一種金花茶的組培快繁方法技術

本發明專利技術公開一種金花茶的組培快繁方法，其特征在于，包括如下步驟：（1）外植體的消毒；（2）愈傷組織培養；（3）愈傷組織分化芽；（4）芽生根。本發明專利技術提供一種金花茶的組培快繁方法，能降低繁殖的成本，生長周期短、繁殖率高、方便管理、利于工業化生產和自動化監控大大的節約了人力、物力和田間作物的土地。

【技術實現步驟摘要】
【專利摘要】本專利技術公開，其特征在于，包括如下步驟：（1）外植體的消毒；（2）愈傷組織培養；（3）愈傷組織分化芽；（4）芽生根。本專利技術提供，能降低繁殖的成本，生長周期短、繁殖率高、方便管理、利于工業化生產和自動化監控大大的節約了人力、物力和田間作物的土地。【專利說明】
本專利技術屬于組織培養生產
，本專利技術涉及。
技術介紹
金花茶屬于山茶科、山茶屬，與茶、山茶、南山茶、油茶、茶梅等為孿生姐妹。金花茶 的花金黃色，耀眼奪目，仿佛涂著一層蠟，晶瑩而油潤，似有半透明之感。金花茶單生于葉 腋，花開時，有杯狀的、壺狀的或碗狀的，嬌艷多姿，秀麗雅致。以前，人們沒有見到過花色金 黃的種類。I960年，中國科學工作者首次在廣西南寧一帶發現了一種金黃色的山茶花，被命 名為金花茶。國外稱之為神奇的東方魔茶，被譽為"植物界大熊貓"、"茶族皇后"。 金花茶是一種古老的植物，極為罕見，分布極其狹窄，全世界90%的野生金花茶僅 分布于中國廣西防城港市十萬大山的蘭山支脈一帶，生長于海拔700米以下，以海拔200? 500米之間的范圍較常見，垂直分布的下限為海拔20米左右。如金花茶在防城縣大王江附 近的濱海丘陵臺地仍有分布。垂直分布的上限可達海拔890米，如寧明縣那陶大山仍可見 到個別小瓣金花茶，數量極少，是世界上稀有的珍貴植物。金花茶喜溫暖濕潤氣候，喜歡排 水良好的酸性土壤，苗期喜蔭蔽，進入花期后，頗喜透射陽光。對土壤要求不嚴，微酸性至中 性均土壤中可生長。耐瘠薄，也喜肥，耐澇力強。 據中國疾病預防控制中心營養與食品安全所、廣西壯族自治區疾病預防控制中 心、廣西壯族自治區衛生監督檢驗中心、北京疾病預防控制中心中心營養與食品安全所、廣 西壯族自治區分析測試研究中心、廣西中醫學院、廣西農學院實驗中心等權威機構檢驗表 明：金花茶屬無毒級、含有400多種營養物質、無毒副作用。富含茶多糖、茶多酚、總皂甙、總 黃酮、茶色素、咖啡因、蛋白質、維生素 Bl、B2、維生素 C、維生素 E、葉酸、脂肪酸、B-胡蘿卜 素等多種天然營養成份；金花茶含有茶氨酸、蘇氨酸等幾十種氨基酸，以及富含有多種對人 體具有重要保健作用的天然有機鍺（Ge)、硒（Se)、鑰（Mo)、鋅（Zn)、釩（V)等微量元素，和 鉀（K)、鈣（Ca)、鎂（Mg)等宏量元素。自2009年成功舉辦首屆金花茶節以來，金花茶節成 為了防城港市主打的四大文化節慶品牌之一。金花茶產業也得到了迅速發展，涌現出桂人 堂金花茶、中港高科國寶金花茶、百喜金花茶等一批龍頭企業，金花茶系列產品分獲廣西名 牌產品、廣西著名商標，產品暢銷國內外市場，年產值超過12億元。 由此可見金花茶深受大眾的喜愛，提高金花茶的產量就要對金花茶進行后代繁 殖，為了滿足這一需求，本專利技術提供，能夠快速的對金花茶進行 組織培養繁殖，且出苗率較高。
技術實現思路
本專利技術針對上述存在的問題，提供，能降低繁殖的成 本，生長周期短、繁殖率高、方便管理、利于工業化生產和自動化監控大大的節約了人力、物 力和田間作物的土地。 本專利技術的方案是通過這樣實現的： ，包括如下步驟： 外植體的消毒：采摘6?7月份的金花茶葉，使用20?40%樂果乳劑稀釋400?600 倍液浸泡5?lOmin，取出后放入超凈工作臺使用4%維生素 C水溶液浸泡30min后再3%的 次氯酸進行消毒5?IOmin,然后用無菌水沖洗3?5次，最后使用滅菌濾紙吸干金花茶葉 表面的無菌水；使用樂果乳劑對剛采摘的金花茶葉進行消毒，能將金花茶葉上的害蟲爬行 過后殘留下的有害液體去除，然后使用維生素 C浸泡再用次氯酸消毒不僅能有效延緩外植 體褐化時間和保持外植體活力，而且能將金花茶葉上的細菌殺死，再使用無菌水沖洗，確保 金花茶葉上其他液體無殘留，最后使用滅菌濾紙吸干金花茶葉表面的無菌水，以防將金花 茶葉放入愈傷組織培養基中對培養基有稀釋作用。 (2)愈傷組織培養：愈傷組織培養：使用解剖刀沿著金花茶葉的莖干位置橫切出 長15?18cm，寬10?15cm的葉條片，將葉條片放入已經裝入愈傷組織培養基的培養皿中， 輕壓葉條片，在29?31°C下暗培養8?15天，而后轉入26?28°C下進行8?15天的暗 培養，獲得金花茶愈傷組織；采用光暗培養的方式，暗培養的時間原大于光培養，可以避免 金花茶葉修復期間過多的光照使其進行光合作用生成糖類，失去金花茶葉體內的一部分物 質和能量，使得完成修復過程的物質和能量的總量減少，造成形成愈傷組織的時間變慢。 (3)愈傷組織分化芽：將上述得到的愈傷組織移置芽誘導培養基中，其中，芽誘導 培養基的配方為MS+6?8g/L瓊脂+25?29 g/L蔗糖+ 0. 3?0.8mg/L 6?芐基嘌呤 +0· 8?I. 5mg/L萘乙酸，調節培養基的pH值為6. 0?6. 5,于25?28°C條件下，光暗培養 30?45天后愈傷組織分化出芽；添加6?芐基嘌呤在培養基中具有抑制植物葉內葉綠素、 核酸、蛋白質的分解，保綠防老；將氨基酸、生長素、無機鹽等向處理部位調運等多種效能。 (4)芽生根：待步驟（3)中芽長至5?6cm時，將芽移置根誘導培養基中，其中，根 誘導培養基的配方為MS+6?8g/L瓊脂+25?29g/L蔗糖+0· 8?2. 5mg/L吲哚乙酸+0· 5? I. 5mg/L萘乙酸+0. 8?I. 5mg/L活性炭+0. 8?I. 5mg/L的硫酸亞鐵，于25?28°C條件下， 光暗培養20?30天，培養出幼苗，組培結束。采用萘乙酸為培養基其中之一的添加物質能 夠促進細胞分裂和擴大，可誘導生根；而抗褐化劑活性炭+〇. 8?I. 5mg/L的硫酸亞鐵可降 低組培過程中外植體、原球莖和叢生芽產生褐化，目前已達到外植體初誘導、原球莖繼代增 殖褐化率控制在15%以下，叢生芽生根誘導褐化率低于5%以下。 本專利技術中，作為進一步說明，所述每個培養皿放入3?5片的葉條片。適當放入葉 條片能保證每條葉條片能充分的吸收足量的養分，防止養分不足造成培養失敗，即提高繁 殖率。 本專利技術中，作為進一步說明，所述愈傷組織培養基的配方為MS+6?8g/L瓊脂 +25?29 g/L蔗糖+ 0. 3?0. 8mg/L 6?芐基嘌呤+0. 8?I. 5mg/L萘乙酸，調節培養基 的pH值為6. 5?7. 0 ;將培養基放入高溫滅菌鍋，在121?130°C、I. 1?I. 5 kg/cm2條件 下進行滅菌30?50min，然后取出冷卻至45°C后迅速在超凈工作臺中傾倒分裝到已經經過 高溫滅菌鍋滅菌的培養皿中。 本專利技術中，作為進一步說明，所述培養皿的規格為90X 15mm ;所述裝入培養皿中 的培養基為培養皿體積的1/3?1/2。采用直接傾倒的方法，相比使用量筒量取定量的培養 基，具有快速，簡便的優點。 本專利技術中，作為進一步說明，所述步驟（3)和步驟（4)中的光暗培養周期為光培養 20?22h，暗培養2?4h。在愈傷組織發芽和生根期間，需要吸收足夠的光源來形成葉綠素 繼而能通過吸收光源來完成光合作用，光合作用能夠合成能源，補充生長所需的能量。 本專利技術中，作為進一步說明，所述步驟（3)中光培養的光照強度為1500?1700勒本文檔來自技高網...

