具有抗腫瘤活性的新穎結合分子制造技術

本發明專利技術涉及一種結合分子，其特異性地結合在腫瘤細胞上表達的抗原的2個不同表位，其中所述結合分子包含：(a)第一結合(多)肽，其特異性地結合所述在腫瘤細胞上表達的抗原的第一表位，其中所述第一結合(多)肽是FynSH3衍生的多肽；和(b)第二結合(多)肽，其特異性地結合所述在腫瘤細胞上表達的抗原的第二表位。本發明專利技術還涉及編碼本發明專利技術的結合分子的核酸分子、包含所述核酸分子的載體以及用所述載體轉化的宿主細胞或非人宿主。本發明專利技術還涉及一種生產本發明專利技術的結合分子的方法以及藥物和診斷組合物。此外，本發明專利技術也涉及用于腫瘤治療用途的本發明專利技術的結合分子、核酸分子、載體或宿主細胞。

【技術實現步驟摘要】
【國外來華專利技術】具有抗腫瘤活性的新穎結合分子本專利技術涉及一種結合分子，其特異性地結合在腫瘤細胞上表達的抗原的2個不同表位，其中所述結合分子包含：(a)第一結合(多)肽，其特異性地結合所述在腫瘤細胞上表達的抗原的第一表位，其中所述第一結合(多)肽是FynSH3衍生的多肽；和(b)第二結合(多)肽，其特異性地結合所述在腫瘤細胞上表達的抗原的第二表位。本專利技術還涉及編碼本專利技術的結合分子的核酸分子、包含所述核酸分子的載體以及用所述載體轉化的宿主細胞或非人宿主。本專利技術也涉及生產本專利技術的結合分子的方法以及藥物和診斷組合物。此外，本專利技術也涉及用于治療腫瘤的本專利技術的結合分子、核酸分子、載體或宿主細胞。在本說明書中，引用了許多文件，包括專利申請和生產商的手冊。這些文件的公開內容盡管不被認為與本專利技術的專利性有關，但是特此通過引用整體并入。更具體地，所有參考文件通過引用并入，達到如同明確地且單獨地指出每篇單獨文件通過引用并入相同的程度。已經提議將非免疫球蛋白衍生的結合試劑(共同地命名為“支架”；參見，例如，Skerra(2000)J.Mol.Recognit.13,167-187)用作診斷和治療劑。在過去的10-15年中已經提出了超過50種不同的蛋白支架，在該領域中最先進的方案是(如在Gebauer和Skerra(2009)CurrOpinioninChemicalBiology13:245-255中總結的)：親和體（affibodies）(基于葡萄球菌蛋白A的Z-結構域)、Kunitz型結構域、adnectins(基于人纖連蛋白的第10個結構域、anticalins(衍生自脂質運載蛋白)、DARPins(衍生自錨蛋白重復蛋白)、親和多聚體（avimer）(基于多聚化的LDLR-A)和Fynomers（衍生自人FynSH3結構域）。一般而言，SH3結構域存在于多種參與細胞信號轉導的蛋白中(Musacchio等人(1994)Prog.Biophys.Mol.Biol.61;283-297)。這些結構域沒有占據蛋白內的固定位置，且可以獨立地表達和純化。目前已知所述結構域的超過1000個出現，包括約300個人SH3結構域(Musacchio(2003)AdvancesinProteinChemistry.61;211-268)。盡管在SH3結構域之間存在巨大序列多樣性，它們都共有一個保守折疊：由2個反向平行的β-折疊形成的緊湊β桶(Musacchio(2003)AdvancesinProteinChemistry.61;211-268)。通常，SH3結構域結合富含脯氨酸的肽，該肽含有PXXP核心結合基序(Ren等人(1993)Science259;1157-1161)，但是還已經描述了非常規SH3結合位點的例子(Karkkainen等人(2006)EMBORep.7;186-191)。到目前為止測序的大多數SH3結構域具有大約60-65個氨基酸的總長度，但是它們中的一些可以表征為多達85個氨基酸，這是由于在連接二級結構的主要保守元件的環中的插入(Koyama等人(1993)Cell72(6);945-952)。不同SH3結構域的比對揭示了負責適當結構形成以及規范的富含脯氨酸的基序識別的保守氨基酸殘基(Larson等人(2000)ProteinScience9;2170-2180)。常規化學治療劑對腫瘤的治療依賴于以下預期：藥物將優先殺死快速分裂的腫瘤細胞而不是正常細胞。但是，對腫瘤細胞的選擇性的缺乏會導致在具有提高的增殖速率的正常組織（諸如骨髓、胃腸道和毛囊）中的毒性。由于較差的血液灌注、不規則的脈管系統和在腫瘤環境中的高間質壓力，化學治療劑在腫瘤塊中表現出較差積累(Bosslet等人(1998)CancerRes58:1195-1201)。此外，多藥物抗性蛋白可減少藥物攝取(Ramachandran等人(1999)MolDiagn4:81-94)。結果，優先靶向腫瘤細胞的治療劑的開發代表現代抗癌研究的一個主要焦點。在該背景下，通過結合腫瘤相關抗原而將治療劑靶向遞送至腫瘤部位，是現代抗癌研究的一個新出現的領域，這有希望在避開正常組織的同時將生物活性分子集中在腫瘤病灶上(Pfaffen等人(2010)ExpCellRes316(5)836-847)。例如，在乳腺癌和卵巢癌中觀察到HER2蛋白的增量調節，且與預后不良有關(Slamon等人(1987)Science,235:177-182;Slamon等人(1989)Science244:707-712)。還已經在許多其它腫瘤類型（包括膀胱癌、唾液腺癌、子宮內膜癌、胰腺癌、甲狀腺癌、腎癌、肺癌、上胃腸道癌和腸癌）中觀察到HER2的過表達(頻繁地，但是非均勻地，由于基因擴增)(Scholl等人(2001)AnnOncol,12增刊1:S81-87;RossJS(2011)BiomarkMed3:307-318;Fukushige等人(1986)MolCellBiol3:955-958;Cohen等人(1989)Oncogene1:81-88;Weiner等人(1990)CancerRes50:421-425;Park等人(1989)CancerRes23:6605-6609;Zhau等人(1990)Mol.Carcinog.5:254-257;Aasland等人(1988)BrJCancer4:358-363;Seliger等人(2000)IntJCancer87(3):349-359)。另外，已經發現HER2在前列腺癌中過表達，盡管與乳腺癌組織相比在較低水平(Minner等人(2010)ClinCancerRes16(5):1553-1560)。在過去，已經描述了幾種HER2結合蛋白，諸如親和體（affibodies）和DARPins(Wikman等人(2004)ProteinEngDesSel17(5):455-462;Zahnd等人(2007)369(4):1015-1028)。此外，Hudziak等人描述了一組使用人乳腺腫瘤細胞系表征的鼠抗-HER2抗體(包括抗體4D5和2C4)的制備(Hudziak等人(1989)MolCellBiol9(3):1165-1172；也參見美國專利號5,677,171)。確定了細胞暴露于抗體以后的相對細胞增殖。作者證實，抗體4D5最有效地抑制了細胞增殖。美國食品和藥品管理局于1998年批準重組人源化形式的鼠抗-HER2抗體4D5(huMAb4D5-8,曲妥珠單抗,赫賽汀?,也參見美國專利號5,821,337)用于與化學療法聯合處理HER2-陽性的轉移性乳腺癌(MBC)。目前，曲妥珠單抗被推薦為具有轉移性HER2-陽性腫瘤的患者的一線治療，無論是作為單一試劑(有限的患者群體)還是與內分泌療法或化學療法聯合，以及在佐劑場合中(Awada等人(2012)CancerTreatRev,106(1):6-13)。但是，在用曲妥珠單抗治療過程中，經常遇到原發性(固有的)或繼發性(在治療下獲得)抗性(Tsang等人(2012)BrJCancer106:6-13)。例如，已經觀察到，過表達HER2的轉移性乳腺癌對單一試劑曲妥珠單抗的原發性抗性率為66-89%。另外本文檔來自技高網...

