醛基活化，在本專利技術的一種實施方式中，以鄰苯二甲醛作為醛基活化液，鄰苯二甲醛濃度為8-10g/L，活化溫度為30℃，活化時間為30min，8-10g/L鄰苯二甲醛的用量為6-8ml/g硅膠。所述硅膠，在本專利技術的一種實施方式中，是采用100-200目國產(chǎn)硅膠或采用200-300目德國默克公司進口硅膠。所述步驟(2)中的調(diào)漿，在本專利技術的一種實施方式中，是每取活化硅膠6-14g，加入2.2-2.8g無水硫酸鈣，加入6-12ml去離子水，使固液1:0.5-1:1.5混合調(diào)成勻漿；所述調(diào)漿，在本專利技術的一種實施方式中，是稱取活化硅膠量為的10-12g，加入的無水硫酸鈣為2.4-2.6g，加入的去離子水為8-10mL，固液比為1:0.8-1:1.2。所述步驟(2)中的鋪板，在本專利技術的一種實施方式中，是將勻漿均勻傾倒在層析板上，然后真空干燥。所述鋪板，在本專利技術的一種實施方式中，基本步驟：將勻漿均勻傾倒在層析板上，采用傾注法或用薄層涂鋪器手工鋪板，將鋪好的板放入真空干燥器中，真空干燥1-2h，表面水分完全蒸發(fā)后用小刀和直本文檔來自技高網(wǎng)...
【技術保護點】
一種快速檢測生物胺的方法，其特征在于，所述方法包括：(1)活化硅膠的制備：對硅膠進行環(huán)氧基、氨基、醛基的活化，使硅膠依次接上環(huán)氧基、氨基和醛基；(2)活化薄層層析板的制備：活化好的硅膠介質(zhì)分別進行調(diào)漿，鋪板和層析板活化制得活化薄層層析板；(3)待測樣品中生物胺的薄層層析分析：從待測樣品中進行生物胺提取、生物胺提取液凈化得到的生物胺凈化液，點在活化的薄層層析板上，展開，檢測目標生物胺的有無或者定量測定生物胺的含量。
【技術特征摘要】
1.一種快速檢測生物胺的方法，其特征在于，所述方法包括：(1)活化硅膠的制備：對硅膠
進行環(huán)氧基、氨基、醛基的活化，使硅膠依次接上環(huán)氧基、氨基和醛基；(2)活化薄層
層析板的制備：活化好的硅膠介質(zhì)分別進行調(diào)漿，鋪板和層析板活化制得活化薄層層析
板；(3)待測樣品中生物胺的薄層層析分析：從待測樣品中進行生物胺提取、生物胺提
取液凈化得到的生物胺凈化液，點在活化的薄層層析板上，展開，檢測目標生物胺的有
無或者定量測定生物胺的含量。
2.根據(jù)權利要求1所述的方法，其特征在于，所述步驟(1)中是使用環(huán)氧氯丙烷、雙環(huán)氧
乙烷、苯氧基環(huán)氧丙烷、二—(環(huán)氧丙基)—鄰苯并咪唑酮中的任意一種對硅膠進行環(huán)氧
基活化；所述環(huán)氧基活化的條件：以體積比1:0.5-1:2的0.4-1.2mol/L?NaOH溶液與DMSO
的混合液作為混合溶劑，震蕩，活化溫度為30-40℃，活化時間8-14h，環(huán)氧氯丙烷、雙
環(huán)氧乙烷、苯氧基環(huán)氧丙烷或二—(環(huán)氧丙基)—鄰苯并咪唑酮的用量為2-10mL/g硅膠。
3.根據(jù)權利要求1所述的方法，其特征在于，所述步驟(1)中是使用氨水、氯胺、乙二胺、
雙氯胺中的任意一種對硅膠進行氨基活化；所述氨基活化的條件：以質(zhì)量分數(shù)為5％-15％
的氨水、氯胺、乙二胺或雙氯胺作為活化液系，震蕩，活化溫度為32-38℃，活化時間
8-14h，5％-15％的氨水、氯胺、乙二胺或雙氯胺的用量為15-30ml/g硅膠。
4.根據(jù)權利要求1所述的方法，其特征在于，所述步驟(1)中是使用鄰苯二甲醛、戊二醛、
乙二醛、己二醛中的任意一種對硅膠進行醛基活化；所述醛基活化的條件：以6-12g/L
的鄰苯二甲醛、戊二醛、乙二醛或己二醛作為活化液系，震蕩，活化溫度為26-32℃，活
【專利技術屬性】
技術研發(fā)人員：夏小樂，張無疾，張清文，馬吉，王武，周哲敏，
申請(專利權)人：江南大學，
類型：發(fā)明
國別省市：江蘇;32
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