【技術保護點】
一種金花茶的組培快繁方法，其特征在于，包括如下步驟：（1）外植體的消毒：采摘5～7月份的金花茶葉，使用20～40%樂果乳劑稀釋400～600倍液浸泡5～10min，取出后放入超凈工作臺使用4%維生素C水溶液浸泡30min后再3%的次氯酸進行消毒5～10min，然后用無菌水沖洗3～5次，最后使用滅菌濾紙吸干金花茶葉表面的無菌水；（2）愈傷組織培養：使用解剖刀沿著金花茶葉的莖干位置橫切出長15～18cm，寬10～15cm的葉條片，將葉條片放入已經裝入愈傷組織培養基的培養皿中，輕壓葉條片，在29～31℃下暗培養8～15天，而后轉入26～28℃下進行8～15天的暗培養，獲得金花茶愈傷組織；（3）愈傷組織分化芽：將上述得到的愈傷組織移置芽誘導培養基中，其中，芽誘導培養基的配方為MS+6～8g/L瓊脂+25～29?g/L蔗糖+?0.3～0.8mg/L?6～芐基嘌呤+0.8～1.5mg/L?萘乙酸，調節培養基的pH值為6.0～6.5，于25～28℃條件下，光暗培養30～45天后愈傷組織分化出芽；（4）芽生根：待步驟（3）中芽長至5～6cm時，將芽移置根誘導培養基中，其中，根誘導培養基的配方為MS+6～8g/L瓊脂+25～29g/L蔗糖+0.8～2.5mg/L吲哚乙酸+0.5～1.5mg/L萘乙酸+0.8～1.5mg/L活性炭+0.8～1.5mg/L的硫酸亞鐵，于25～28℃條件下，光暗培養20～30天，培養出幼苗，組培結束。...

【技術特征摘要】

【專利技術屬性】
技術研發人員：張莘蔓，韋玲菊，陳程，羅生芳，
申請(專利權)人：柳州博澤科技有限公司，
類型：發明
國別省市：廣西;45