本發(fā)明專利技術(shù)公開了一種離體快繁中華蓑蘚配子體的方法，其包括以下順序步驟：1)將生長于自然環(huán)境中的中華蓑蘚成熟孢蒴表面消毒后，接種到無任何激素的改良Knop′s培養(yǎng)基上培養(yǎng)獲得原絲體，再進(jìn)行培養(yǎng)30天后獲得配子體；2)將配子體單枝接種到用于配子體繼代增殖的培養(yǎng)基上，培養(yǎng)獲得新生配子體。本發(fā)明專利技術(shù)首次建立了離體快繁中華蓑蘚配子體的方法，使用本發(fā)明專利技術(shù)的離體快繁方法，可以在短時間內(nèi)實現(xiàn)人工大量擴繁中華蓑蘚配子體。該項發(fā)明專利技術(shù)科研意義和實際利用價值明顯，可以為利用苔蘚植物指示和監(jiān)測大氣污染提供大量生長均一的理想試驗材料。同時，也可以源源不斷地為應(yīng)用苔蘚植物進(jìn)行園林造景提供豐富的種苗，如建立苔蘚園。
【技術(shù)實現(xiàn)步驟摘要】
本專利技術(shù)涉及一種利用植物組織培養(yǎng)技術(shù)進(jìn)行，屬于生物工程
。
技術(shù)介紹
木靈蘚科(Orthotrichaceae)養(yǎng)蘚屬(MacramitriumBridel)是泛熱帶分布的類群。中國的蓑蘚屬植物種類非常豐富，目前被接受的有40余種。其中中華蓑蘚(Macromitrium cavaleriei Card.&Ther.)是 Cardot 在 1906 基于 J.Cavalerie 從貴州(Kouy Techeou)采集的標(biāo)本描述的新種，記錄于我國西南地區(qū)狹窄的分布區(qū)域,該種的主要特點是樹附生，莖葉濕潤狀態(tài)下常反折或近貼莖，橢圓狀披針形到三角狀披針形，先端漸尖；枝葉線狀或卵圓狀披針形至披針形，多數(shù)漸尖或狹漸尖，有的枝葉闊漸尖；葉片中部和上部細(xì)胞膨脹狀，薄壁，細(xì)胞之間界線清楚，有2~4個小疣或近光滑無疣，葉片下部細(xì)胞菱形狀、長方形或亞條形狀，光滑或具有一單疣；內(nèi)苞葉橢圓形披針形，狹漸尖至長漸尖芒狀，鐘形蒴帽，具黃色毛。苔蘚植物是世界上重要的植物群之一，因為他的體積十分的小而且缺少俗名，它們的美麗和多樣性常常被人們忽略。全世界苔蘚植物數(shù)量現(xiàn)有23000多種，我國苔蘚植物種類也比較豐富，約有2800多種。苔蘚植物在生態(tài)環(huán)境方面有著自己獨特的作用。苔蘚植物能夠作為環(huán)境變化的綜合性指示植物，這是因為它們對于自然條件較為敏感，所以使得苔蘚植物成為監(jiān)測大氣污染的指示植物。苔蘚植物擁有很強大的吸水能力，尤其是當(dāng)密集叢生時，其吸水量高時可達(dá)植物體干重的15 — 20倍，而其蒸發(fā)量卻只有凈水表面的1/5。因此，在干旱地區(qū)通過種植苔蘚植物在土表結(jié)皮，防止土壤水分散失的同時又可起到固沙的重要的作用。隨著時代文明程度的提升，人們對于生態(tài)環(huán)境的要求，對于美的追求都越來越高。苔蘚，作為無維管束植物，在我們的生活中可謂是隨處可見，是十分具有觀賞性的綠色植物，其在園林造景方面有著自己的一席之地。園林中人們利用苔蘚植物結(jié)合其他造園要素，如山石，樹木，小品等，可以創(chuàng)造出一種充滿生活情趣的園林景觀。