【技術保護點】
結合分子，其特異性地結合在腫瘤細胞上表達的抗原的2個不同表位，其中所述結合分子包含：(a)?第一結合(多)肽，其特異性地結合所述在腫瘤細胞上表達的抗原的第一表位，其中所述第一結合(多)肽是Fyn?SH3衍生的多肽；和(b)?第二結合(多)肽，其特異性地結合所述在腫瘤細胞上表達的抗原的第二表位。

【技術特征摘要】
【國外來華專利技術】2012.03.16 EP 12159938.51.結合分子，其特異性地結合HER2的2個不同表位，其中所述結合分子包含SEQIDNO:154和SEQIDNO:159。2.核酸分子，其編碼根據權利要求1所述的結合分子。3.載體，其包含根據權利要求2所述的核酸分子。4.用根據權利要求3所述的載體轉化的宿主細胞。5.用于生產結合分子的方法，所述結合分子特異性地結合HER2的2個不同表位，所述方法包括：在合適的條件下培養根據權利要求4所述的宿主細胞，和分離生產的結合分子。6.組合物...

【專利技術屬性】
技術研發人員：S布拉克，F穆爾拉內，I托勒，R伍茲，J貝欽格，D格拉布洛夫斯基，B沙德，K克盧普施，H哈赫米，
申請(專利權)人：科瓦根股份公司，
類型：發明
國別省市：瑞士;CH