通過植物組織培養(yǎng)方式，建立中華蓑蘚快繁系統(tǒng)，既可以為利用中華蓑蘚指示和監(jiān)測大氣污染提供理想的試驗材料，也可以為應(yīng)用中華蓑蘚進(jìn)行園林綠化和造景提供豐富種源。目前現(xiàn)有技術(shù)中還沒有關(guān)于中華蓑蘚在試管瓶內(nèi)大量擴繁配子體的培養(yǎng)技術(shù)，也沒有通過利用中華蓑蘚孢朔離體培養(yǎng)獲得配子體的相關(guān)研究報道。
技術(shù)實現(xiàn)思路
本專利技術(shù)的目的在于提供一種利用植物組織培養(yǎng)技術(shù)，以填補現(xiàn)有技術(shù)的空白，實現(xiàn)人工大量快速擴繁中華蓑蘚配子體。為實現(xiàn)上述專利技術(shù)目的，本專利技術(shù)采用的技術(shù)方案如下: 本專利技術(shù)公開的組織培養(yǎng)快繁中華蓑蘚配子體的方法包括以下順序步驟:I)將中華蓑蘚孢蒴表面滅菌后，接種到無任何激素的改良Knop ' s培養(yǎng)基上，用無菌器械破碎孢蒴使孢子釋放，培養(yǎng)10天后，孢子萌發(fā)產(chǎn)生原絲體，再培養(yǎng)30天后，經(jīng)原絲體分化獲得配子體，培養(yǎng)條件為:溫度23±2°C，光照強度2000±2501x，光照時間14小時/天；所述無任何激素的改良Knop ' s培養(yǎng)基配方為:改良Knop ' s基本培養(yǎng)基+10g/L蔗糖+6g/L瓊脂粉，其中改良Knop ' s基本培養(yǎng)基配方為:KN03250mg/L、MgSO4.7H20250mg/L、KH2P04250mg/L、Ca (NO3) 2.4H201000mg/L、酒石酸氨 0.115mg/L、NaFe-EDTA36.7mg/L、MnS04.4Η2011.15mg/L、H3B033.lmg/L、K10.415mg/L、ZnS04 *7H204.3mg/L、CuSO4.5H200.0125mg/L、NaMoO4.2H200.125mg/L、CoCl2.6H200.0125mg/L ；2)將步驟I)培養(yǎng)得到的配子體單株接種到配子體增殖擴繁的培養(yǎng)基上，進(jìn)行培養(yǎng)30天，培養(yǎng)條件為:溫度23±2°C，光照強度2000±2501x，光照時間14小時/天；所述配子體增殖擴繁的培養(yǎng)基配方為:1/3MS基本培養(yǎng)基+10g/L蔗糖+6g/L瓊脂粉，其中MS基本培養(yǎng)基配方為:KN031900mg/L、NH4N031650mg/L、MgSO4.7H20370mg/L、KH2PO4170mg/L、CaCl2.2H20440mg/L、MnSO4.4H2022.3mg/L、ZnSO4.7H208.6mg/L、H3B036.2mg/L、K10.83mg/UNaMoO4.2H200.25mg/L、CuSO4.5H200.025mg/L、CoCl2.6H200.025mg/L、Na2_EDTA37.3mg/L、FeSO4.7H2027.8mg/L、NaFe_EDTA36.7mg/L、肌醇 100mg/L、甘氨酸 2.0mg/L、鹽酸硫胺素0.5mg/L、鹽酸吡哆鋅0.5mg/L、煙酸0.5mg/L ；1/3MS基本培養(yǎng)基是指大量元素化合物的用量為配方規(guī)定用量的1/3，其中大量元素化合物為:KN03、NH4NO3^ MgSO4.7H20、KH2PO4,CaCl2.2H20。步驟(1)中對孢蒴進(jìn)行表面滅菌的優(yōu)選滅菌劑組合和滅菌時間為75%體積分?jǐn)?shù)的酒精溶液30秒鐘和0.1 %質(zhì)量體積分?jǐn)?shù)的升汞溶液5分鐘。 步驟(1)中切取的孢蒴來源于野外生長的中華蓑蘚配子體上生長的孢蒴。上述步驟中的培養(yǎng)條件均優(yōu)選:溫度23°C，光照強度20001x，光照時間14小時/天。步驟2)中中華蓑蘚配子體大量擴繁的培養(yǎng)基pH為6.0。本專利技術(shù)的有益效果為:首次建立了，填補了現(xiàn)有技術(shù)的空白；并且，使用本專利技術(shù)的離體快速擴繁方法，極利于高度集約化和高密度工廠化生產(chǎn)，也利于自動化控制生產(chǎn)；在短時間內(nèi)可實現(xiàn)人工大量擴繁中華蓑蘚配子體，既可以為利用中華蓑蘚指示和監(jiān)測大氣污染提供理想的試驗材料，也可以為應(yīng)用中華蓑蘚進(jìn)行園林綠化和造景提供豐富種源。科研與應(yīng)用價值明顯。【具體實施方式】下面結(jié)合實施例對本專利技術(shù)作進(jìn)一步詳細(xì)、完整的說明:實施例1剪取生長于自然環(huán)境中的中華蓑蘚孢蒴進(jìn)行表面消毒，消毒劑為75%體積分?jǐn)?shù)的酒精溶液和0.1 %體積分?jǐn)?shù)的升汞溶液；消毒后，將無菌孢蒴里的孢子接種到無任何激素的改良Knop' S培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)，以獲得無菌原絲體，再培養(yǎng)30天后，經(jīng)原絲體分化獲得配子體。培養(yǎng)條件為:溫度23°C，光照強度20001x，光照時間14小時/天，培養(yǎng)10天后觀察培養(yǎng)結(jié)果。按常規(guī)方法制備75%體積分?jǐn)?shù)的酒精溶液和0.1 %質(zhì)量體積分?jǐn)?shù)的升汞溶液，用于中華蓑蘚配子體的表面滅菌，滅菌劑組合和滅菌時間為以下3種:a) 75%體積分?jǐn)?shù)的酒精溶液30秒鐘和0.1 %質(zhì)量體積分?jǐn)?shù)的升汞溶液3分鐘；b) 75%體積分?jǐn)?shù)的酒精溶液30秒鐘和0.1 %質(zhì)量體積分?jǐn)?shù)的升汞溶液5分鐘；c) 75%體積分?jǐn)?shù)的酒精溶液30秒鐘和0.1 %質(zhì)量體積分?jǐn)?shù)的升汞溶液10分鐘；按常規(guī)方法制備無任何激素的改良Knop' s培養(yǎng)基，用于誘導(dǎo)孢子萌發(fā)形成原絲體的培養(yǎng)。培養(yǎng)基配方組成為:改良Knop' s基本培養(yǎng)基+10g/L蔗糖+6g/L瓊脂粉。所述改良Knop ' s 基本培養(yǎng)基配方為:KN03250mg/L、MgSO4.7H20250mg/L、KH2P04250mg/L、Ca (NO3) 2.4H201000mg/L、酒石酸氨 0.115mg本文檔來自技高網(wǎng)...
【技術(shù)保護點】
一種離體快繁中華蓑蘚配子體的方法，其特征在于，所述方法包括以下順序步驟：1)將中華蓑蘚孢蒴表面滅菌后，接種到無任何激素的改良Knop′s培養(yǎng)基上，用無菌器械破碎孢蒴使孢子釋放，培養(yǎng)10天后，孢子萌發(fā)產(chǎn)生原絲體，再培養(yǎng)30天后，經(jīng)原絲體分化獲得配子體，培養(yǎng)條件為：溫度23±2℃，光照強度2000±250lx，光照時間14小時/天；所述無任何激素的改良Knop′s培養(yǎng)基配方為：改良Knop′s基本培養(yǎng)基+10g/L蔗糖+6g/L瓊脂粉，其中改良Knop′s基本培養(yǎng)基配方為：KNO3250mg/L、MgSO4·7H2O250mg/L、KH2PO4250mg/L、Ca(NO3)2·4H2O1000mg/L、酒石酸氨0.115mg/L、NaFe?EDTA36.7mg/L、MnSO4·4H2O11.15mg/L、H3BO33.1mg/L、KI0.415mg/L、ZnSO4·7H2O4.3mg/L、CuSO4·5H2O0.0125mg/L、NaMoO4·2H2O0.125mg/L、CoCl2·6H2O0.0125mg/L；2)將步驟1)培養(yǎng)得到的配子體單株接種到配子體增殖擴繁的培養(yǎng)基上，進(jìn)行培養(yǎng)30天，培養(yǎng)條件為：溫度23±2℃，光照強度2000±250lx，光照時間14小時/天；所述配子體增殖擴繁的培養(yǎng)基配方為：1/3MS基本培養(yǎng)基+10g/L蔗糖+6g/L瓊脂粉，其中MS基本培養(yǎng)基配方為：KNO31900mg/L、NH4NO31650mg/L、MgSO4·7H2O370mg/L、KH2PO4170mg/L、CaCl2·2H2O440mg/L、MnSO4·4H2O22.3mg/L、ZnSO4·7H2O8.6mg/L、H3BO36.2mg/L、KI0.83mg/L、NaMoO4·2H2O0.25mg/L、CuSO4·5H2O0.025mg/L、CoCl2·6H2O0.025mg/L、Na2?EDTA37.3mg/L、FeSO4·7H2O27.8mg/L、NaFe?EDTA36.7mg/L、肌醇100mg/L、甘氨酸2.0mg/L、鹽酸硫胺素0.5mg/L、鹽酸吡哆鋅0.5mg/L、煙酸0.5mg/L；1/3MS基本培養(yǎng)基是指大量元素化合物的用量為配方規(guī)定用量的1/3，其中大量元素化合物為：KNO3、NH4NO3、MgSO4·7H2O、KH2PO4、CaCl2·2H2O。...
【技術(shù)特征摘要】
1.一種離體快繁中華蓑蘚配子體的方法，其特征在于，所述方法包括以下順序步驟: 1)將中華蓑蘚孢蒴表面滅菌后，接種到無任何激素的改良Knop'S培養(yǎng)基上，用無菌器械破碎孢蒴使孢子釋放，培養(yǎng)10天后，孢子萌發(fā)產(chǎn)生原絲體，再培養(yǎng)30天后，經(jīng)原絲體分化獲得配子體，培養(yǎng)條件為:溫度23±2°C，光照強度2000±2501x，光照時間14小時/天；所述無任何激素的改良Knop ' s培養(yǎng)基配方為:改良Knop ' s基本培養(yǎng)基+10g/L蔗糖+6g/L瓊脂粉，其中改良Knop ' s基本培養(yǎng)基配方為:KN03250mg/L、MgSO4.7H20250mg/L、KH2P04250mg/L、Ca (NO3) 2.4H201000mg/L、酒石酸氨 0.115mg/L、NaFe-EDTA36.7mg/L、MnS04.4Η2011.15mg/L、H3B033.lmg/L、K10.415mg/L、ZnS04 *7H204.3mg/L、CuSO4.5H200.0125mg/L、NaMoO4.2H200.125mg/L、CoCl2.6H200.0125mg/L ； 2)將步驟I)培養(yǎng)得到的配子體單株接種到配子體增殖擴繁的培養(yǎng)基上，進(jìn)行培養(yǎng)30天，培養(yǎng)條件為:溫度23±2°C，光照強度2000±2501x，光照時間14小時/天；所述配子體增殖擴繁的培養(yǎng)基配方為:1/3MS基本培養(yǎng)基+10g/L蔗糖+6g/L瓊脂粉，其中MS基本培養(yǎng)基配方為:KN031900mg/L、NH4N031650mg/L、MgSO4.7H20370mg...
【專利技術(shù)屬性】
技術(shù)研發(fā)人員：婁玉霞，丁雪，郭水良，
申請(專利權(quán))人：上海師范大學(xué)，
類型：發(fā)明
國別省市：上海;31
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